本文選題：縫隙連接蛋白 + CX-30　； 參考：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：目的觀察鞘內(nèi)注射針對(duì)脊髓縫隙連接蛋白-30(CX-30)的小干擾RNA(siRNA)對(duì)正常大鼠嗎啡耐受形成的影響及相關(guān)的分子機(jī)制。方法選取48只雄性Sprague Dawley大鼠,體重區(qū)間180-220 g,隨機(jī)分成4組(n=12):空白對(duì)照組(Ⅰ組)、嗎啡耐受組(Ⅱ組)、錯(cuò)配si RNA對(duì)照組(Ⅲ組)、CX-30 si RNA處理組(Ⅳ組),所有大鼠鞘內(nèi)置管,恢復(fù)后鞘內(nèi)注射利多卡因確定導(dǎo)管位置并記為第0天。第1天8:00-10:00,在安靜的室內(nèi)環(huán)境下檢測(cè)四組大鼠的熱刺激縮足反應(yīng)基礎(chǔ)潛伏期(PWTL)記為P1,隨后背部皮下注射嗎啡5 mg/kg,30 min后再次檢測(cè)PWTL,并記為P2,計(jì)算嗎啡30 min的最大可能鎮(zhèn)痛效應(yīng)百分比%MPE。第2-8天8:30,Ⅰ、Ⅱ組鞘內(nèi)注射DPEC溶劑15μl,Ⅲ組鞘內(nèi)注射錯(cuò)配si RNA 15μl,Ⅳ組鞘內(nèi)注射CX-30si RNA 15μl;9:00及17:00Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組背部皮下注射嗎啡10 mg/kg,Ⅰ組注射等量生理鹽水。第9天行為學(xué)測(cè)試計(jì)算%MPE,方法同第1天。隨后處死大鼠取L4-L6段脊髓采用Western blot法檢測(cè)CX-30、ERK及p-ERK蛋白的表達(dá),免疫熒光染色檢測(cè)脊髓背根神經(jīng)節(jié)及背角GFAP的表達(dá)。結(jié)果第9天,四組大鼠P1值無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);但其余三組與Ⅰ組大鼠比較,P2值及%MPE值顯著降低(P0.05);其中Ⅲ組與Ⅱ組大鼠比較,P2值及%MPE值無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);而Ⅳ組與Ⅱ組大鼠比較,P2值及%MPE值顯著升高(P0.05)。2.免疫印跡結(jié)果顯示:四組大鼠脊髓內(nèi)總ERK表達(dá)量無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);但其余三組與Ⅰ組大鼠比較,p-ERK及CX30表達(dá)量顯著升高(P0.05);其中Ⅲ組與Ⅱ組大鼠比較,p-ERK及CX 30的表達(dá)量無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);而Ⅳ組與Ⅱ組大鼠比較,p-ERK及CX 30的表達(dá)量顯著降低(P0.05)。3.免疫熒光結(jié)果顯示:其余三組與Ⅰ組大鼠比較,脊髓內(nèi)GFAP表達(dá)量較高(P0.05);其中Ⅱ組與Ⅲ組大鼠GFAP表達(dá)最多,比較無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);而Ⅳ組與Ⅱ組大鼠比較,GFAP表達(dá)量較少(P0.05)。結(jié)論鞘內(nèi)注射針對(duì)脊髓CX-30的siRNA可以部分緩解正常大鼠嗎啡耐受的形成,其機(jī)制可能與抑制脊髓背根神經(jīng)節(jié)及背角星形膠質(zhì)細(xì)胞之間CX30的表達(dá),ERK磷酸化的下調(diào),抑制星形膠質(zhì)細(xì)胞的激活有關(guān)。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of intrathecal injection of small interference RNA-siRNAs targeting gap junction protein-30 (CX-30) on morphine tolerance in normal rats and its molecular mechanism. Methods Forty eight male Sprague Dawley rats were randomly divided into 4 groups: blank control group (group 鈪，

本文編號(hào)：1832534