本文選題：阿德福韋酯 + Hep��； 參考：《解放軍醫(yī)學(xué)雜志》2017年09期

【摘要】：目的觀察Hep G2.2.15細胞在不同濃度阿德福韋酯(ADV)持續(xù)誘導(dǎo)下發(fā)生經(jīng)典耐藥突變的情況,并探討其產(chǎn)生耐藥的機制。方法用不含或含0.01、0.1、1.0μmol/L ADV的培養(yǎng)基于12孔板中培養(yǎng)Hep G2.2.15細胞,每3d傳代,共培養(yǎng)至110代,分別抽提細胞和上清中的HBV DNA,每10代取樣1次。以不降解質(zhì)粒的ATP依賴性DNA酶消化+滾環(huán)擴增+跨缺口PCR方法和單管巢式PCR方法分別擴增細胞內(nèi)HBV ccc DNA和上清中HBV DNA的反轉(zhuǎn)錄酶(RT)區(qū)。以PCR產(chǎn)物直接測序結(jié)合克隆測序法(20個克隆/樣本)分析細胞內(nèi)HBV ccc DNA和上清HBV DNA的RT區(qū)是否產(chǎn)生經(jīng)典ADV耐藥突變。結(jié)果未經(jīng)藥物處理的對照組持續(xù)穩(wěn)定表達HBV DNA。0.01μmol/L ADV組和0.1μmol/L ADV組隨著ADV干預(yù)時間的延長,細胞內(nèi)總HBV DNA、ccc DNA及上清中HBV DNA的載量持續(xù)下降。0.01μmol/L ADV組細胞內(nèi)和上清中至110代仍未檢測出耐藥變異,0.1μmol/L ADV組細胞內(nèi)和上清中在110代時檢測到RT區(qū)發(fā)生rt A181V+N236T變異。1.0μmol/L ADV組由于細胞生長受到抑制于第15代時停止培養(yǎng)。結(jié)論 Hep G2.2.15細胞內(nèi)存在HBV ccc DNA循環(huán)池,用含適量濃度ADV的培養(yǎng)基持續(xù)培養(yǎng)可以誘導(dǎo)Hep G2.2.15細胞發(fā)生經(jīng)典耐藥突變。
[Abstract]:Objective to observe the occurrence of classical drug resistance mutation in Hep G2.2.15 cells induced by different concentrations of adefovir dipivoxil, and to explore the mechanism of drug resistance. Methods Hep G2.2.15 cells were cultured in 12-well plate with or without 0.1 渭 mol/L ADV of 0.1 渭 mol/L ADV. The cells were subcultured every 3 days and cultured to 110th generation. The HBV DNA of cells and supernatants were extracted and sampled once every 10 generations. The reverse transcriptase region of HBV ccc DNA in cell and HBV DNA in supernatant was amplified by ATP dependent DNA enzyme digestion and rolling loop amplification method and single tube nested PCR method, respectively. Direct sequencing of PCR products and cloning sequencing (20 clones / samples) were used to analyze whether the RT region of HBV ccc DNA and supernatant HBV DNA produced classical ADV resistant mutations. Results HBV DNA.0.01 渭 mol/L ADV group and 0.1 渭 mol/L ADV group continued to express HBV DNA.0.01 渭 mol/L ADV and 0.1 渭 mol/L ADV with the prolongation of ADV intervention time. The intracellular and supernatant HBV DNA load of total HBV DNA CCC DNA and supernatant decreased continuously .0.01 渭 mol/L ADV group and the medium to 110th generation of supernatant did not detect the resistance mutation in 0.1 渭 mol/L ADV group and supernatant. RT region 181V N236T mutation. 1.0 渭 mol/L ADV was detected in RT region at 110th generation. The cells in the group were inhibited from culture at the 15 th generation. Conclusion there is a HBV ccc DNA cycle cell in Hep G2.2.15 cells. The classical drug-resistant mutation of Hep G2.2.15 cells can be induced by continuous culture medium containing appropriate concentration of ADV.
【作者單位】： 桂林醫(yī)學(xué)院研究生院;解放軍302醫(yī)院臨床研究管理中心;
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項目(81371852)~~
【分類號】：R96

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本文編號：1847817