本文選題：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 + B細(xì)胞　； 參考：《安徽醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種慢性系統(tǒng)性自身免疫性疾病,其病理特征主要表現(xiàn)為滑膜炎癥和關(guān)節(jié)侵蝕。目前RA發(fā)病機(jī)制仍不清楚,研究表明B細(xì)胞在RA的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮重要作用。B細(xì)胞活化因子(B cell activating factor of TNF family,BAFF)是維持體內(nèi)B細(xì)胞穩(wěn)態(tài)重要細(xì)胞因子,能夠促進(jìn)B細(xì)胞存活、分化和活化。BAFF有三個(gè)受體:B細(xì)胞活化因子受體(B cell activating factor of the TNF family receptor,BAFF-R)、B細(xì)胞成熟抗原(B cell maturation antigen,BCMA)和跨膜蛋白活化因子鈣離子信號(hào)調(diào)節(jié)親環(huán)素配體(transmembrane activator and calciummodulator and cyclophilin ligand interactor,TACI)。BAFF過(guò)表達(dá)與RA等自身免疫性疾病發(fā)病機(jī)制和疾病進(jìn)程密切相關(guān)。BAFF通過(guò)結(jié)合其受體激活介導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。那么在RA病程中,BAFF是否通過(guò)其受體介導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路參與B細(xì)胞活化?目前少有報(bào)道。CP-25是芍藥苷結(jié)構(gòu)修飾單體化合物。課題組前期研究表明CP-25對(duì)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎有明顯治療作用。CP-25還通過(guò)下調(diào)CD40、CD80、CD83、CD86和MHC-Ⅱ的表達(dá)來(lái)抑制由前列腺素E2或腫瘤壞死因子α刺激的樹(shù)突狀細(xì)胞的成熟。那么,CP-25對(duì)實(shí)驗(yàn)性關(guān)節(jié)炎治療作用是否與其調(diào)節(jié)異常活化的B細(xì)胞功能有關(guān)?CP-25對(duì)異�；罨疊細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)是否與其調(diào)控BAFF/BAFF受體介導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路有關(guān)?CP-25與目前臨床使用治療RA的生物制劑依那西普(Etanercept)或利妥昔單抗(Rituximab)對(duì)B細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)有怎樣的異同點(diǎn)?這些都是本課題要解決的重要問(wèn)題。本研究中,我們觀察了RA患者血清中BAFF水平、B細(xì)胞上BAFF受體及經(jīng)典和非經(jīng)典NF-κB信號(hào)通路的活化情況,并分析了BAFF水平與臨床和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)之間的相關(guān)性。體外建立了BAFF刺激的活化B細(xì)胞模型,我們檢測(cè)了經(jīng)BAFF刺激的B細(xì)胞上BAFF受體及BAFF介導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路的變化。同時(shí)我們觀察了CP-25對(duì)BAFF刺激的B細(xì)胞功能及BAFF介導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路的影響。并比較了CP-25和目前臨床使用治療RA的生物制劑(Etanercept或Rituximab)對(duì)B細(xì)胞功能調(diào)節(jié)的作用特點(diǎn)。目的:(1)闡明在RA病程中,BAFF介導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路參與B細(xì)胞活化的機(jī)制。(2)明確CP-25對(duì)BAFF與其受體介導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路的調(diào)控作用。(3)比較CP-25和生物制劑(Etanercept或Rituximab)對(duì)異�；罨腂細(xì)胞功能調(diào)控的作用特點(diǎn)。方法:入選RA患者,在入組時(shí)評(píng)價(jià)臨床和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。收集RA患者和健康對(duì)照(healthy controls,HCs)的血液樣品。人淋巴細(xì)胞分離液分離外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),免疫磁珠陽(yáng)性分選B細(xì)胞。線性回歸分析BAFF水平與臨床變量或?qū)嶒?yàn)室參數(shù)之間的相關(guān)性;ELISA法檢測(cè)血清中BAFF水平;蛋白芯片技術(shù)檢測(cè)免疫球蛋白水平和細(xì)胞因子水平。體外,人淋巴細(xì)胞分離液分離正常健康人PBMCs。用BAFF(100ng/ml)和CP-25(10-5mol/L)或Etanercept(10μg/ml)或Rituximab(5μg/ml)處理后,CCK-8檢測(cè)B細(xì)胞的增殖;流式細(xì)胞術(shù)分析B細(xì)胞亞群和BAFF受體(BAFFR、BCMA和TACI)的表達(dá);Western blotting分析信號(hào)通路中蛋白MKK3、MKK6、P-p38、P-p65、TRAF2和p100/52的表達(dá)。結(jié)果:1.BAFF與其受體介導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路參與RA中B細(xì)胞活化1.1.RA血清中免疫球蛋白和細(xì)胞因子的水平高于正常人與HCs組相比,RA患者血清中Ig A、Ig E、Ig D、Ig G1、Ig G2、Ig G4水平升高;IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、IL-4和IL-13水平明顯升高。尤其是,IL-1α、IL-4和TNF-α的水平升高更明顯。Ig M和IL-10水平無(wú)差異顯著性。1.2.RA患者中B細(xì)胞亞群異�；罨cHCs組相比,RA患者中CD19+B細(xì)胞、CD19+CD27+B細(xì)胞、CD19+CD20+CD27+B細(xì)胞和CD19+CD20-CD27+B細(xì)胞的百分比顯著增加。1.3.RA患者中B細(xì)胞上BAFF三個(gè)受體表達(dá)高于正常人與HCs相比,RA患者中CD19+BAFFR+B細(xì)胞、CD19+BCMA+B細(xì)胞和CD19+TACI+B細(xì)胞的百分比顯著增加。1.4.BAFF水平與RA患者中的實(shí)驗(yàn)室和臨床指標(biāo)的相關(guān)性RA患者中的BAFF水平明顯高于HCs組。RA患者和HCs中BAFF的濃度分別為270±24 pg/ml和192±9 pg/ml。兩組之間有顯著性差異(p=0.008)。BAFF水平與RF(p=0.03)和CRP(p=0.003)的實(shí)驗(yàn)室參數(shù)之間存在顯著相關(guān)性。BAFF水平與DAS28、SJC或TJC之間也有相關(guān)性。但BAFF水平與抗CCP抗體無(wú)關(guān)。1.5.RA患者B細(xì)胞中BAFF介導(dǎo)的信號(hào)通路中信號(hào)分子的表達(dá)情況與HCs組相比,RA患者中MKK3、MKK6、P-p38、P-p65、TRAF2和p52表達(dá)增高,RA中p100表達(dá)下降。2.CP-25下調(diào)BAFF與其受體介導(dǎo)NF-κB信號(hào)通路調(diào)控B細(xì)胞功能2.1.CP-25抑制B細(xì)胞增殖與Control組相比,BAFF促進(jìn)B細(xì)胞增殖。與BAFF組相比,CP-25、Rituximab和Etanercept均能抑制B細(xì)胞增殖,三個(gè)藥物之間沒(méi)有差異顯著性。2.2.CP-25下調(diào)活化B細(xì)胞亞群與Control組相比,BAFF能增加CD19+B細(xì)胞、CD19+CD20+B細(xì)胞、CD19+CD27+B胞和CD19+CD20+CD27+B細(xì)胞的百分比和數(shù)目。與BAFF組相比,CP-25能下調(diào)CD19+B細(xì)胞、CD19+CD20+B細(xì)胞、CD19+CD27+B細(xì)胞和CD19+CD20+CD27+B細(xì)胞的百分比和數(shù)目,與Control組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與CP-25組相比,Rituximab和Etanercept過(guò)度抑制CD19+B細(xì)胞、CD19+CD20+B細(xì)胞、CD19+CD27+B細(xì)胞和CD19+CD20+CD27+B細(xì)胞百分比和數(shù)目,明顯低于Control組和CP-25組,比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.3.CP-25下調(diào)CD19+BAFFR+B細(xì)胞、CD19+BCMA+B細(xì)胞和CD19+TACI+B細(xì)胞百分含量與Control組相比,BAFF顯著上調(diào)CD19+BAFFR+B細(xì)胞、CD19+BCMA+B細(xì)胞和CD19+TACI+B細(xì)胞百分含量。與BAFF組相比,CP-25下調(diào)CD19+BAFFR+B細(xì)胞、CD19+BCMA+B細(xì)胞和CD19+TACI+B細(xì)胞百分含量,與Control組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Rituximab和Etanercept過(guò)度抑制CD19+BAFFR+B細(xì)胞和CD19+BCMA+B細(xì)胞百分含量,并使CD19+BAFFR+B細(xì)胞百分含量明顯低于Control組和CP-25組,比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.4.CP-25對(duì)B細(xì)胞中MKK3、TRAF2、P-p38、P-p65和p100/52表達(dá)的影響與Control組相比,BAFF能夠上調(diào)MKK3、TRAF2、P-p38、P-p65和p52的表達(dá)。與BAFF組相比,CP-25、Rituximab可顯著下調(diào)BAFF刺激的B細(xì)胞中升高的MKK3、P-p38、P-p65、TRAF2和p52的表達(dá)。Etanercept也可顯著降低BAFF誘導(dǎo)的MKK3、P-p38、P-p65和p52的表達(dá)。結(jié)論:1.高水平的BAFF通過(guò)其受體介導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路參與RAB細(xì)胞的異�；罨�2.RA血清中升高的BAFF水平與RA的疾病活動(dòng)度相關(guān)。3.BAFF可能作為診斷和治療RA的一種新的生物標(biāo)志物。4.CP-25對(duì)B細(xì)胞功能的適度下調(diào)可能與其調(diào)節(jié)NF-κB信號(hào)通路有關(guān)。5.Etanercept和Rituximab過(guò)度抑制BAFF刺激的B細(xì)胞功能,其對(duì)B細(xì)胞功能的影響明顯強(qiáng)于CP-25。提示了這可能是其臨床治療產(chǎn)生不良反應(yīng)的機(jī)制之一。6.CP-25可能是有前景的抗炎免疫軟調(diào)節(jié)藥物。
[Abstract]:B cell activating factor of TNF family ( BAFF ) plays an important role in the pathogenesis of RA . BAFF has three receptors : B cell activating factor of the TNF family receptor ( BAFF - R ) , B cell activating factor of the TNF family receptor ( BAFF - R ) , B cell activating factor of the TNF family receptor ( BAFF - R ) , B cell maturation antigen ( BCMA ) and transmembrane protein activation factor calcium ion signal to regulate cyclophilin ligand interactor ( TACI ) . The effect of CP - 25 on B - cell function mediated by BAFF / BAFF receptor and activation of BAFF - mediated NF - 魏B signal pathway was studied in this study . The effect of CP - 25 on B - cell function mediated by BAFF / BAFF receptor and activation of BAFF - mediated NF - 魏B signal pathway was also investigated . The levels of serum IgG , IgM , IL - 6 , IL - 8 , TNF - 偽 , IFN - 緯 , MCP - 1 , IL - 4 and IL - 13 in patients with RA were significantly higher than those in normal controls . Compared with control group , the level of BAFF in RA patients was significantly higher than that of control group , but BAFF could decrease the percentage and number of CD27 + B cells , CD 19 + CD27 + B cells and CD 19 + CD20 + CD27 + B cells . Conclusion : 1 . A high level of BAFF may be used as a new biomarker for the diagnosis and treatment of RA . 3 . BAFF may be used as a new biomarker for the diagnosis and treatment of RA .
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R96

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 魏偉;;炎癥免疫反應(yīng)軟調(diào)節(jié)[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);2016年03期

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本文編號(hào)：1914274