本文選題：鉑類藥物 + 靶向治療��； 參考：《東南大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：癌癥,又稱惡性腫瘤,是一類嚴(yán)重威脅人類生命和健康的重要疾病。以順鉑、卡鉑和奧沙利鉑為代表的鉑類抗腫瘤藥一直是惡性腫瘤化療的首選藥物,在腫瘤治療中占有重要的地位。盡管鉑類抗腫瘤藥物的研發(fā)已取得很大進(jìn)展,但由于其缺乏對腫瘤細(xì)胞的選擇性,仍會帶來一系列嚴(yán)重的毒副作用。單克隆抗體能特異性識別腫瘤細(xì)胞,但其細(xì)胞殺傷能力較低,抗腫瘤效果有限,臨床上主要是與非特異性的化學(xué)藥物聯(lián)合使用。近年來,腫瘤的靶向性治療已成為了腫瘤領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。采用化學(xué)方法將具有靶向性的抗體或抗體片段與具有良好藥理活性的小分子鉑類抗腫瘤藥物進(jìn)行連接,制備抗體藥物偶聯(lián)物,既能特異性的識別腫瘤細(xì)胞,又能高效地殺傷靶細(xì)胞,降低藥物的毒副作用,從而可以達(dá)到高效低毒的治療目的。本論文以順鉑和奧沙利鉑為模型藥物,設(shè)計并制備了兩類鉑類化合物,一類為四價鉑化合物,以氨基、乙二胺和1R,2R-環(huán)己二胺為配基,氯離子或草酸根離子為離去基團(tuán),軸向?qū)ΨQ引入可用于進(jìn)一步修飾的羧酸根基團(tuán)。另一類為二價鉑化合物,以氨基和1R,2R-環(huán)己二胺為配基,谷氨酸根離子為離去基團(tuán)引入氨基,與溶酶體酶可降解的纈氨酸-瓜氨酸二肽一端相連接,另一端引入羧酸根基團(tuán),用于與靶向載體連接。采用紅外光譜、核磁、質(zhì)譜及元素分析對化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征,并采用CCK-8試劑盒測定了化合物對三種乳腺癌細(xì)胞,MCF-7, MDA-MB-231及SK-BR-3的體外抗腫瘤活性。與順鉑和奧沙利鉑相比,鉑化合物的抗腫瘤活性明顯降低,對SK-BR-3細(xì)胞幾乎不表現(xiàn)出生長抑制作用。本論文針對腫瘤細(xì)胞表面高度表達(dá)的Her2抗原,選用商業(yè)化抗體—曲妥珠單抗作為靶向載體,與上述鉑類前體藥物進(jìn)行偶聯(lián),制備抗體藥物偶聯(lián)物。采用高效液相色譜、原子吸收光譜、BCA試劑盒對偶聯(lián)物進(jìn)行鑒定,計算藥物／抗體比值。本論文所制備偶聯(lián)物藥物／抗體比值均在4-7范圍內(nèi),為抗體藥物偶聯(lián)物藥物／抗體比值的理想數(shù)值。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定了抗體偶聯(lián)前后對Her2抗原和靶細(xì)胞SK-BR-3的親和力變化,并通過熒光顯微鏡觀察偶聯(lián)物對Her2陽性表達(dá)細(xì)胞SK-BR-3及Her2陰性表達(dá)細(xì)胞MDA-MB-231的識別能力。在與鉑物分子化學(xué)偶聯(lián)后,曲妥珠單抗對Her2抗原及靶細(xì)胞的親和力較偶聯(lián)前有所下降,但也基本保持了其對Her2抗原和靶細(xì)胞的結(jié)合能力。偶聯(lián)物與曲妥珠單抗一樣均能識別位于細(xì)胞膜上的Her2抗原,特異性結(jié)合到Her2陽性表達(dá)的SK-BR-3細(xì)胞表面,而不與Her2陰性表達(dá)的MDA-MB-231細(xì)胞發(fā)生結(jié)合。采用CCK-8試劑盒測定了偶聯(lián)物對三種乳腺癌細(xì)胞,MCF-7, MDA-MB-231及SK-BR-3的體外抗腫瘤活性。結(jié)果表明,偶聯(lián)物對SK-BR-3細(xì)胞的細(xì)胞毒性顯著提高,與順鉑的作用能力相當(dāng),且較奧沙利鉑細(xì)胞毒性更強(qiáng)。而對于Her2蛋白表達(dá)含量低的乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231,抗體四價鉑偶聯(lián)物在最高給藥劑量的腫瘤細(xì)胞抑制率仍小于30%。利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞周期檢測,發(fā)生抗體-四價偶聯(lián)物對SK-BR-3細(xì)胞的阻滯主要發(fā)生在G2/M期,而抗體-二價偶聯(lián)物對SK-BR-3細(xì)胞的阻滯主要發(fā)生在S期。通過上述實(shí)驗(yàn)研究表明：曲妥珠-鉑藥偶聯(lián)物能區(qū)分靶細(xì)胞和非靶細(xì)胞,特異性結(jié)合到Her2高表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞表面,表現(xiàn)出較好的細(xì)胞毒性,降低對非靶細(xì)胞的損傷,為鉑類抗腫瘤藥物的靶向設(shè)計提供了一種新的思路。
[Abstract]:A kind of platinum compound is prepared and prepared by using cis - platinum and oxaliplatin as the ligand , and the other end of which can be used in the treatment of tumor cells . The anti - tumor activity of human Her2 - positive expression cell SK - BR - 3 and Her2 - negative expression cell MDA - MB - 231 was observed by fluorescence microscope .

【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R943

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本文編號：1819182