發(fā)布時間：2018-06-15 07:18

  本文選題：胸腺五肽 + 肺部給藥�。� 參考：《沈陽藥科大學》2009年博士論文

【摘要】： 胸腺五肽(Thymopentin,TP5)是一個人工合成的寡肽,為胸腺生成素Ⅱ的免疫活性中心。TP5可誘導T細胞的分化、增殖和成熟,活化或調(diào)節(jié)不同T細胞亞群的數(shù)目和功能,實現(xiàn)對整個機體免疫系統(tǒng)的雙向調(diào)節(jié)。臨床上采用肌內(nèi)或靜脈注射給藥,用于惡性腫瘤、慢性肝炎、嚴重感染、糖尿病及自身免疫性疾病等的治療與輔助治療。本文研究了用于肺部給藥的TP5干粉吸入劑,可作為注射劑的替代給藥方式,以解決長期頻繁注射引起的患者依從性差的問題。 本文首先建立了包含制劑理化性質(zhì)和霧化性能兩類指標的干粉吸入劑質(zhì)量評價體系。制劑理化性質(zhì)包括引濕性、水分含量、粒子表面形態(tài)、粒度及其分布、密度和流動性的測定;霧化性能指標為排空率和體外沉積率。以掃描電鏡、激光散射、熱重分析及雙級液體碰撞器等作為分析手段。選擇HPLC法測定TP5含量,該方法專屬性好,重現(xiàn)性、精密度、回收率均符合規(guī)定,TP5在0.15 mg·mL~(-1)～2.25 mg·mL~(-1)濃度范圍內(nèi),濃度與峰面積線性關系良好,回歸方程及相關系數(shù)為A=910687·C-53447,r=0.9999。 采用肺灌洗法提取大鼠肺表面的酶,灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)收率大于80%,酶解反應重現(xiàn)性良好。實驗結果表明肺部酶對TP5有較強的水解能力,在稀釋10倍的BALF中TP5半衰期為49.2 min;稀釋300倍的BALF對TP5仍有水解能力,但反應速率降低。在選定的反應條件下,酶解反應呈零級過程。考察了常用的吸入劑添加劑,如乳糖、甘露醇、氨基酸、泊洛沙姆188及殼聚糖等對TP5酶解速率的影響,結果表明亮氨酸和苯丙氨酸可延長TP5的酶解半衰期至原來的2倍以上,分別為112.7 min和136.2 min;殼聚糖也有類似作用,可使TP5半衰期延長至85 min,且酶抑制效果與其分子量無關。上述輔料的酶抑制機制為:輔料分子與TP5分子在溶液中帶相反電荷,兩者通過靜電引力作用形成離子復合物;復合物可改變TP5分子的伸展性,并使空間位阻增加,從而阻礙了酶催化中心與TP5分子的結合,使酶解反應速率降低。經(jīng)分析可能有兩種肺酶參與TP5水解:中性內(nèi)肽酶從肽鏈的C末端水解掉兩個氨基酸殘基,氨肽酶從肽鏈N末端水解掉精氨酸。兩種酶解途徑中,內(nèi)肽酶的催化速率要高于氨肽酶。 制備了以甘露醇、乳糖和亮氨酸為載體的TP5普通干粉吸入劑,對不同處方組成的吸入劑的理化性質(zhì)及吸入性能進行考察,結果表明處方組成可顯著影響吸入劑的理化性質(zhì),進而影響粉末的霧化性能。流動性良好且具有較小空氣動力徑的輕質(zhì)粉末表現(xiàn)出較好的吸入效果。亮氨酸能降低粉末密度,提高干粉吸入劑體外沉積率。當處方中亮氨酸含量63%時,粉霧劑獲得較佳的霧化性能。另外,處方中加入少量F68可以顯著改善粉末的流動性。優(yōu)化的處方組成為TP5/甘露醇/亮氨酸=10/18/72,含2%的F68,其振實密度為0.31 g·cm~(-3),空氣動力徑為1.9μm,體外沉積率達為45%。 采用噴霧干燥法制備TP5殼聚糖微球,以收率、粉末流動性對處方進行初步評價,結果表明微球處方中必須加入一定量的亮氨酸才能滿足肺部吸入要求。優(yōu)選的處方為TP5/殼聚糖/亮氨酸=10/45/45,含2%F68。另外發(fā)現(xiàn)TP5在噴霧干燥過程中與殼聚糖相互作用,形成了不可逆的復合物,導致粉末中藥物含量下降至75%。 制備了含殼聚糖納米粒的TP5干粉吸入劑。首先利用離子凝膠化法制備TP5殼聚糖納米粒,對制備工藝進行單因素考察。以納米粒粒徑和包封率為指標,分別考察了CS和TPP溶液的濃度、CS與TPP質(zhì)量比、pH值和藥物加入量對納米粒質(zhì)量的影響,結果表明上述因素均對納米粒的粒徑和包封率均有影響。最終確定殼聚糖納米粒的處方為:CS:TPP為3:1,CS:TP5為2:1。納米粒粒徑為276.1±50.7 nm,包封率為17.2%,載藥量為5.4%。載藥納米粒的酶解實驗顯示TP5部分被物理包裹入納米粒,部分吸附于納米粒表面。將載藥的納米粒與亮氨酸以76:24的質(zhì)量比混合后噴霧干燥,制得含納米粒的干粉吸入劑。此干粉吸入劑與殼聚糖微球相比,粉末的流動性和排空率相當,但引濕性顯著下降。含量測定的結果顯示藥物百分含量提高至97%,表明將藥物載入納米粒后再噴霧干燥減少了TP5的損失。 在處方中藥物比例均為20%時,含高濃度亮氨酸的普通干粉吸入劑沉積率最高,達41.2%,殼聚糖微球的沉積率為25.4%,略高于含納米粒的干粉吸入劑(20.8%)。 采用多指標綜合評價法優(yōu)化TP5干粉吸入劑的制備工藝,極差分析結果表明,霧化壓力對吸入劑的質(zhì)量影響最大,其他工藝因素依次為干燥風速供液速度入口溫度,最佳工藝條件為霧化壓力:190 kPa;干燥風速:0.7 m~3·min~(-1);供液速度:7.0mL·min~(-1);入口溫度110℃。 應用HPLC結合微滲析法測定大鼠肺粘液中TP5的局部藥代動力學。實驗結果表明,微滲析探針的相對回收率與傳遞率不等,相對回收率較低,其平均值為3.7%。考察了大鼠氣管內(nèi)滴注TP5溶液及氣管內(nèi)給予不同處方組成的TP5干粉吸入劑后,TP5在肺粘液層中的濃度-時間變化情況。結果顯示,干粉吸入劑可迅速溶解于肺粘液中。經(jīng)過劑量校正后,普通干粉吸入劑、殼聚糖微球、含納米粒的干粉吸入劑在肺粘液中的AUC_(ELF)/dose分別為25.15±10.98,14.94±7.35和8.81±6.11,均大于溶液劑滴注的AUC_(ELF)/dose 1.55±1.02;干粉吸入劑在肺內(nèi)的滯留時間分別為8.92±1.19 min,10.71±1.18 min和8.94±2.74 min,高于溶液劑的6.71±1.49 min。說明粉末霧化給藥有效延長了TP5在肺部的滯留時間,有利于增加藥物的吸收。 進行了干粉吸入劑給藥后大鼠體內(nèi)的藥效學研究。以環(huán)磷酰胺為造模藥物,建立大鼠免疫抑制模型。分別以靜脈注射TP5及肺部吸入TP5的方式對免疫失衡大鼠進行治療。選擇外周血中T細胞亞群CD_4~+/CD_8~+比值作為檢測指標,采用流式細胞術對各組大鼠進行測定。實驗結果顯示,大鼠連續(xù)三天腹腔注射環(huán)磷酰胺后,血中CD_4~+/CD_8~+均值由正常的1.84下降至1.03,說明造模成功。免疫抑制大鼠經(jīng)過靜脈注射TP5或給予不同處方吸入劑干預后,其CD_4~+/CD_8~+均值分別恢復至2.29,1.94,1.52和1.81,說明肺部吸入TP5可產(chǎn)生與靜脈注射相同的療效。不同處方的干粉吸入劑療效與體外沉積率有一定相關性,處方組成為TP5/甘露醇/亮氨酸的粉末體外沉積率最高,治療效果最好。 考察大鼠肺部連續(xù)給予TP5干粉吸入劑的安全性,結果表明吸入劑對肺部有一定的刺激性。組織學檢查顯示支氣管及肺泡上皮的通透性有所改變,有炎性細胞浸潤,但無嚴重刺激性及成纖維細胞增生現(xiàn)象,損傷具有可恢復性。經(jīng)統(tǒng)計分析,含TP5/甘露醇/亮氨酸的干粉吸入劑及含殼聚糖納米粒的干粉吸入劑刺激性較小,與空白對照組相比無顯著性差異,說明這兩種處方的安全性更高。結合藥效學實驗結果,處方組成為TP5/甘露醇/亮氨酸=20/16/64(2%F68)和TP5納米粒/亮氨酸=74/26(含20%TP5,w/w)的TP5干粉吸入劑更適于肺部給藥。
[Abstract]:Thymopentin ( TP5 ) is an artificially synthesized oligopeptide . It is an immunoactive center of thyopoietin 鈪，

本文編號：2021186