本文選題：NGR　切入點(diǎn)：脂質(zhì)體　出處：《廣州中醫(yī)藥大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：背景： 采用配體修飾脂質(zhì)體能實(shí)現(xiàn)配體與受體的特異性結(jié)合,使藥物能達(dá)到定向傳遞,是現(xiàn)在抗腫瘤主動靶向脂質(zhì)體的研究熱點(diǎn)之一。本文制備NGR導(dǎo)向磷脂化合物修飾(后面稱NGR修飾)的脂質(zhì)體,考察脂質(zhì)體的藥劑學(xué)性質(zhì)和細(xì)胞攝取特性以及其腫瘤血管靶向性和細(xì)胞內(nèi)藥物分布行為,為NGR修飾脂質(zhì)體的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。 目的： 1.合成并鑒定NGR導(dǎo)向磷脂化合物。 2.研究NGR導(dǎo)向磷脂化合物比例對脂質(zhì)體性質(zhì)的影響。 3.考察NGR修飾脂質(zhì)體的腫瘤血管靶向性。 4.考察不同磷脂組成對NGR修飾脂質(zhì)體性質(zhì)的影響。 5.研究NGR修飾載藥脂質(zhì)體的抗腫瘤藥效和細(xì)胞內(nèi)藥物分布。 方法： 1.NGR導(dǎo)向磷脂化合物的合成與鑒定：將NGR多肽連接到1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷脂酰乙醇胺-Ⅳ-[羧基(聚乙二醇)2000]銨鹽(DSPE-PEG2000-COOH)上,得到DSPE-PEG2000-NGR(二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-NGR),即NGR導(dǎo)向磷脂化合物,將其與磷脂材料混合,制得NGR修飾的脂質(zhì)體,采用質(zhì)譜儀鑒定DSPE-PEG2000-NGR的分子量和采用HPLC-ELSD進(jìn)行測定導(dǎo)向磷脂化合物NGR多肽的偶聯(lián)率。 2.NGR導(dǎo)向磷脂化合物比例對脂質(zhì)體性質(zhì)的影響：分別選取0.32%、0.64%、1.28%NGR導(dǎo)向磷脂化合物三個(gè)比例,以薄膜蒸發(fā)法制備以香豆素-6為熒光探針的NGR修飾脂質(zhì)體,比較三種NGR修飾脂質(zhì)體的藥劑學(xué)性質(zhì),以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC, CD13表達(dá))為細(xì)胞模型,采用流式細(xì)胞儀分析三種NGR修飾脂質(zhì)體的細(xì)胞攝取的差異。 3.NGR修飾脂質(zhì)體的腫瘤血管靶向性：分別以香豆素-6和Di.r探針,以薄膜蒸發(fā)法制備NGR修飾與未修飾脂質(zhì)體。選用人成纖維肉瘤細(xì)胞(HT1080,CD13高表達(dá))、HUVEC、人冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞(HCAEC, CD13無表達(dá)細(xì)胞)作為細(xì)胞模型采用流式細(xì)胞儀考察脂質(zhì)體的細(xì)胞攝取差異,采用激光共聚焦觀察脂質(zhì)體在細(xì)胞內(nèi)隨時(shí)間的分布。以接種HT1080的裸鼠為動物模型,采用活體成像系統(tǒng)分析NGR修飾脂質(zhì)體的腫瘤血管靶向性和體內(nèi)的分布情況。MTT法考察NGR修飾與未修飾載藥脂質(zhì)體對靶細(xì)胞生長的影響。 4.不同磷脂組成對NGR修飾脂質(zhì)體性質(zhì)的影響：選取SPC、HSPC、DPPC、和復(fù)合磷脂(SPC:HSPC=3:1)四種不同磷脂組成來制備NGR修飾香豆素-6脂質(zhì)體,通過藥劑學(xué)性質(zhì)考察其穩(wěn)定性。以人成纖維肉瘤細(xì)胞(HT1080, CD13高度表達(dá))為細(xì)胞模型,以接種HT1080的裸鼠為動物模型,利用流式細(xì)胞儀考察脂質(zhì)體的細(xì)胞攝取效率,MTT法考察脂質(zhì)體對細(xì)胞的生長影響。分別采用激光共聚焦觀察和活體成像系統(tǒng)分析不同磷脂組成脂質(zhì)體在細(xì)胞內(nèi)和裸鼠體內(nèi)的分布。 5.NGR修飾的載藥脂質(zhì)體的抗腫瘤藥效和細(xì)胞內(nèi)藥物分布：采用MTT法考察了馬錢子生物類堿成分對肝癌細(xì)胞株SMMC7721的毒性。以HT1080為細(xì)胞模型,馬錢子總生物堿和馬錢子堿為藥物模型,用HPLC測定NGR修飾與未修飾的載藥脂質(zhì)體在不同時(shí)間下在細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度。最后,采用Annexin V-PI法和流式細(xì)胞儀分析了載藥脂質(zhì)體對細(xì)胞的凋亡作用。 結(jié)果： 1.NGR導(dǎo)向磷脂化合物的合成與鑒定：成功合成NGR導(dǎo)向磷脂化合物,并測得的DSPE-PEG2000-NGR的分子量為3388.0,和理論的分子量相符。偶聯(lián)率為(51.59±4.69)%。 2.NGR導(dǎo)向磷脂化合物比例對脂質(zhì)體性質(zhì)的影響：三種比例NGR修飾的脂質(zhì)體的包封率都在90%以上,性質(zhì)穩(wěn)定。在細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)中,發(fā)現(xiàn)0.64%NGR導(dǎo)向磷脂化合物修飾的脂質(zhì)體細(xì)胞攝取明顯強(qiáng)于0.32%和1.28%修飾的脂質(zhì)體。 3.NGR修飾脂質(zhì)體的腫瘤血管靶向性：在細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)中,同一條件下,HT1080和HUVEC對NGR修飾脂質(zhì)體組攝取明顯高于未修飾組,在陰性細(xì)胞HCAEC中沒有明顯的差異。動物實(shí)驗(yàn)中,NGR修飾組在荷瘤裸鼠處的聚集明顯高于未修飾組。MTT實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)NGR修飾脂質(zhì)體比未修飾脂質(zhì)體對細(xì)胞的生長抑制作用更加明顯。 4.不同磷脂組成對NGR修飾脂質(zhì)體性質(zhì)的影響：結(jié)果發(fā)現(xiàn)復(fù)合磷脂(SPC:HSPC=3:1)藥劑學(xué)性質(zhì)和細(xì)胞攝取效率顯著的優(yōu)于單一磷脂組成DPPC、SPC. HSPC脂質(zhì)體,激光共聚焦觀察發(fā)現(xiàn)四種不同磷脂組成脂質(zhì)體均分布在細(xì)胞核外的細(xì)胞質(zhì)中,隨著時(shí)間增加逐漸向細(xì)胞核周圍聚集,但不能進(jìn)入到細(xì)胞核中。MTT實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),復(fù)合磷脂組的對細(xì)胞的生長抑制作用明顯強(qiáng)于單一磷脂組。 5.NGR修飾的載藥脂質(zhì)體的抗腫瘤藥效和細(xì)胞內(nèi)藥物分布：MTT實(shí)驗(yàn)中,馬錢子總生物堿、馬錢子堿、士的寧的IC50為64.38、65.98、415.32μ g/mL。在細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)中,在一定濃度下,對HT1080的總凋亡率排序?yàn)檩d藥NGR修飾脂質(zhì)體載藥未修飾脂質(zhì)體游離藥物。 結(jié)論： 本文建立了NGR導(dǎo)向磷脂化合物的合成和鑒定方法,篩選出了制備NGR修飾脂質(zhì)體的最優(yōu)的導(dǎo)向磷脂化合物比例為0.64%,發(fā)現(xiàn)NGR修飾的復(fù)合磷脂脂質(zhì)體相比于單一磷脂DPPC、HSPC、SPC脂質(zhì)體具有更高的細(xì)胞攝取效率和體內(nèi)腫瘤部位的聚集效果。腫瘤靶向性實(shí)驗(yàn)證明了NGR修飾脂質(zhì)體具有良好的腫瘤血管靶向性。與未修飾的脂質(zhì)體相比,NGR修飾的脂質(zhì)體入胞效率更高,具有更強(qiáng)的抗腫瘤效果和促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用。
[Abstract]:Background:
Specific binding with ligand modified liposome can achieve ligand and receptor, so the medicine can achieve directional transfer, is now the antitumor active targeting of liposome. The preparation of NGR oriented phospholipid compounds modified (called behind NGR modified liposomes), pharmaceutical properties and cell uptake of the liposome and the tumor vessel targeting and intracellular drug distribution behavior, provide experimental and theoretical basis for the application of the NGR modified liposomes.
Objective:
1. synthesis and identification of NGR oriented phospholipid compounds.
2. the effects of the proportion of NGR directed phospholipid compounds on the properties of liposomes were investigated.
3. to investigate the angiogenesis targeting of NGR modified liposomes.
4. the effects of the composition of different phospholipids on the properties of NGR modified liposomes were investigated.
5. to study the antitumor efficacy and intracellular drug distribution of NGR modified liposomes.
Method錛，

本文編號：1683584