本文選題：肽脂粒　切入點(diǎn)：pH敏感性　出處：《天津醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：目的:擬構(gòu)建一種pH敏感的主動(dòng)靶向的核殼型肽脂粒(LPNs)納米傳遞系統(tǒng)(NDDS),包載抗癌藥物阿霉素(DOX),修飾以iNGR多肽,使其兼具pH響應(yīng)性和主動(dòng)靶向性,用于乳腺癌的治療,旨在提高抗癌療效和降低全身毒性。內(nèi)容:以聚組氨酸(PHIS)為內(nèi)核,以二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG)和卵磷脂(EPC)為單層外殼制備得LPNs,包載抗腫瘤藥物DOX,并用多肽iNGR(CRNGRGPDC)進(jìn)行修飾�？疾炱淞�、電位、包封率(EE)、載藥量(LE)、pH敏感性、穩(wěn)定性等特性,并研究其在細(xì)胞水平和動(dòng)物水平的抗腫瘤效應(yīng)。方法:制劑的制備:利用縮合反應(yīng)將iNGR偶聯(lián)DSPE-PEG,制得DSPE-PEG-iNGR。采用一步沉淀法制備得到LPNs和iNGR-LPNs及其載藥制劑LPNs/DOX、iNGR-LPNs/DOX。以薄膜分散法制備得到脂質(zhì)體(Liposomes)作為對(duì)照。制劑的表征:采用動(dòng)態(tài)光散射法在激光粒度儀測(cè)定其水力半徑和電位,采用透射電鏡(TEM)觀測(cè)其形貌和粒徑,通過(guò)高效液相色譜法測(cè)定其包封率和載藥量,并從不同p H下粒徑變化、電位變化和包載熒光探針芘的熒光變化等考察其pH敏感性,并對(duì)其在體外pH 7.4、6.5和5.5的釋藥行為和穩(wěn)定性進(jìn)行初步研究。制劑細(xì)胞水平的評(píng)價(jià):細(xì)胞水平上采用流式細(xì)胞術(shù)定量檢測(cè)4T1在pH 6.8和pH 7.4下LPNs/DOX、iNGR-LPNs/DOX、Lipo/DOX和游離DOX的攝取量。通過(guò)MTT法考察不同制劑對(duì)鼠源乳腺癌細(xì)胞4T1的生長(zhǎng)抑制作用并求算其半數(shù)抑制濃度值(IC50)。制劑動(dòng)物水平的評(píng)價(jià):在高轉(zhuǎn)移性鼠源乳腺癌4T1小鼠動(dòng)物模型上進(jìn)行活體成像實(shí)驗(yàn)來(lái)考察其腫瘤靶向作用;通過(guò)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)了該納米系統(tǒng)的治療效果:從腫瘤體積大小變化、免疫組化CD 31染色和Ki 67染色三個(gè)方面來(lái)評(píng)價(jià)其抗癌療效;實(shí)驗(yàn)通過(guò)小鼠體重變化和小鼠心臟HE染色進(jìn)行毒性評(píng)價(jià)。結(jié)果:所制得的LPNs粒徑大小為109.70±7.60 nm,多分散系數(shù)(PDI)為0.13±0.01,Zeta電位為-4.57±1.24 mV,包封率為84.59±2.19%,載藥量為9.08±0.33%,TEM可見其形貌均勻呈球形分布。隨著pH降低,LPNs粒徑逐漸增大,PDI增大,電位由負(fù)翻轉(zhuǎn)為正,包載熒光探針芘的熒光強(qiáng)度降低,且在pH 6.5左右存在突變。藥物釋放實(shí)驗(yàn)表明LPNs/DOX在pH 5.5條件下24 h內(nèi)累積釋放量可達(dá)80%以上,pH 6.5時(shí)在50%左右,而pH 7.4時(shí)僅在20%左右,且iNGR的修飾對(duì)藥物釋放沒有顯著影響;LPNs/DOX在4℃存放條件下15天內(nèi)粒徑分布和電位沒有明顯變化。在體外攝取和抗腫瘤效應(yīng)研究中,流式細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明LPNs/DOX在pH 7.4時(shí)細(xì)胞攝取量為L(zhǎng)ipo/DOX的4.90倍,在pH 6.8時(shí)為7.22倍;而在pH 6.8和7.4時(shí),iNGR-LPNs/DOX與LPNs/DOX相比,細(xì)胞的DOX攝取量顯著增加,分別是1.23倍和1.43倍。細(xì)胞抑制實(shí)驗(yàn)中,LPNs/DOX的半數(shù)抑制濃度IC50值為1.926μg/mL,明顯低于Lipo/DOX(4.188μg/m L)。而iNGR-LPNs/DOX的IC50值(1.140μg/mL)低于LPNs/DOX的IC50值,接近游離DOX的IC50值(1.127μg/mL)。關(guān)于腫瘤靶向性研究的活體成像實(shí)驗(yàn)中,可見給藥3 h后,LPNs/Di R和iNGR-LPNs/DiR均能較好靶向富集在腫瘤部位,且在不同時(shí)間點(diǎn)均可見iNGR-LPNs/Di R組熒光強(qiáng)于LPNs/Di R組,48 h后iNGR-LPNs/Di R組解剖得到的心、肝、脾、肺、腎等臟器和腫瘤的熒光強(qiáng)于LPNs/DiR組。小鼠體內(nèi)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)可見,腫瘤抑制能力:iNGR-LPNs/DOXLPNs/DOXLipo/DOXDOXPBS。小鼠生存率:iNGR-LPNs/DOX組(49天)LPNs/DOX組(45天)DOX組(41天)PBS組(39.5天)Lipo/DOX組(35天)。免疫組化CD 31和Ki 67染色顯示LPNs/DOX組和iNGR-LPNs/DOX組代表新生血管和增殖細(xì)胞的棕黃色明顯少于PBS組、DOX組和Lipo/DOX組。制劑的初步毒性研究,可見Lipo/DOX組小鼠體重變化大,體重減少可達(dá)26%,而其他組小鼠體重變化不明顯;小鼠心臟HE染色可見Lipo/DOX組和DOX組呈現(xiàn)心肌細(xì)胞腫大,出現(xiàn)心肌細(xì)胞溶解的現(xiàn)象,且排列比較混亂,呈現(xiàn)一定的心臟毒性,而LPNs/DOX和iNGR-LPNs/DOX組和PBS組沒有明顯變化。結(jié)論:制備得到的iNGR-LPNs/DOX具有腫瘤特異的pH敏感性和主動(dòng)靶向性,相比Lipo/DOX,在乳腺癌模型上呈現(xiàn)出更強(qiáng)的細(xì)胞抑制能力、細(xì)胞攝取能力、腫瘤抑制能力和更小的毒副作用。因此,iNGR-LPNs/DOX是一種治療乳腺癌的有潛力的新型納米載體。
[Abstract]:Objective : To establish a pH - sensitive active targeting core - shell peptide lipid particle ( NDDS ) , which can be used for the treatment of breast cancer . In vitro uptake and antitumor effects , the results of flow cytometry showed that the cumulative release rate was 4.90 times at pH 7.5 and 7.22 times at pH 6.5 , while at pH 6.8 and 7.4 , the IC50 value was 1.926 渭g / mL , which was significantly lower than that of Lipo / S ( 4.188 渭g / mL ) . In vivo imaging experiments on tumor targeting studies showed that there was no obvious change in body weight and body weight of mice . The results showed that iNGR - Lacidil / DOXLI / DOXLipo / DOXDOXPBS had higher body weight and decreased body weight than that in PBS group .

【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R943;R965

【參考文獻(xiàn)】

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1 Lu Yao;Juan Zhang;Yiqiang Liu;Tao Ouyang;Jinfeng Li;Tianfeng Wang;Zhaoqing Fan;Tie Fan;Benyao Lin;Yuntao Xie;;Association between HER2 status and response to neoadjuvant anthracycline followed by paclitaxel plus carboplatin chemotherapy without trastuzumab in breast cancer[J];Chinese Journal of Cancer Research;2015年06期

2 Wean Sin Cheow;Kunn Hadinoto;;Lipid-polymer hybrid nanoparticles with rhamnolipid-triggered release capabilities as anti-biofilm drug delivery vehicles[J];Particuology;2012年03期

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本文編號(hào)：1706572