本文選題：抗體偶聯(lián)藥物 + T-DM��； 參考：《生物技術(shù)通訊》2016年03期

【摘要】：目的:研究抗體偶聯(lián)藥物T-DM1與乳腺癌細(xì)胞SKBR3表面人表皮生長(zhǎng)因子受體2(HER2)的相互作用及內(nèi)吞機(jī)制。方法:采用基于表面等離子共振(SPR)原理的Biacore方法測(cè)試配體T-DM1與受體HER2的相互作用,通過(guò)流式細(xì)胞儀測(cè)定藥物在體外內(nèi)吞清除率,利用激光掃描共聚焦顯微鏡原位檢測(cè)藥物在細(xì)胞中的內(nèi)吞過(guò)程。結(jié)果:T-DM1與HER2具有高親和力,ka為6.234×10~6mol/(L·s),kd為3.077×10~(-4)/s,KD為4.936×10~(-11)mol/L,流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明受體與配體的結(jié)合具有飽和性;利用免疫熒光方法檢測(cè)到T-DM1在SKBR3細(xì)胞內(nèi)的消除呈時(shí)間-劑量依賴(lài)關(guān)系,實(shí)驗(yàn)表明4 h內(nèi)熒光強(qiáng)度減低32%,48 h時(shí)降低約90%;共聚焦顯微鏡實(shí)驗(yàn)表明T-DM1先與SKBR3細(xì)胞表面的HER2受體結(jié)合,進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),反應(yīng)1 h到達(dá)溶酶體,48 h時(shí)在顯微鏡下已消失。結(jié)論:T-DM1與HER2具有高親和力及結(jié)合飽和性,在1 h內(nèi)通過(guò)HER2介導(dǎo)內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞,隨后定位于溶酶體,最后于48 h裂解。
[Abstract]:Aim: to study the interaction and endocytosis mechanism between T-DM1 and human epidermal growth factor receptor 2 (ER2) on human breast cancer cell line SKBR3. Methods: the interaction between ligand T-DM1 and receptor HER2 was measured by Biacore method based on the principle of surface plasmon resonance (SPR), and the in vitro endocytosis clearance rate was determined by flow cytometry. The process of endocytosis of drugs in cells was detected by laser scanning confocal microscope in situ. Results the ratio of high affinity between HER2 and T-DM1 was 6.234 脳 10~6mol/(L / kd = 3.077 脳 10 ~ (-10) -4 / s ~ (-1) K ~ (-1) = 4.936 脳 10 ~ (-10) ~ (-1) mol / L ~ (-1). Flow cytometry showed that the binding of T-DM1 with ligand was saturated, and the elimination of T-DM1 in SKBR3 cells was time-dose dependent by immunofluorescence. The results showed that the fluorescence intensity decreased by 32 and 48 hours within 4 h, and the confocal microscope showed that T-DM1 binds to the HER2 receptor on the surface of SKBR3 cells and enters into the cells, and the reaction disappears under the microscope when the reaction reaches the lysosome for 48 h. ConclusionThree T-DM1 has high affinity and saturation to HER2, endocytosis is mediated by HER2 within 1 h, then located in lysosome, and finally cleavage at 48 h.
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所;
【分類(lèi)號(hào)】：R96

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本文編號(hào)：1806024