本文選題：表觀遺傳相關(guān)蛋白　切入點(diǎn)：細(xì)胞骨架類蛋白　出處：《南昌大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：近年來,隨著生物醫(yī)藥領(lǐng)域的迅猛快速發(fā)展,靶向特定蛋白篩選其特異性的小分子抑制劑已成為該領(lǐng)域的重點(diǎn)。本文中著眼于表觀遺傳相關(guān)蛋白及細(xì)胞骨架類蛋白這兩個(gè)不同的領(lǐng)域中的重要蛋白進(jìn)行小分子抑制劑的篩選。組蛋白乙�；鳛楸碛^遺傳學(xué)中重要的一類翻譯后修飾,在調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄與染色體構(gòu)成等多個(gè)領(lǐng)域中發(fā)揮著重要的作用,并且與癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),因此,組蛋白乙酰化已成為國內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。BRD4蛋白作為組蛋白乙�；R(shí)別因子"reader",是屬于BET家族的一員,它能夠特異性結(jié)合乙�；揎椀馁嚢彼�,并招募其他轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控BCL2, CDK6, c-Myc等下游致癌基因。目前研究表明,BRD4的異常表達(dá)與MLL, AML等白血病以及睪丸中腺癌等眾多疾病相關(guān),因此靶向BRD4蛋白篩選小分子抑制劑是十分有必要的,在本文中,我們利用BRD4蛋白可以識(shí)別乙�；馁嚢彼徇@一原理,結(jié)合AlphaScreen技術(shù)靈敏均相無放射性等優(yōu)點(diǎn),我們建立了 BRD4的“HITs”篩選平臺(tái),初步篩選得到了一類骨架新穎,活性較好的小分子抑制劑,該小分子在體外可以在0.81±0.03μM左右顯著抑制BRD4蛋白識(shí)別乙�；慕M蛋白,不僅如此該化合物在細(xì)胞水平還可以抑制血液病細(xì)胞的增殖等,因此其是一個(gè)潛在的成藥的小分子。RhoA作為GTP酶的一種,是重要的細(xì)胞信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo)因子,并影響細(xì)胞骨架的形態(tài)等,屬于小G蛋白家族的一員。RhoA與上游的三種蛋白相互作用,并受這三種蛋白的調(diào)控,從而在RhoA-GTP活性狀態(tài)及RhoA-GDP非活性狀態(tài)之間相互轉(zhuǎn)換。目前研究表明,RhoA的高表達(dá)與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),例如乳腺癌,前列腺癌,睪丸癌,肺癌等。因此,RhoA作為重要的抗癌靶點(diǎn),尋找針對(duì)RhoA的小分子抑制劑是必不可少的。而現(xiàn)有RhoA的小分子抑制劑存在活性差選擇性差等重要的問題,因此我們基于蛋白熱遷移實(shí)驗(yàn)建立了靶向RhoA的高通量篩選平臺(tái),篩選得到了抑制RhoA酶活性及與GEF相互作用的共價(jià)先導(dǎo)化合物,并以此化合物為分子探針,解釋了 RhoA蛋白變構(gòu)調(diào)控的新機(jī)制。
[Abstract]:In recent years, with the rapid development of biomedical field, the screening of specific small molecular inhibitors targeting specific proteins has become the focus in this field.In this paper, small molecular inhibitors were screened for two different domains, epigenetic related proteins and cytoskeletal proteins.Histone acetylation, as an important post translational modification in epigenetics, plays an important role in the regulation of gene transcription and chromosome formation, and is closely related to the development of cancer.Histone acetylation has become a hot topic at home and abroad. BRD4 protein is a member of the BET family as the recognition factor of histone acetylation, and it can specifically bind to the acetylated lysine.Other transcription factors were recruited to regulate BCL2, CDK6, c-Myc and other downstream oncogenes.Current studies have shown that the abnormal expression of BRD4 is associated with many diseases, such as MLL, AML and adenocarcinoma of testis, so it is necessary to screen small molecular inhibitors for targeting BRD4 protein.Using the principle that BRD4 protein can recognize acetylated lysine, and combining the advantages of AlphaScreen technique, such as sensitive homogeneity and non-radioactivity, we have established a "HITs" screening platform for BRD4.The small molecule inhibitor with good activity could significantly inhibit the acetylated histone recognized by BRD4 protein at 0.81 鹵0.03 渭 M in vitro, and not only that the compound could inhibit the proliferation of hematological disease cells at the cell level, etc.Therefore, it is a potential proprietary drug molecule. RhoA, as one of the GTP enzymes, is an important cellular signal transduction factor and affects the morphology of the cytoskeleton. It belongs to the small G protein family member. RhoA interacts with three upstream proteins.The three proteins are regulated by these proteins, thus switching between the active state of RhoA-GTP and the inactive state of RhoA-GDP.Current studies have shown that the high expression of RhoA is closely related to the occurrence and development of many tumors, such as breast cancer, prostate cancer, testicular cancer, lung cancer and so on.Therefore, as an important anticancer target, it is necessary to find small molecular inhibitors for RhoA.However, the existing small molecular inhibitors of RhoA have some important problems, such as poor selectivity, etc. Therefore, we have established a high-throughput screening platform for targeting RhoA based on protein heat transfer experiments.The covalent lead compounds which inhibit the activity of RhoA enzyme and interact with GEF were obtained and used as molecular probes to explain the new mechanism of RhoA protein structure regulation.
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R96

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本文編號(hào)：1728329