本文選題：肽脂粒　切入點：pH敏感性　出處：《天津醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:擬構(gòu)建一種pH敏感的主動靶向的核殼型肽脂粒(LPNs)納米傳遞系統(tǒng)(NDDS),包載抗癌藥物阿霉素(DOX),修飾以iNGR多肽,使其兼具pH響應性和主動靶向性,用于乳腺癌的治療,旨在提高抗癌療效和降低全身毒性。內(nèi)容:以聚組氨酸(PHIS)為內(nèi)核,以二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG)和卵磷脂(EPC)為單層外殼制備得LPNs,包載抗腫瘤藥物DOX,并用多肽iNGR(CRNGRGPDC)進行修飾�？疾炱淞健㈦娢�、包封率(EE)、載藥量(LE)、pH敏感性、穩(wěn)定性等特性,并研究其在細胞水平和動物水平的抗腫瘤效應。方法:制劑的制備:利用縮合反應將iNGR偶聯(lián)DSPE-PEG,制得DSPE-PEG-iNGR。采用一步沉淀法制備得到LPNs和iNGR-LPNs及其載藥制劑LPNs/DOX、iNGR-LPNs/DOX。以薄膜分散法制備得到脂質(zhì)體(Liposomes)作為對照。制劑的表征:采用動態(tài)光散射法在激光粒度儀測定其水力半徑和電位,采用透射電鏡(TEM)觀測其形貌和粒徑,通過高效液相色譜法測定其包封率和載藥量,并從不同p H下粒徑變化、電位變化和包載熒光探針芘的熒光變化等考察其pH敏感性,并對其在體外pH 7.4、6.5和5.5的釋藥行為和穩(wěn)定性進行初步研究。制劑細胞水平的評價:細胞水平上采用流式細胞術(shù)定量檢測4T1在pH 6.8和pH 7.4下LPNs/DOX、iNGR-LPNs/DOX、Lipo/DOX和游離DOX的攝取量。通過MTT法考察不同制劑對鼠源乳腺癌細胞4T1的生長抑制作用并求算其半數(shù)抑制濃度值(IC50)。制劑動物水平的評價:在高轉(zhuǎn)移性鼠源乳腺癌4T1小鼠動物模型上進行活體成像實驗來考察其腫瘤靶向作用;通過藥效學實驗評價了該納米系統(tǒng)的治療效果:從腫瘤體積大小變化、免疫組化CD 31染色和Ki 67染色三個方面來評價其抗癌療效;實驗通過小鼠體重變化和小鼠心臟HE染色進行毒性評價。結(jié)果:所制得的LPNs粒徑大小為109.70±7.60 nm,多分散系數(shù)(PDI)為0.13±0.01,Zeta電位為-4.57±1.24 mV,包封率為84.59±2.19%,載藥量為9.08±0.33%,TEM可見其形貌均勻呈球形分布。隨著pH降低,LPNs粒徑逐漸增大,PDI增大,電位由負翻轉(zhuǎn)為正,包載熒光探針芘的熒光強度降低,且在pH 6.5左右存在突變。藥物釋放實驗表明LPNs/DOX在pH 5.5條件下24 h內(nèi)累積釋放量可達80%以上,pH 6.5時在50%左右,而pH 7.4時僅在20%左右,且iNGR的修飾對藥物釋放沒有顯著影響;LPNs/DOX在4℃存放條件下15天內(nèi)粒徑分布和電位沒有明顯變化。在體外攝取和抗腫瘤效應研究中,流式細胞攝取實驗結(jié)果證明LPNs/DOX在pH 7.4時細胞攝取量為Lipo/DOX的4.90倍,在pH 6.8時為7.22倍;而在pH 6.8和7.4時,iNGR-LPNs/DOX與LPNs/DOX相比,細胞的DOX攝取量顯著增加,分別是1.23倍和1.43倍。細胞抑制實驗中,LPNs/DOX的半數(shù)抑制濃度IC50值為1.926μg/mL,明顯低于Lipo/DOX(4.188μg/m L)。而iNGR-LPNs/DOX的IC50值(1.140μg/mL)低于LPNs/DOX的IC50值,接近游離DOX的IC50值(1.127μg/mL)。關(guān)于腫瘤靶向性研究的活體成像實驗中,可見給藥3 h后,LPNs/Di R和iNGR-LPNs/DiR均能較好靶向富集在腫瘤部位,且在不同時間點均可見iNGR-LPNs/Di R組熒光強于LPNs/Di R組,48 h后iNGR-LPNs/Di R組解剖得到的心、肝、脾、肺、腎等臟器和腫瘤的熒光強于LPNs/DiR組。小鼠體內(nèi)藥效學實驗可見,腫瘤抑制能力:iNGR-LPNs/DOXLPNs/DOXLipo/DOXDOXPBS。小鼠生存率:iNGR-LPNs/DOX組(49天)LPNs/DOX組(45天)DOX組(41天)PBS組(39.5天)Lipo/DOX組(35天)。免疫組化CD 31和Ki 67染色顯示LPNs/DOX組和iNGR-LPNs/DOX組代表新生血管和增殖細胞的棕黃色明顯少于PBS組、DOX組和Lipo/DOX組。制劑的初步毒性研究,可見Lipo/DOX組小鼠體重變化大,體重減少可達26%,而其他組小鼠體重變化不明顯;小鼠心臟HE染色可見Lipo/DOX組和DOX組呈現(xiàn)心肌細胞腫大,出現(xiàn)心肌細胞溶解的現(xiàn)象,且排列比較混亂,呈現(xiàn)一定的心臟毒性,而LPNs/DOX和iNGR-LPNs/DOX組和PBS組沒有明顯變化。結(jié)論:制備得到的iNGR-LPNs/DOX具有腫瘤特異的pH敏感性和主動靶向性,相比Lipo/DOX,在乳腺癌模型上呈現(xiàn)出更強的細胞抑制能力、細胞攝取能力、腫瘤抑制能力和更小的毒副作用。因此,iNGR-LPNs/DOX是一種治療乳腺癌的有潛力的新型納米載體。
[Abstract]:Objective : To establish a pH - sensitive active targeting core - shell peptide lipid particle ( NDDS ) , which can be used for the treatment of breast cancer . In vitro uptake and antitumor effects , the results of flow cytometry showed that the cumulative release rate was 4.90 times at pH 7.5 and 7.22 times at pH 6.5 , while at pH 6.8 and 7.4 , the IC50 value was 1.926 渭g / mL , which was significantly lower than that of Lipo / S ( 4.188 渭g / mL ) . In vivo imaging experiments on tumor targeting studies showed that there was no obvious change in body weight and body weight of mice . The results showed that iNGR - Lacidil / DOXLI / DOXLipo / DOXDOXPBS had higher body weight and decreased body weight than that in PBS group .

【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R943;R965

【參考文獻】

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1 Lu Yao;Juan Zhang;Yiqiang Liu;Tao Ouyang;Jinfeng Li;Tianfeng Wang;Zhaoqing Fan;Tie Fan;Benyao Lin;Yuntao Xie;;Association between HER2 status and response to neoadjuvant anthracycline followed by paclitaxel plus carboplatin chemotherapy without trastuzumab in breast cancer[J];Chinese Journal of Cancer Research;2015年06期

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本文編號：1706572