本文選題：瘦素　切入點：鈣瞬變　出處：《廣州醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：背景和目的 瘦素（Leptin）是肥胖基因（OB基因）的表達(dá)產(chǎn)物，肥胖者血漿Leptin明顯升高。肥胖是心力衰竭等心血管疾病的重要危險因素，與心力衰竭的發(fā)病密切相關(guān)。本研究意義在于明確Leptin對成年大鼠心肌細(xì)胞收縮功能作用及與鈣敏感性、氧化應(yīng)激和自噬的作用機制。 方法 利用成年大鼠心肌細(xì)胞進(jìn)行實驗，新鮮分離的心肌細(xì)胞用2μmol/L Fura-2/AM避光孵育30min（37oC），分別以1、10、100nM Leptin灌流，采用IonOptix光譜熒光檢測系統(tǒng)記錄30min內(nèi)心肌細(xì)胞鈣瞬變和收縮性的各項指標(biāo)；鈣敏感性實驗以不同濃度（1.8、2.4、3.6、5.4mM）外鈣灌流已孵育Leptin的心肌細(xì)胞，，記錄灌流外鈣后心肌細(xì)胞鈣瞬變熒光強度值和收縮性的各項指標(biāo)；用Leptin灌流已經(jīng)孵育Apocynin100μM、Tempol100μM和Rapamycin100nM的心肌細(xì)胞，觀察心肌細(xì)胞鈣瞬變、收縮性和鈣敏感性的各項指標(biāo)；Western blotting檢測心肌細(xì)胞p70S6K及其磷酸化蛋白、PKCε和自噬相關(guān)蛋白LC3B、Beclin1的表達(dá)情況。 結(jié)果 （1）心肌細(xì)胞鈣瞬變結(jié)果顯示，Lep1nM在30min內(nèi)鈣瞬變值只有peak值有明顯下降的趨勢（P0.05），bl、TB50%和TP50%值沒有明顯變化（P0.05）；Lep10nM在30min內(nèi)bl、peak、TB50%和TP50%鈣瞬變值均有明顯下降的趨勢（P0.05）；Lep100nM對bl和peak鈣瞬變值有明顯下降的趨勢（P0.05）。 （2）心肌細(xì)胞收縮結(jié)果顯示，Lep1nM在30min內(nèi)使TPS50%、TR50%收縮值明顯增加（P0.05），PS、±dL/dtmax值沒有明顯變化（P0.05）；Lep10nM使PS和+dL/dtmax的收縮值明顯下降（P0.05）；Lep100nM使收縮值除TPS50%沒有明顯變化外，PS、TR50%和±dL/dtmax值均有明顯差異（P0.05）。 （3）鈣敏感性實驗結(jié)果顯示，Leptin能降低由不同濃度（1.8、2.4、3.6、5.4mM）外鈣灌流心肌細(xì)胞的敏感性水平，PS和±dL/dtmax值均明顯減弱，TR50%值時間顯著延長。 （4）Apocynin和Tempol作用的心肌細(xì)胞，與CTL組相比，其鈣瞬變和收縮性指標(biāo)與鈣敏感性結(jié)果均無明顯變化，兩者分別與Leptin同時作用于心肌細(xì)胞，均能阻斷Leptin減少細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度、減弱細(xì)胞收縮力的作用和降低鈣敏感性水平。Rapamycin作用的心肌細(xì)胞，與CTL組相比，其鈣瞬變和收縮值無明顯變化，但與Leptin同時作用于心肌細(xì)胞，Rapamycin能阻斷Leptin減少細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度和減弱細(xì)胞收縮功能的作用。 （5）Western blotting結(jié)果顯示，與CTL組相比，Lep組自噬相關(guān)蛋白LC3B和Beclin1的表達(dá)均下降（P0.05），PKCε蛋白水平升高（P0.05），但都能分別被Apocynin和Tempol阻斷。同樣地，Rapamycin與Leptin的實驗結(jié)果中，與CTL組相比，Lep組自噬相關(guān)蛋白LC3B和Beclin1的表達(dá)均下降（P0.05），p-p70S6K蛋白水平升高（P0.05），但能被Rapamycin阻斷。 結(jié)論 Leptin減少細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度，減弱心肌的收縮力，并降低鈣敏感性水平，Apocynin、Tempol和Rapamycin均能阻斷Leptin對心肌細(xì)胞的作用，其機制與氧化應(yīng)激和自噬相關(guān)。
[Abstract]:Background and purpose. Leptin (Leptin) is the expression product of obesity gene (OB gene), and plasma Leptin is significantly increased in obese patients. Obesity is an important risk factor for cardiovascular diseases such as heart failure. The purpose of this study is to clarify the effects of Leptin on the contractile function of cardiac myocytes in adult rats and its mechanism of calcium sensitivity, oxidative stress and autophagy. Method. The freshly isolated cardiomyocytes were incubated with 2 渭 mol/L Fura-2/AM for 30 mins at 37oC, then perfused with 110100nM Leptin respectively. The indexes of calcium transient and contractility of myocardial cells in 30min were recorded by IonOptix fluorescence detection system. The calcium sensitivity test was conducted with different concentrations of 1.8U 2.4C 3.6mM) to incubate cardiomyocytes with Leptin, and to record the indexes of calcium transient fluorescence intensity and contractility of cardiomyocytes after perfusion, and to incubate the cardiomyocytes of Apocynin100 渭 Mil Tempol100 渭 M and Rapamycin100nM with Leptin. The changes of calcium transient, contractility and calcium sensitivity in cardiomyocytes were observed. Western blotting was used to detect the expression of p70S6K and its phosphorylated protein, PKC 蔚, and autophagy associated protein LC3B, Beclin1. Results. (1) the results of calcium transient of myocardial cells showed that the transient values of Lep1nM in 30min only showed a significant decrease in peak value. There was no significant change in TB50% and TP50% values of P0.05 P0.05 + Lep10nM in 30min. There was a significant decrease in TB50% and TB50% calcium transient values of Lep1nM in 30min and the transient changes of calcium in both Bl and peak were observed in Lep100nM. There is a significant downward trend in the value of P0. 05%. 2) the contractile results of cardiac myocytes showed that Lep1nM significantly increased the contraction value of TPS50 / TPS50 / TPS50 / TPS50 / TPS50, and the 鹵dL/dtmax value did not significantly change P0.05Lep10nM decreased the contractile values of PS and dL/dtmax significantly (P0.05Lep100nM). There were significant differences in the contractile values of PS50% and 鹵dL/dtmax (P0.05nM) except TPS50%. The results of calcium sensitivity test showed that leptin could decrease the sensitivity level of cardiac myocytes perfused with calcium from different concentrations of 1.8U 2.4U 3.6mM, PS value and 鹵dL/dtmax value were significantly weakened and the time of TR50% was significantly prolonged. Compared with CTL group, the calcium transient and contractility indexes and calcium sensitivity of cardiac myocytes treated with Apocynin and Tempol had no significant changes. Both of them treated with Leptin at the same time could block the reduction of intracellular free calcium concentration by Leptin. Compared with CTL group, there was no significant change in calcium transient and contractile values in cardiac myocytes with decreased cell contractility and calcium sensitivity. But at the same time as Leptin, Rapamycin could block the effect of Leptin on reducing intracellular free calcium concentration and decreasing cell contraction function. The results of Western blotting showed that the expression of LC3B and Beclin1 of autophagy associated protein in CTL group was significantly lower than that in CTL group, but both of them could be blocked by Apocynin and Tempol, respectively. In the same way, in the experimental results of Rapamycin and Leptin, the expression of LC3B and Beclin1 in Lep group was decreased, and the level of PKC-蔚 protein in P0.05 was increased, but both could be blocked by Apocynin and Tempol, respectively. Compared with CTL group, the expression of autophagy associated protein (LC3B) and Beclin1 in Lep group decreased significantly, and the level of p-p70S6K protein increased, but could be blocked by Rapamycin. Conclusion. Leptin reduced intracellular free calcium concentration, decreased myocardial contractility, and decreased calcium sensitivity. Both Apocyninine Tempol and Rapamycin could block the effect of Leptin on cardiomyocytes, and its mechanism was related to oxidative stress and autophagy.
【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R965

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：1656267