應(yīng)用膜片鉗技術(shù)檢測藥物對HERG通道抑制作用的實驗過程及要點
發(fā)布時間:2018-05-07 00:42
本文選題:HERG通道 + 離子通道; 參考:《軍事醫(yī)學(xué)》2015年11期
【摘要】:目的應(yīng)用膜片鉗技術(shù)檢測藥物對人類ether-a-go-go相關(guān)基因(human ether-a-go-go-related gene,HERG)編碼的鉀離子通道的作用。探討離子電流記錄過程及實驗要點。方法選擇穩(wěn)定轉(zhuǎn)染并表達人源心肌HERG離子通道的HEK293細胞,通過全細胞記錄方式,記錄HERG電流。結(jié)果成功記錄到HERG步階電流和尾電流,步階電流的Ⅰ-Ⅴ曲線表現(xiàn)為特征性的倒鐘形結(jié)構(gòu),尾電流在去極化時迅速上升,在+10 m V時接近峰值。陽性藥物E-4031能明顯阻斷HERG電流。檢測的化合物A對HERG電流具有抑制效應(yīng),半數(shù)抑制濃度IC50為109μmol/L。結(jié)論體外HERG實驗可直接檢測藥物對HERG電流的抑制作用,膜片鉗的正確操作及電流記錄是實驗成敗的關(guān)鍵因素。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of patch clamp technique on potassium channel encoded by human ether-a-go-go-related gene Herg (HERG). The process of ion current recording and the main points of experiment are discussed. Methods HEK293 cells transfected stably and expressed human myocardial HERG ion channel were selected. The HERG currents were recorded by whole-cell recording. Results the step current and tail current of HERG were recorded successfully. The I-V curves of the step current showed a characteristic inverted bell structure. The tail current rose rapidly at depolarization and approached the peak value at 10 MV. The positive drug E-4031 could significantly block the HERG current. Compound A has inhibitory effect on HERG current, and the half inhibitory concentration of IC50 is 109 渭 mol 路L ~ (-1) 路L ~ (-1). Conclusion in vitro HERG assay can directly detect the inhibitory effect of drugs on HERG current. The correct operation of patch clamp and the recording of current are the key factors to the success of the experiment.
【作者單位】: 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院疾病預(yù)防控制所毒理學(xué)評價研究中心;
【基金】:國家科技重大專項資助項目(2009ZX09501-034)
【分類號】:R96
【參考文獻】
相關(guān)期刊論文 前1條
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【共引文獻】
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本文編號:1854660
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