本文選題：卵黃高磷蛋白 + 抗菌肽　； 參考：《中國海洋大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：脂多糖lipopolysaccharide (LPS)又稱為內(nèi)毒素,是革蘭氏陰性細(xì)胞細(xì)胞壁的重要組成部分,是一種高度保守的病原相關(guān)分子模式pathogen-associated molecular parttems (PAMPs)。LPS可以通過誘導(dǎo)促炎因子的上調(diào)表達(dá)進(jìn)而引發(fā)宿主細(xì)胞的炎癥反應(yīng)。炎癥因子的過量表達(dá)最終會導(dǎo)致膿毒癥的發(fā)生,嚴(yán)重時可導(dǎo)致宿主死亡。由于目前臨床上還沒有治療LPS引起的膿毒癥特效藥物,因此,尋找可以阻止LPS對宿主先天性免疫反應(yīng)的激活的新型試劑是非常必要與急切的。在本研究中,我們鑒定出兩種潛在的內(nèi)毒素中和劑-Pt5和紅景天苷,并且探討了它們的作用機(jī)制。卵黃蛋白原的功能在早期一直被認(rèn)為在胚胎發(fā)育提供中提供營養(yǎng)物質(zhì),我們在近期的研究中發(fā)現(xiàn)它還有免疫功能。卵黃高磷蛋白是卵黃蛋白原降解衍生蛋白質(zhì)之一。我們實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)重組的斑馬魚卵黃高磷蛋白具有一定的LPS中和作用,它可以結(jié)合病原相關(guān)分子模式LPS、脂磷壁酸(LTA)和肽聚糖(PGN),并有著一定的抑菌功能。為了尋找卵黃高磷蛋白的抑菌活性中心,我們在之前的研究中采用氨基端截短表達(dá)的方法,發(fā)現(xiàn)羧基端的55個氨基酸(Pt5)殘基仍有一定的免疫活性。本研究對Pt5進(jìn)行了LPS中和活性的研究。我們對Pt5進(jìn)行了定點(diǎn)突變,找出了比Pt5具有更高抑菌活性的多肽Pt5e,并確定了Pt5e與Pt5一樣具有廣譜的抑菌活性,在較低的濃度下即可抑制革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌的生長。通過酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)證明重組Pt5可以與LPS和LTA結(jié)合。為了驗(yàn)證將來Pt5e能否應(yīng)用于人類疾病上,我們使用MTT和溶血實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證了Pt5e對小鼠巨噬細(xì)胞(RAW264.7)不具有細(xì)胞毒性并且對人類血紅細(xì)胞不具有溶血活性。我們使用LPS和Pt5e處理RAW264.7,通過ELISA檢測細(xì)胞上清的炎癥因子TNF-α和IL-1p的含量,發(fā)現(xiàn)Pt5e可以顯著降低這兩種炎癥因子水平。接下來,我們將LPS和Pt5e腹腔注射到小鼠體內(nèi),一定時間后檢測小鼠血清中炎癥因子TNF-α和IL-1p的濃度發(fā)現(xiàn)Pt5e也顯著降低了血清中這兩種炎癥因子濃度,說明Pt5e具有體內(nèi)和體外中和LPS的功能。在使用半致死實(shí)驗(yàn)驗(yàn)Pt5e是否對膿毒癥小鼠起到保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)中,我們發(fā)現(xiàn)Pt5e有效的提高膿毒癥小鼠的存活率(p0.05)。體內(nèi)試驗(yàn)表明在腹腔同時注射LPS和Pt5e的小鼠組其抑制膿毒癥的能力顯著高于僅注射LPS的對照小鼠組。本研究表明Pt5e不僅可以抑制病原菌的生長,還具有LPS中和作用,這一發(fā)現(xiàn)有助于新型的臨床抗膿毒癥藥物的開發(fā)。紅景天苷是一種存在于紅景天植物根莖中的葡萄糖苷。我們實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在中,紅景天苷可以促進(jìn)老齡大鼠的免疫應(yīng)答,提高其抗氧化能力,從而發(fā)揮其抗衰老的作用。本研究發(fā)現(xiàn)紅景天苷可以抑制LPS誘發(fā)的炎癥反應(yīng)。紅景天苷可以有效地抑制炎癥因子Ⅱ類反式激活因子(CIITA)、環(huán)氧合酶-2(COX-2)、一氧化氮合酶(iNOS)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子a(TNF-a)等炎癥相關(guān)因子的表達(dá)。為了解析紅景天苷抑制LPS誘發(fā)炎癥反應(yīng)的機(jī)制,我們檢測了三條已報(bào)道的可被LPS誘發(fā)的炎癥通路(MAPK、 JAK-STAT和PI3-K-Akt信號通路)中部分關(guān)鍵因子的蛋白表達(dá)水平和磷酸化水平。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明紅景天苷可以顯著降低PI3-K-Akt通路中的Akt磷酸化水平和NF-κB通路中的NF-κB磷酸化水平(p0.05),而對MAPK和JAK-STAT中的關(guān)鍵因子并沒有影響。與此相一致,通過抑制PI3-K-Akt通路中的上游因子P13-K后發(fā)現(xiàn),紅景天苷對Akt和NF-κB磷酸化水平的抑制水平顯著降低�；谏鲜鰧�(shí)驗(yàn),我們得知景天苷可以通過阻斷PI3-K-Akt信號通路的方式抑制來抑制LPS誘發(fā)的炎癥反應(yīng)。這一研究表明紅景苷有可能成為治療膿毒癥的輔助藥物。
[Abstract]:In this study , we identified two potential anti - inflammatory cytokines , such as LPS , lipopephosphonic acid ( lta ) and peptidoglycan ( PGN ) .

【學(xué)位授予單位】：中國海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R915

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