本文選題：近交系和封閉群Wistar大鼠 + 糖皮質(zhì)激素性骨骼肌萎縮(GIMA)�。� 參考：《廣東藥科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的建立近交系和封閉群Wistar大鼠糖皮質(zhì)激素性骨骼肌萎縮(Glucocorticoid induced skeletal muscle atrophy,GIMA)模型并比較兩種品系大鼠GIMA模型的差異。觀察GIMA模型大鼠腓腸肌組織糖皮質(zhì)激素受體(Glucocorticoid receptor,GR)、α-上皮鈉離子通道(α-Epithelial sodium channel,α-ENaC)和肌萎縮盒F基因(muscle atrophy F-box,MAFbx)mRNA含量的變化,從整體動(dòng)物水平探究ENaC在GIMA發(fā)病中的作用。觀察體外培養(yǎng)成肌細(xì)胞C2C12在地塞米松(dexamethasone,Dex)和ENaC特異性阻斷劑——阿米洛利(Amilorid,Ami)干預(yù)下增殖和分化變化,從細(xì)胞水平探究ENaC功能變化對(duì)GC影響骨骼肌細(xì)胞再生的可能作用。方法近交系和封閉群Wistar大鼠各32只分別隨機(jī)分為4組給藥:對(duì)照組(C組)肌注生理鹽水1.0 mg/kg,每周3次;低頻組(L組)、中頻組(M組)和高頻組(H組)分別每周1、3、5次肌注Dex 1.0 mg/kg,給藥90天。取大鼠右側(cè)腓腸肌進(jìn)行石蠟切片和HE染色,檢視肌纖維的形態(tài)及橫截面積變化;取左側(cè)腓腸肌進(jìn)行冰凍切片和肌纖維分型染色,觀察Ⅰ、Ⅱ兩型纖維變化,并提取總RNA進(jìn)行RT-PCR及q-PCR檢測(cè)GR、α-ENaC和MAFbx基因mRNA含量變化。用CCK-8法及肌管直徑測(cè)量法分別檢測(cè)不同濃度Dex(5×10-7M~1.5×10-4M)和Ami(10-5M)單獨(dú)及聯(lián)合用藥對(duì)體外培養(yǎng)小鼠成肌細(xì)胞C2C12增殖和分化的影響。結(jié)果(1)兩種品系大鼠M和H組體重較C組、L組顯著減少(P0.01)。(2)兩種品系大鼠H組腓腸肌系數(shù)較C組(P0.01)、L組均顯著降低(P0.05)。(3)近交系大鼠M組和H組肌纖維橫截面積均較C組、L組顯著減少(P0.01)。封閉群大鼠各用藥組隨用藥頻率增加肌纖維橫截面積顯著減少(P0.01)。(4)隨用藥頻率增加,兩種品系大鼠各用藥組Ⅱ型纖維橫截面積均較C組顯著減少(P0.01),其中,近交系的變化呈頻率依賴性。(5)近交系大鼠各用藥組GR、α-ENaC和MAFbx基因m RNA含量均較C組有同步增加趨勢(shì),其中,H組α-ENaC基因mRNA含量比C組、L組顯著增加(P0.01);封閉群大鼠各用藥組MAFbx基因mRNA含量均比C組顯著增加(P0.05);M組和H組α-ENaC mRNA含量較C組(P0.05)、L組(P0.01)顯著增加,但M組和H組GR mRNA含量較C組(P0.05)、L組(P0.01)顯著減少。(6)Dex作用于C2C12細(xì)胞,24h時(shí),在5×10-4M以下能顯著促進(jìn)細(xì)胞增殖(P0.05),而提升至1.5×10-4M則有抑制細(xì)胞增殖趨勢(shì),但48h時(shí),各濃度下均顯著抑制細(xì)胞增殖(P0.05)。10-5M Ami作用C2C12細(xì)胞,24h時(shí),對(duì)細(xì)胞增殖有顯著促進(jìn)(P0.05),當(dāng)延至48h則增殖未見(jiàn)顯著變化。10-5M Ami與Dex聯(lián)合作用C2C12細(xì)胞,24h時(shí),在Dex5×10-4M以下有促進(jìn)細(xì)胞增殖的趨勢(shì),但增至1.5×10-4M則抑制細(xì)胞增殖;48h時(shí),Dex各濃度下都有抑制細(xì)胞增殖的趨勢(shì),且較單用Ami時(shí)更顯著抑制(P0.05)。(7)10-5M Ami及各濃度Dex單用或聯(lián)合作用于分化期C2C12細(xì)胞72h,細(xì)胞肌管直徑均顯著減少(P0.05),但未見(jiàn)濃度依賴性。結(jié)論以Dex 1.0 mg/kg每周3、5次肌注均可成功誘導(dǎo)兩種品系大鼠建立GIMA模型,近交系模型較封閉群模型更具骨骼肌萎縮典型病變及GC的量-效效應(yīng)。GC用藥可使兩種品系GIMA大鼠骨骼肌組織α-ENaC和MAFbx基因m RNA含量增加,同時(shí),近交系模型的GR基因表達(dá)增加呈濃度依賴性趨勢(shì),且與α-ENaC和MAFbx基因表達(dá)同步增加,顯示了近交系模型骨骼肌肌纖維對(duì)GC作為信號(hào)分子所誘導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制有較為一致的群體響應(yīng),體現(xiàn)出近交系動(dòng)物在基因背景研究中的優(yōu)勢(shì),也提示了骨骼肌肌纖維GR介導(dǎo)外源性GC誘導(dǎo)骨骼肌ENaC基因和萎縮基因高表達(dá)可能與GIMA的發(fā)生相關(guān)。此外,以不同用藥頻率和時(shí)長(zhǎng)的Dex及Ami干預(yù)體外培養(yǎng)成肌細(xì)胞C2C12的增殖和肌管直徑變化結(jié)果顯示,GC對(duì)成肌細(xì)胞增殖可能有雙向調(diào)節(jié)作用,即低濃度、短期用藥促進(jìn)細(xì)胞增殖而高濃度、長(zhǎng)期用藥抑制細(xì)胞增殖,并抑制成肌細(xì)胞分化。當(dāng)ENaC功能受短期抑制后可促進(jìn)成肌細(xì)胞增殖,但對(duì)成肌細(xì)胞分化均表現(xiàn)抑制,且在GC作用下,Ami對(duì)細(xì)胞增殖和分化的抑制更顯著,提示骨骼肌肌纖維ENaC可能參與了成肌細(xì)胞的增殖和分化調(diào)控,ENaC功能正常有助于成肌細(xì)胞的分化,對(duì)GIMA的骨骼肌肌纖維再生修復(fù)有正面影響。
[Abstract]:Objective To investigate the effects of ENaC on the proliferation and differentiation of rat myoblasts by means of CCK - 8 method and muscle fiber typing . Results ( 1 ) All 32 Wistar rats were randomly divided into 4 groups : control group ( group C ) , group C ( group M ) and high frequency group ( H group ) . ( 4 ) Compared with group C ( P0.05 ) , the mRNA content of 偽 - ENaC mRNA was significantly increased in group M and H group ( P0.05 ) . The results showed that the effect of GC on the proliferation and differentiation of muscle cells induced by GC as a signal molecule showed that the proliferation and differentiation of myoblasts were inhibited by GC . The effect of GC on the proliferation and differentiation of myoblasts was shown . The results suggested that the skeletal muscle fibers could be involved in the proliferation and differentiation of myoblasts .

【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R96

【參考文獻(xiàn)】

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1 陸幸妍;翟玉瑩;陳鑫;劉洋;林曉文;陳s，

本文編號(hào)：1821819