發(fā)布時間：2018-04-18 05:02

  本文選題：阿霉素 + 前藥　； 參考：《山東大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：阿霉素(DOX)含有蒽環(huán)結(jié)構(gòu),屬于廣譜抗腫瘤藥物,通過與DNA分子相互作用干擾核酸合成從而實現(xiàn)治療目的。臨床上常用于治療卵巢癌、宮頸癌、肺癌和急性白血病等各種腫瘤。但阿霉素對正常組織具有較嚴(yán)重的毒副作用,包括嚴(yán)重的心肌毒性和骨髓抑制毒性等不良反應(yīng),嚴(yán)重限制了其臨床應(yīng)用。為了實現(xiàn)DOX對腫瘤的靶向作用,提高其療效,減少毒副作用,本課題以阿霉素前藥CAD、殼聚糖修飾的普朗尼克聚合物(F127-CS)和葉酸修飾的明膠聚合物(Gel-FA)為載體材料,制備了一個基于電荷轉(zhuǎn)換的雙pH敏感性的前藥納米粒體系并對其進(jìn)行了相關(guān)體內(nèi)外評價實驗,主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:1.前藥CAD和載體材料Ge l-FA的合成及表征利用順式烏頭酸酐與阿霉素反應(yīng)合成表面帶有負(fù)電荷的小分子前藥CAD,利用高效液相色譜(HPLC)、核磁共振氫譜(1H-NMR)、傅里葉變換紅外光譜(FT-IR)和電噴霧電離質(zhì)譜(ESI-MS)等手段驗證了 CAD的結(jié)構(gòu)證明成功合成。并進(jìn)行了 CAD酸水解考察實驗,結(jié)果證明CAD僅在酸性條件下才能夠水解出DOX,且隨酸度的增強,CAD的水解程度和水解速率隨之增加。以葉酸修飾A型明膠得到具有酸敏性的電荷翻轉(zhuǎn)特性的聚合物Gel-FA,利用1H-NMR、FT-IR驗證了 Gel-FA成功合成。并通過測定不同pH條件下的該明膠聚合物溶液的Zeta電位的大小確定了該聚合物的等電點范圍在6.0-6.5之間。2.載藥納米粒的制備及理化性質(zhì)的考察在堿性條件下,采用薄膜超聲分散法通過靜電作用力制備載藥納米粒CAD/F127-CS/Gel-FA。通過單因素考察實驗,選擇了載藥納米粒的最佳制備條件為固定載體材料總量為20mg,投藥量為4mg,投料比F127-CS/Gel-FA=1:1(w/w),總水化體積為6mL,超聲時間各為3min,水化溫度為40℃。所得到的DOX前藥納米粒的理化特性考察結(jié)果為:表面Zeta電位為-11.872±0.12mV,平均粒徑為179.6±5.06nm,表觀形態(tài)上大多數(shù)成球形,形態(tài)良好,無粘連,粒徑分布較均勻。且利用透射電鏡TEM和Zeta電位分析儀觀察和測定了處于不同pH環(huán)境下的載藥納米粒的狀態(tài)及Zeta電位大小,驗證了酸性條件下納米粒表面發(fā)生電荷翻轉(zhuǎn)后,藥物才開始釋放的實驗設(shè)想,Gel-FA具有酸敏性電荷翻轉(zhuǎn)特性,僅在弱堿條件下才能夠形成納米粒,酸性條件下無法形成球形良好形態(tài)均一納米粒。3.載藥納米粒的體外評價模擬了體內(nèi)正常血液循環(huán)到腫瘤細(xì)胞的不同生理環(huán)境的pH值(pH=7.4、6.8、6.0和5.0)的緩沖液條件下,進(jìn)一步考察驗證了藥物體外釋放情況,結(jié)果顯示藥物呈現(xiàn)pH依賴性釋放特點,隨著pH降低,DOX的釋放量和釋放速率隨之增加,可實現(xiàn)DOX的酸敏感靶向釋放目的。選用Hela細(xì)胞和HepG2細(xì)胞評價了 CAD/F127-CS/Gel-FA體系對腫瘤細(xì)胞的抑制作用,結(jié)果顯示,該體系具有較強的細(xì)胞毒性,且對葉酸陽性細(xì)胞Hela細(xì)胞的毒性要強于葉酸陰性細(xì)胞HepG2細(xì)胞實現(xiàn)了一定的葉酸主動靶向作用。另細(xì)胞攝取實驗結(jié)果證實載藥納米粒能夠被細(xì)胞成功攝取,且攝取量與細(xì)胞毒性結(jié)果基本一致。4.載藥納米粒的體內(nèi)評價最后本課題以Wistar大鼠為動物模型,通過尾靜脈注射給藥對CAD/F127-CS/Gel-FA納米粒在動物體內(nèi)的藥物動力學(xué)特征進(jìn)行了考察研究,結(jié)果顯示藥物經(jīng)過納米粒包裹后,將DOX溶液組的AUC(0-∞)值提高了近20倍,將其MRT和半衰期延長了 6倍多,證明該體系能夠明顯改善DOX的體內(nèi)分布,提高DOX的生物利用度。同時以半數(shù)致死量(LD_(50))、死亡率和主要組織的病理形態(tài)學(xué)觀察為研究指標(biāo)進(jìn)行小鼠急性毒性實驗,考察和評價了納米粒的體內(nèi)安全性。實驗結(jié)果得到的載藥納米粒組的LD_(50)要遠(yuǎn)大于DOX溶液組(LD_(50)=13.134mg/kg)。且通過主要組織器官的病理學(xué)研究可證明該載藥納米體系大大降低了 DOX的各種毒副作用,且其在一定的劑量范圍內(nèi)對各器官組織基本無毒。總體而言,本課題設(shè)計制備的該雙pH敏感性的前藥納米粒體系實現(xiàn)了實驗設(shè)想的電荷翻轉(zhuǎn)的酸敏感性靶向釋放和葉酸的主動靶向作用,能夠改善DOX的體內(nèi)分布,提高DOX的生物利用度,明顯降低DOX的毒副作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R943

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1766890