本文選題：抗體偶聯(lián)藥物 + T-DM��； 參考：《生物技術通訊》2016年03期

【摘要】：目的:研究抗體偶聯(lián)藥物T-DM1與乳腺癌細胞SKBR3表面人表皮生長因子受體2(HER2)的相互作用及內吞機制。方法:采用基于表面等離子共振(SPR)原理的Biacore方法測試配體T-DM1與受體HER2的相互作用,通過流式細胞儀測定藥物在體外內吞清除率,利用激光掃描共聚焦顯微鏡原位檢測藥物在細胞中的內吞過程。結果:T-DM1與HER2具有高親和力,ka為6.234×10~6mol/(L·s),kd為3.077×10~(-4)/s,KD為4.936×10~(-11)mol/L,流式細胞實驗證明受體與配體的結合具有飽和性;利用免疫熒光方法檢測到T-DM1在SKBR3細胞內的消除呈時間-劑量依賴關系,實驗表明4 h內熒光強度減低32%,48 h時降低約90%;共聚焦顯微鏡實驗表明T-DM1先與SKBR3細胞表面的HER2受體結合,進入細胞內,反應1 h到達溶酶體,48 h時在顯微鏡下已消失。結論:T-DM1與HER2具有高親和力及結合飽和性,在1 h內通過HER2介導內吞進入細胞,隨后定位于溶酶體,最后于48 h裂解。
[Abstract]:Aim: to study the interaction and endocytosis mechanism between T-DM1 and human epidermal growth factor receptor 2 (ER2) on human breast cancer cell line SKBR3. Methods: the interaction between ligand T-DM1 and receptor HER2 was measured by Biacore method based on the principle of surface plasmon resonance (SPR), and the in vitro endocytosis clearance rate was determined by flow cytometry. The process of endocytosis of drugs in cells was detected by laser scanning confocal microscope in situ. Results the ratio of high affinity between HER2 and T-DM1 was 6.234 脳 10~6mol/(L / kd = 3.077 脳 10 ~ (-10) -4 / s ~ (-1) K ~ (-1) = 4.936 脳 10 ~ (-10) ~ (-1) mol / L ~ (-1). Flow cytometry showed that the binding of T-DM1 with ligand was saturated, and the elimination of T-DM1 in SKBR3 cells was time-dose dependent by immunofluorescence. The results showed that the fluorescence intensity decreased by 32 and 48 hours within 4 h, and the confocal microscope showed that T-DM1 binds to the HER2 receptor on the surface of SKBR3 cells and enters into the cells, and the reaction disappears under the microscope when the reaction reaches the lysosome for 48 h. ConclusionThree T-DM1 has high affinity and saturation to HER2, endocytosis is mediated by HER2 within 1 h, then located in lysosome, and finally cleavage at 48 h.
【作者單位】： 軍事醫(yī)學科學院微生物流行病研究所;
【分類號】：R96

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本文編號：1806024