發(fā)布時(shí)間：2018-03-20 03:04

  本文選題：磁性微球　切入點(diǎn)：免疫PCR　出處：《西北師范大學(xué)》2014年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：磁性高分子微球（MMS）是指通過(guò)一定的方法將磁性材料和化學(xué)、生物等高分子材料結(jié)合而形成的一種直徑在納米至微米級(jí)且具有磁響應(yīng)性的高分子復(fù)合型微球。由于其粒徑小，比表面積大，可偶聯(lián)的生物分子容量大，且能分散在體系中不易沉降，因此，他們被廣泛應(yīng)用在生物技術(shù)和生物醫(yī)藥工程方面，比如細(xì)胞分離，免疫酶，蛋白分離，，靶向藥物和生物化學(xué)分析等。 本文采用反相聚合包埋技術(shù)制備以Fe3O4為磁核，瓊脂糖為殼層的瓊脂糖磁性微球（AMM），依次用環(huán)氧氯丙烷、谷氨酸和精氨酸對(duì)其進(jìn)行表面化學(xué)修飾后制得環(huán)氧基化磁性微球（EMM）、羧基化磁性微球（CMM）和氨基化磁性微球（AR-CMM）。通過(guò)傅里葉變換紅外光譜、熱重分析和振動(dòng)樣品磁力測(cè)定等方法表征磁性微球的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linkedimmunosorbent assay，ELISA）檢測(cè)不同磁性微球?qū)σ腋伪砻婵乖墓潭芰�。結(jié)果表明，瓊脂糖磁性微球、環(huán)氧基化磁性微球、羧基化磁性微球和氨基化磁性微球的平均粒徑分別為20.6、30.3、31.4和33.6μm；磁含量分別為35.33%、50.53%、45.7%和38.9%；環(huán)氧基含量為140.19μmol·g1，羧基含量為253.0μmol·g1，氨基含量為59.1μmol·g1；具有良好的單分散性、超順磁性和生物兼容性；經(jīng)化學(xué)改性后磁性微球?qū)σ腋伪砻婵乖墓潭芰兴黾樱渲恤然判晕⑶蚬潭芰ψ顝?qiáng)，其次為環(huán)氧基化磁性微球和氨基化磁性微球。 另外，我們?cè)隰然判晕⑶虻幕A(chǔ)上建立了兩種檢測(cè)乙肝表面抗原的新方法：一種方法是磁性微球免疫PCR方法（magnetic microsphere Immuno PCR,MMS-Im-PCR），該方法以羧基化磁性微球作為載體，固定上乙肝表面抗原后加入一抗形成抗原抗體復(fù)合物，用單鏈DNA信號(hào)分子偶聯(lián)抗體形成抗原抗體-DNA復(fù)合物，經(jīng)實(shí)時(shí)定量PCR（real-time quantitative PCR，RT-PCR）擴(kuò)增后，將抗原信號(hào)傳遞并放大為核酸信號(hào)和電信號(hào)，建立了一種利用磁性微球檢測(cè)乙肝表面抗原的免疫PCR技術(shù)體系。另一種方法是核酸信標(biāo)配基PCR方法（NBA-PCR）。該方法在羧基化磁性微球表面偶聯(lián)上鏈霉親和素，利用生物素和鏈霉親和素的高親和力將生物素修飾的乙肝表面抗原特異性核酸適配體連接在鏈霉親和素磁性微球上，代替乙肝表面抗原作為信標(biāo)配基檢測(cè)分子，與一抗結(jié)合形成信標(biāo)配基-抗體復(fù)合物，再利用信標(biāo)配基-抗體復(fù)合物與DNA信號(hào)分子結(jié)合形成信標(biāo)配基-抗體-DNA復(fù)合物，經(jīng)過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增將特異性核酸適配體DNA配基信號(hào)經(jīng)抗體傳遞到DNA信號(hào)分子，實(shí)現(xiàn)了信標(biāo)配基信號(hào)和抗體信號(hào)，核酸信號(hào)之間的雙向傳遞并建立了一種利用核酸適配體檢測(cè)乙肝表面抗原的信標(biāo)配基PCR技術(shù)體系。 本實(shí)驗(yàn)為磁性微球應(yīng)用于某種疾病診斷試劑盒的研制和縮短臨床檢測(cè)窗口期方面奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
[Abstract]:Magnetic polymer microspheres (MMSs) is a kind of polymer composite microspheres with the diameter of nanometer to micron and magnetic response, which is formed by combining magnetic materials with chemical, biological and other polymer materials by a certain method. Because of their large specific surface area, large coupling capacity, and the ability to disperse in the system, they are not easy to settle, so they are widely used in biotechnology and biomedical engineering, such as cell separation, immune enzyme, protein separation, Targeted drugs and biochemical analysis. In this paper, agarose magnetic microspheres (AMMs) with Fe3O4 as magnetic nucleus and agarose as shell layer were prepared by reverse phase polymerization entrapment technique, followed by epichlorohydrin. After surface chemical modification with glutamate and arginine, EMMM, CMM (carboxylated magnetic microspheres) and AR-CMM (amino magnetic microspheres) were prepared by Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR). The structure and properties of magnetic microspheres were characterized by thermogravimetric analysis and magnetic measurement of vibrating samples. Enzyme linked immunosorbent assay (Elisa) was used to detect the immobilization ability of different magnetic microspheres to hepatitis B surface antigen. The average diameters of epoxy, carboxylated and amino magnetic microspheres were 20.630.3 渭 m and 33.6 渭 m, respectively. The magnetic contents were 35.33 ~ 50.53 and 45.7% and 38.9%, respectively. The epoxy group content was 140.19 渭 mol 路g ~ (-1), carboxyl content was 253.0 渭 mol 路g ~ (-1), amino content was 59.1 渭 mol 路g ~ (-1). Superparamagnetism and biological compatibility; the immobilization ability of chemically modified magnetic microspheres to hepatitis B surface antigen was increased, of which carboxylation magnetic microspheres were the strongest, followed by epoxide magnetic microspheres and amino magnetic microspheres. In addition, we have established two new methods for the detection of hepatitis B surface antigen based on carboxylation magnetic microspheres. One method is magnetic microsphere Immuno PCR method, MMS-Im-PCRN, which uses carboxylated magnetic microspheres as carrier. Hepatitis B surface antigen was immobilized and an antigen-antibody complex was added. The antigen-DNA complex was conjugated with single-stranded DNA signal molecule to form antigen-DNA complex. The antigen antibody was amplified by real-time quantitative PCR(real-time quantitative PCRRT-PCR. The antigen signal is transmitted and amplified into nucleic acid signals and electrical signals. An immune PCR technique system for the detection of hepatitis B surface antigen by magnetic microspheres was established. Another method was the nucleic acid standard ligand PCR method, which coupled Streptavidin on the surface of carboxylated magnetic microspheres. Biotin and streptavidin were used to bind the biotin modified hepatitis B surface antigen specific aptamer to the magnetic microspheres of Streptomycin instead of hepatitis B surface antigen as standard ligand detection molecules. A signal ligand antibody complex is formed by binding with a single antibody, and then a signal ligand antibody antibody complex is formed by combining the signal molecule of DNA with a signal ligand antibody complex. The specific aptamer DNA ligand signal was transmitted to the DNA signal molecule by real-time quantitative PCR amplification, and the standard ligand signal and antibody signal were realized. The bidirectional transmission of nucleic acid signals and the establishment of a standard ligand PCR system for the detection of hepatitis B surface antigen using aptamer of nucleic acid. This experiment has laid a solid foundation for the application of magnetic microspheres in the development of a diagnostic kit and in shortening the window period of clinical detection.
【學(xué)位授予單位】：西北師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R943

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉先橋,官月平,邢建民,馬志亞,劉會(huì)洲;磁性微球的制備及在細(xì)胞分離中的應(yīng)用[J];化學(xué)通報(bào);2004年10期

2 陳繼偉;鄭必勝;;鹽藻與高分子磁性微球的相互作用研究[J];海湖鹽與化工;2006年03期

3 周超;戴紅蓮;;磁性微球的制備[J];化工中間體;2006年07期

4 楊雄波;許瑞珍;王忠龍;陳德彝;;P(St-co-MAA-co-AM)磁性微球的制備與特性[J];三峽大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2006年06期

5 孔絲紡;文秀芳;皮丕輝;程江;楊卓如;;磁性微球的制備及其在水處理中的應(yīng)用[J];應(yīng)用化工;2007年05期

6 王芳;韓德艷;張海麗;;殼聚糖磁性微球的制備及其對(duì)牛血清白蛋白的吸附性能研究[J];化學(xué)與生物工程;2007年08期

7 王健;馮玉杰;;殼聚糖磁性微球的制備和工藝參數(shù)的優(yōu)化[J];磁性材料及器件;2008年06期

8 丁玲;李曦;張超燦;;磁性微球與牛血清白蛋白的相互作用[J];化學(xué)研究;2010年01期

9 馮國(guó)棟;趙衛(wèi)星;;磁性微球在生化領(lǐng)域中的應(yīng)用[J];化工時(shí)刊;2010年06期

10 劉曉紅;布和巴特爾;黃波;遲佳龍;;生物提取用磁性微球的制備及其性能[J];化學(xué)工程師;2010年09期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 陽(yáng)承利;官月平;邢建民;劉俊果;劉會(huì)洲;;均一尺寸磁性微球的制備及在蛋白質(zhì)分離中的應(yīng)用[A];第一屆全國(guó)化學(xué)工程與生物化工年會(huì)論文摘要集(下)[C];2004年

2 王占科;;微球阻抗編碼液態(tài)生物芯片系統(tǒng)——種原創(chuàng)性檢驗(yàn)技術(shù)平臺(tái)新思路[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會(huì)2010年學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2010年

3 楊萬(wàn)有;柴立民;朱俊利;;微磁結(jié)構(gòu)粉體在工、農(nóng)、醫(yī)等領(lǐng)域的應(yīng)用[A];2001年海南全國(guó)粉體技術(shù)研討會(huì)論文集[C];2001年

4 董曉慶;晏樂(lè)三;莫國(guó)軍;陳學(xué)思;景遐斌;;聚肽修飾磁性微球基谷胱甘肽敏感藥物釋放體系[A];2009年全國(guó)高分子學(xué)術(shù)論文報(bào)告會(huì)論文摘要集（下冊(cè)）[C];2009年

5 韓朝暉;李步海;察冬梅;劉國(guó)詮;祝偉;程冬娥;;堿性品紅修飾磁性微球的制備及其在分枝桿菌分離中的應(yīng)用初探[A];全國(guó)生物醫(yī)藥色譜及相關(guān)技術(shù)學(xué)術(shù)交流會(huì)（2012）會(huì)議手冊(cè)[C];2012年

6 郭培志;張國(guó)梁;周萌;;鐵氧體磁性微球的控制制備[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第28屆學(xué)術(shù)年會(huì)第15分會(huì)場(chǎng)摘要集[C];2012年

7 劉崢;呂慧丹;;交聯(lián)海藻酸鈉磁性微球的制備及固定化胰蛋白酶研究[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第四屆有機(jī)化學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2005年

8 錢(qián)駿;張爽;周媛;董萍;華道本;;定位聚合制備表面離子印跡磁性微球用于水中鈾(Ⅵ)的快速有效去除[A];第十三屆全國(guó)核化學(xué)與放射化學(xué)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2014年

9 蓋青青;張濤;屈鋒;張玉奎;;原子轉(zhuǎn)移自由基聚合法制備蛋白質(zhì)分子印跡磁性微球[A];全國(guó)生物醫(yī)藥色譜學(xué)術(shù)交流會(huì)（2010景德鎮(zhèn)）論文集[C];2010年

10 徐艷蓮;胡炳環(huán);林金火;;漆酚縮甲醛磁性微球的制備與表征[A];2005年全國(guó)高分子學(xué)術(shù)論文報(bào)告會(huì)論文摘要集[C];2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前7條

1 賀茂芳;功能化膜和磁性微球?qū)ι锓肿拥倪x擇性分離分析[D];西北大學(xué);2016年

2 樊花;功能化磁性微球?qū)樖蕉u基物質(zhì)的分離富集性能[D];西北大學(xué);2015年

3 張磊;基于脲醛樹(shù)脂模板構(gòu)建磁性微球[D];天津大學(xué);2008年

4 王健;磁性高分子微球的制備及對(duì)生物物質(zhì)的吸附和應(yīng)用研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2008年

5 李嫣;蛋白質(zhì)的磁性微球快速酶解與高效富集新方法研究[D];復(fù)旦大學(xué);2008年

6 徐宏;單分散、高飽和磁化強(qiáng)度超順磁性微球的可控制備與生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用[D];上海交通大學(xué);2008年

7 陶利軍;亞甲藍(lán)磁性明膠微球的制備及應(yīng)用于疼痛治療的可行性研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 楊文霞;基于新型信號(hào)檢測(cè)技術(shù)的蛋白激酶活性分析方法研究[D];河北大學(xué);2015年

2 束曉文;表面離子印跡化磁性微球的合成及用于高錸酸根吸附研究[D];蘇州大學(xué);2015年

3 李蓉;基于表面等離子體共振技術(shù)和磁性微球免疫熒光技術(shù)對(duì)腫瘤標(biāo)志物的新型分析方法研究[D];南昌大學(xué);2015年

4 喻陽(yáng);模擬X-3B廢水處理中核殼結(jié)構(gòu)磁性微球OMS-2/SBR相互影響的研究[D];武漢紡織大學(xué);2016年

5 張真;磁性微球負(fù)載金屬催化劑的制備及應(yīng)用[D];廣東工業(yè)大學(xué);2016年

6 曾榮華;基于氨基功能化磁性微球的檢測(cè)新技術(shù)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2016年

7 劉夢(mèng)杰;碳磁性微球?qū)︺t的吸附能力以及苯丙氨酸鋰和磺酸類(lèi)配合物的催化性能研究[D];河南理工大學(xué);2014年

8 張靜;表面光引發(fā)聚合制備功能化磁性微球及選擇性萃取奶樣中獸藥殘留[D];河北大學(xué);2016年

9 陳娜;借助間隔臂進(jìn)行色素配基功能化的磁性微球的制備及應(yīng)用[D];河北大學(xué);2016年

10 林家洪;磁性微球固定化漆酶及其去除有機(jī)污染物的應(yīng)用[D];華南農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

本文編號(hào)：1637204