本文選題：GA-PEI-PLGA　切入點(diǎn)：納米粒　出處：《廣東藥科大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：近年來(lái),大量研究報(bào)道了共載化療藥物和基因藥物的陽(yáng)離子納米載體,該載藥納米載體能同時(shí)達(dá)到化療和基因治療的目的,相互協(xié)同抑制腫瘤的生長(zhǎng)�；诖�,本文在課題組前期研究的基礎(chǔ)上進(jìn)一步開(kāi)展共載化學(xué)藥物和CpG ODN的GA-PEI-PLGA納米給藥系統(tǒng)的研究。在前期的研究中,本課題組已成功利用EDC·HCl以及NHS的催化作用,將肝靶向性分子GA、疏水性PLGA和親水性PEI通過(guò)化學(xué)合成方法形成GA修飾的PEI-PLGA共聚物——GA-PEI-PLGA。本文應(yīng)用TNBS法測(cè)定GA-PEI-PLGA中PLGA和GA的取代度分別為(11.48±0.48)%和(19.26±1.89)%。酸堿滴定法結(jié)果也表明雖然其質(zhì)子緩沖能力不如PEI,但GA-PEI-PLGA仍保留較好的質(zhì)子緩沖能力。本文以大鼠血漿中AST、ALT、TP及CRE的含量為指標(biāo),結(jié)合組織切片觀察,考察了GA-PEI-PLGA和PEI-PLGA納米粒對(duì)肝臟和腎臟的毒性。結(jié)果表明,經(jīng)多次注射后兩種納米粒在一定程度上均會(huì)影響肝臟的功能,但與PEI-PLGA納米粒相比,經(jīng)GA修飾后的GA-PEI-PLGA納米粒的肝毒性則大大降低。而PEI-PLGA納米粒和GA-PEI-PLGA納米粒均不會(huì)影響腎臟的功能。為了進(jìn)一步研究GA-PEI-PLGA納米粒共載化學(xué)藥物和基因藥物后的性質(zhì),本文選擇了羥基喜樹(shù)堿(HCPT)和CpG ODN作為模型藥物。HCPT可選擇性地抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶I而干擾DNA的復(fù)制,從而有效抑制肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。CpG ODN作為免疫佐劑可以誘導(dǎo)Th1型免疫反應(yīng),激活巨噬細(xì)胞、DC細(xì)胞和NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞分泌TNF-α、IFN-γ及IL-12等細(xì)胞因子殺傷腫瘤細(xì)胞,并能夠逆轉(zhuǎn)肝癌免疫抑制狀態(tài)。采用超聲乳化-減壓溶劑揮發(fā)法制備HCPT/GA-PEI-PLGA納米粒,并以載藥量和包封率為考察指標(biāo)對(duì)其制備工藝進(jìn)行優(yōu)化。優(yōu)化后的處方工藝為:藥物/載體比3:10、油相/水相體積比1:9、超聲功率60%、超聲時(shí)間15min。制得的載藥納米粒包封率高達(dá)(87.52±3.91)%,載藥量為(20.10±4.72)%。采用動(dòng)態(tài)透析法考察hcpt/ga-pei-plga納米粒的體外釋藥特性,結(jié)果表明ga-pei-plga納米粒可延緩hcpt的釋放,藥物釋放符合higuchi方程。凝膠電泳結(jié)果也表明,當(dāng)cpgodn與ga-pei-plga比例為1:10(w/w)時(shí),cpgodn能充分包載到hcpt/ga-pei-plga納米粒中。所制得的cpg/hcpt/ga-pei-plga納米粒呈類(lèi)球形,粒徑大小均一,分布均勻,穩(wěn)定性好,平均粒徑為(145.7±13.5)nm,zeta電位為(23.11±2.29)mv。本文選用人源性bel-7402肝癌細(xì)胞、hepg2肝癌細(xì)胞和spc-a-1肺腺癌細(xì)胞作為細(xì)胞模型來(lái)驗(yàn)證cpg/hcpt/ga-pei-plga納米粒能否協(xié)同抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。結(jié)果表明,hcpt/ga-pei-plga納米粒和hcpt/pei-plga納米粒對(duì)三種腫瘤細(xì)胞的抑制作用均顯著強(qiáng)于游離hcpt藥物。無(wú)論是單載hcpt還是共載hcpt和cpgodn,ga-pei-plga納米粒組對(duì)hepg2細(xì)胞和bel-7402細(xì)胞的抑制作用顯著高于pei-plga納米粒組,但是載藥后的ga-pei-plga納米粒和pei-plga納米粒對(duì)spc-a-1細(xì)胞的抑制作用卻沒(méi)有顯著性差異,這表明ga-pei-plga納米粒具有一定的肝靶向作用。雖然cpgodn對(duì)腫瘤細(xì)胞沒(méi)有直接殺傷作用,但是其能夠增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性,因此,cpg/hcpt/ga-pei-plga納米粒和cpg/hcpt/pei-plga納米粒對(duì)三種腫瘤細(xì)胞的抑制作用顯著強(qiáng)于hcpt/ga-pei-plga納米粒和hcpt/pei-plga納米粒,也顯著強(qiáng)于hcpt和cpgodn游離藥物的混合溶液。此外,選擇鼠源巨噬細(xì)胞raw264.7細(xì)胞考察了載藥納米粒的免疫刺激活性。由于hcpt能直接殺傷raw264.7細(xì)胞,cpg/hcpt/ga-pei-plga納米粒刺激raw264.7細(xì)胞分泌tnf-α的量不如cpg/ga-pei-plga納米粒,但cpg/hcpt/ga-pei-plga納米粒仍能保持較好的免疫刺激活性。hcpt/ga-pei-plga納米粒在小鼠體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,尾靜脈注射給藥后,hcpt/pei-plga納米粒組和hcpt注射液組中藥物隨著血液分布至全身各器官,而hcpt/ga-pei-plga納米粒組中藥物主要積聚在肝臟部位,肝臟的藥物濃度始終遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于血漿、心、脾、肺和腎等器官組織,表明ga-pei-plga納米粒具有明顯的趨肝性,不僅能延長(zhǎng)hcpt在肝臟部位的作用時(shí)間,同時(shí)也能降低HCPT對(duì)其他臟器的毒性。GA-PEI-PLGA納米粒是一種具有廣闊應(yīng)用前景的主動(dòng)肝靶向納米給藥系統(tǒng)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R943

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