本文選題：氧化還原響應(yīng) + 殼聚糖�。� 參考：《浙江大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：納米給藥系統(tǒng)在腫瘤治療中的應(yīng)用發(fā)展迅速,但仍存在藥物泄露、載藥量低、靶向性不足等缺陷,因此有關(guān)智能型藥物遞釋系統(tǒng)的設(shè)計已逐漸成為藥劑學(xué)領(lǐng)域的研究熱點之一。環(huán)境響應(yīng)性藥物遞釋系統(tǒng)可針對腫瘤與正常組織的生理差異,將包封的藥物選擇性地富集于腫瘤組織,實現(xiàn)靶部位的環(huán)境響應(yīng)性藥物遞釋,提高抗腫瘤療效并降低毒副作用。利用腫瘤細(xì)胞內(nèi)外還原型谷胱甘肽(GSH)的濃度差異(100～1000倍),以及腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞之間的濃度差異(7～10倍),本研究旨在構(gòu)建一種選擇性響應(yīng)腫瘤細(xì)胞內(nèi)外氧化還原電位差的智能型藥物載體,實現(xiàn)藥物高效安全遞釋。本文的主要內(nèi)容如下：以二硫鍵為橋鏈,以殼聚糖為親水鏈、硬脂胺為疏水鏈,兩步法合成具有氧化還原響應(yīng)性的糖脂嫁接物CSO-ss-SA。CSO-ss-SA可在水性介質(zhì)中自聚集,形成類球形膠束,粒徑小于100nm。能夠在10mM GSH還原條件下發(fā)生膠束解聚,具有典型的還原敏感性。以紫杉醇(PTX)為模型藥物,透析法制備藥物遞釋系統(tǒng)(載藥納米粒,CSO-ss-SA/PTX),載藥量較高(-27%,w/w),可在10mM GSH還原條件下,快速釋放所包封的PTX。體外細(xì)胞攝取結(jié)果表明,CSO-ss-SA嫁接物膠束能夠被細(xì)胞快速攝取。以尼羅紅為模型藥物,分別與腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞共孵育12h,證實載藥納米粒可響應(yīng)特異性腫瘤細(xì)胞內(nèi)的氧化還原電位,實現(xiàn)藥物的高效釋放,而在正常細(xì)胞內(nèi)基本不釋放藥物。CSO-ss-SA/PTX的IC50值,分別為陽性對照泰素和非敏感糖脂嫁接物(CSO-SA)載藥納米粒的7.55%和13.2%,且與細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽濃度呈負(fù)相關(guān)。以荷瘤裸鼠為模型動物,證實嫁接物膠束具有腫瘤被動靶向性,能特異性響應(yīng)腫瘤組織及細(xì)胞內(nèi)高濃度的還原條件,在12h內(nèi)快速釋藥,且保持在正常組織內(nèi)72h內(nèi)基本不釋放狀態(tài)。模型動物抗腫瘤藥效結(jié)果表明,載藥納米粒抑瘤率為88.4%,明顯高于陽性對照的抑瘤率59.4%。本文構(gòu)建了基于CSO-ss-SA嫁接物膠束的共遞釋系統(tǒng),分別用于遞釋PTX和小分子干擾RNA(siRNA).含陽離子的CSO-ss-SA嫁接物膠束,可有效密接siRNA,并在lOmM GSH還原條件下快速釋放所密接的siRNA。嫁接物能有效遞釋siRNA至腫瘤細(xì)胞,具有內(nèi)-溶酶體逃逸功能。通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移及分子信標(biāo)技術(shù)證實,嫁接物可特異性響應(yīng)細(xì)胞內(nèi)氧化還原電位差而釋放出siRNA,并實現(xiàn)了有效的沉默細(xì)胞內(nèi)靶基因表達(dá)(85.8%)。以腫瘤細(xì)胞及其耐藥細(xì)胞為模型細(xì)胞,CSO-ss-SA嫁接物膠束包封PTX并同時密接特異性針對B細(xì)胞淋巴瘤(Bcl-2)靶序列的siRNA,共遞釋系統(tǒng)主要通過高效的細(xì)胞周期協(xié)同阻滯效應(yīng),實現(xiàn)協(xié)同增效治療,并體現(xiàn)出克服耐藥作用。為減少網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬,進(jìn)一步提高抗腫瘤療效,本文構(gòu)建了PEG化的二硫鍵糖脂嫁接物(PEG-CSO-ss-SA)作為基因治療載體,應(yīng)用于pDNA的遞釋。PEG-CSO-ss-SA膠束可有效密接pDNA,并保護(hù)pDNA免受核酶降解,可響應(yīng)lOmM GSH還原條件,快速釋放所密接的DNA。PEG的表面修飾明顯降低巨噬細(xì)胞的吞噬,使嫁接物膠束的腫瘤細(xì)胞攝取速率略有降低,并能有效轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞,其轉(zhuǎn)染效率與陽性對照脂質(zhì)體相當(dāng)。PEG-CSO-ss-SA嫁接物膠束可遞釋表達(dá)野生型p53質(zhì)粒,有效上調(diào)細(xì)胞內(nèi)p53表達(dá),并誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,且其誘導(dǎo)凋亡的能力與細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽濃度呈正相關(guān)。體內(nèi)研究表明,PEG修飾后可延長嫁接物膠束在體內(nèi)的循環(huán)時間,增加其在腫瘤部位的蓄積。尾靜脈注射PEG-CSO-ss-SA密接p53質(zhì)粒復(fù)合物,可檢測到腫瘤內(nèi)質(zhì)粒表達(dá),并通過腫瘤切片染色證實其促腫瘤細(xì)胞凋亡能力。
[Abstract]:A new type of drug delivery system , CSO - ss - SA / PTX , has been developed rapidly in the presence of tumor cells and normal cells . PEG - CSO - ss - SA ( PEG - CSO - ss - SA ) was used as a gene therapy vector .
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R943

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本文編號：1938231