本文選題：中國倉鼠卵巢細(xì)胞 + 新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶　； 參考：《中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào)》2015年05期

【摘要】：為了優(yōu)化中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO)表達(dá)體系,建立高表達(dá)CHO細(xì)胞株篩選方法,將外源基因表達(dá)載體上抗性篩選基因表達(dá)的新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶(NPT)的261位氨基酸天冬氨酸突變成甘氨酸。經(jīng)G418篩選,轉(zhuǎn)染含突變型NPT表達(dá)載體的細(xì)胞存活率顯著低于轉(zhuǎn)染含野生型NPT表達(dá)載體的細(xì)胞存活率。以綠色熒光蛋白-抗體Ig G1 Fc結(jié)構(gòu)域融合蛋白為報(bào)告基因,驗(yàn)證了突變后新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶對抗生素G418抗性減弱。經(jīng)G418持續(xù)加壓培養(yǎng)3周后,轉(zhuǎn)染含突變型NPT表達(dá)載體的細(xì)胞中EGFP的表達(dá)量顯著高于轉(zhuǎn)染含野生型NPT表達(dá)載體的細(xì)胞,表明其具有篩選出高表達(dá)單克隆細(xì)胞株的潛力。
[Abstract]:In order to optimize the expression system of Chinese hamster ovary cells ( CHO ) and to establish a high - expression CHO cell line screening method , the 261 - position amino acid aspartic acid of a new chloramphenicol phosphotransferase ( NPT ) expressed by the resistance screening gene on the exogenous gene expression vector was mutated into glycine . After 3 weeks of G418 selection , the expression of EGFP in the cells transfected with the mutant NPT expression vector was significantly higher than that transfected with the wild - type NPT expression vector .
【作者單位】： 中國藥科大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81430082)~~
【分類號】：R96;Q813

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本文編號：2013533