發(fā)布時間：2018-03-05 20:05

  本文選題：胰島素樣生長因子　切入點：力達霉素　出處：《中國藥學雜志》2016年12期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的制備一種由胰島素樣生長因子1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)和力達霉素(lidamycin,LDM)構成的融合蛋白,并對其抗非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)活性進行檢測。方法合成融合蛋白基因ldp-igf并將其插入到p ET30a載體中,再將獲得的重組表達載體p ET30-ldp-igf轉化至大腸桿菌中進行誘導表達,得到融合蛋白LDP-IGF。采用細胞免疫熒光實驗和基于流式細胞術的親和實驗檢測LDP-IGF蛋白與非小細胞肺癌細胞的結合能力;力達霉素的發(fā)色團(AE)與LDP-IGF蛋白在體外進行分子組裝,獲得強化融合蛋白LDP-IGF-AE。四甲基偶氮唑藍法實驗檢測LDP-IGF-AE對不同非小細胞肺癌細胞的體外殺傷活性,PI染色結合流式細胞術檢測LDP-IGF-AE對細胞周期的影響以及Annexin V-FITC/PI雙染法檢測LDP-IGF-AE對非小細胞肺癌細胞凋亡的誘導作用。結果經(jīng)過誘導LDP-IGF蛋白在大腸桿菌中以包涵體形式表達。采用Ni~(2+)親和層析技術對包涵體蛋白進行分離純化,經(jīng)過變性和分步透析復性后獲得了高純度、有活性的融合蛋白LDP-IGF。親和實驗結果顯示,LDP-IGF蛋白與非小細胞肺癌細胞具有高度的親和力。與AE分子進行組裝后獲得的強化融合蛋白LDPIGF-AE對不同的非小細胞肺癌細胞系均有非常強烈的殺傷活性,且其殺傷活性顯著高于力達霉素。細胞周期阻滯和細胞凋亡實驗結果顯示,極低濃度的LDP-IGF-AE處理可使非小細胞肺癌細胞阻滯于G_2/M期,并可顯著地誘導細胞發(fā)生凋亡。結論融合蛋白LDP-IGF-AE對非小細胞肺癌細胞有強大的體外抗腫瘤活性,具有發(fā)展成為非小細胞肺癌靶向治療劑的潛能。
[Abstract]:Objective to prepare a fusion protein composed of insulin-like growth factor (IGF-1) and lidamycinia (LDM-1), and to detect its activity in non-small cell lung cancer (NSCLC). Methods the fusion protein gene ldp-igf was synthesized and inserted into p ET30a vector. The recombinant expression vector p ET30-ldp-igf was transformed into Escherichia coli for induction expression. The fusion protein LDP-IGF was obtained. The binding ability of LDP-IGF protein to non-small cell lung cancer cells was detected by cell immunofluorescence assay and affinity assay based on flow cytometry. The chromophore of lidamycin (Lidamycin) and LDP-IGF protein were assembled in vitro. The enhanced fusion protein LDP-IGF-AE.Tetramethylazolium blue assay was used to detect the cytotoxicity of LDP-IGF-AE to different non-small cell lung cancer cells in vitro. The effect of LDP-IGF-AE on cell cycle was detected by flow cytometry and Annexin V-FITC / Pi double staining method was used to detect the cell cycle. Results the LDP-IGF protein was expressed as inclusion body in E. coli. Ni~(2 affinity chromatography was used to isolate and purify the inclusion body protein. After denaturation and stepwise dialysis renaturation, high purity was obtained. The results of affinity assay showed that LDP-IGF protein had a high affinity with non-small cell lung cancer cells. The enhanced fusion protein LDPIGF-AE obtained by assembly with AE molecules on different non-small cell lung cancer cell lines. Have very strong killing activity, The results of cell cycle arrest and apoptosis test showed that very low concentration of LDP-IGF-AE could block NSCLC cells in G _ 2 / M phase. Conclusion the fusion protein LDP-IGF-AE has strong antitumor activity against non-small cell lung cancer cells in vitro and has the potential to become a target therapeutic agent for non-small cell lung cancer.
【作者單位】： 新鄉(xiāng)醫(yī)學院;河南省分子診斷與醫(yī)學檢驗技術協(xié)同創(chuàng)新中心;新鄉(xiāng)醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院;中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)學院醫(yī)藥生物技術研究所;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(81202447)
【分類號】：R96

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 吳慶洲;饒桂榮;楊富強;陳光明;;重組人白細胞介素2-干擾素γ融合蛋白結構建模與活性分析[J];華南國防醫(yī)學雜志;2010年02期

2 李芝芹;邱爽;雷楗勇;陳蘊;金堅;;重組人血清白蛋白-干擾素β融合蛋白的分離純化及質(zhì)控方法的建立[J];中國生物制品學雜志;2012年10期

3 黃麗霞;尹丙姣;王晶;梁慧芳;曾慶嶺;姜小丹;李卓婭;;TNFR1BP/IgGFc融合蛋白載體的構建、表達及其生物學活性研究[J];華中科技大學學報(醫(yī)學版);2008年05期

4 富巖;韓國;楊小楠;富俞淞;邢靜;胡俊霞;陳穎;云文琦;于在林;;兩種具長效性重組人血清白蛋白/干擾素α融合蛋白表達工程菌的構建及融合蛋白的理化特性研究[J];中國醫(yī)藥生物技術;2011年02期

5 富巖;韓國;富俞淞;楊小楠;邢靜;于在林;;具長效性重組人血清白蛋白/粒細胞刺激因子融合蛋白的理化特性研究[J];中國醫(yī)藥生物技術;2011年03期

6 李保衛(wèi);胡云峰;王麗非;崔智慧;洪斌;邵榮光;;單鏈抗體與力達霉素融合蛋白在鏈霉菌中的表達[J];中國醫(yī)藥生物技術;2007年05期

7 張梅;鄔敏辰;金堅;;人甲狀旁腺激素(1-34)二聯(lián)體與人血清白蛋白融合蛋白的構建及表達[J];生物技術通報;2009年07期

8 李波;段作營;張紅梅;雷楗勇;陳蘊;唐瑜菁;金堅;李華鐘;;人白介素2-人血清白蛋白融合蛋白的純化及活性鑒定[J];食品與生物技術學報;2012年03期

9 王麗興;張世勇;吳小鋒;蒲韻竹;陳怡君;尚艷楠;查曉丹;趙恩峰;趙寶全;;對氧磷酶1融合蛋白的表達及其生物活性[J];國際藥學研究雜志;2014年03期

10 王瑋;丁紅梅;李慧;趙強;李潔;夏偉;蘇雪婷;陳穎;黃皚雪;高波;李少華;邵寧生;;重組人腫瘤壞死因子α抑制肽-抗炎酸性尾巴融合蛋白的生物學活性檢測[J];生物技術通訊;2012年06期

相關會議論文 前6條

1 姜文國;張樹平;;基于4-1BBL的雙功能融合蛋白的構建及比較[A];2009醫(yī)學前沿論壇暨第十一屆全國腫瘤藥理與化療學術會議論文集[C];2009年

2 陳靜;陳樞青;;血清白蛋白與PTH(1-34)融合蛋白的克隆、表達及鑒定[A];2006年全國生化與生物技術藥物學術年會論文集[C];2006年

3 曲恒燕;劉澤源;孫曼霽;;TAT-CNTF融合蛋白對Aβ誘導的SH-SY5Y細胞損傷的保護研究[A];2008第十一次全國臨床藥理學學術大會論文集[C];2008年

4 王光裕;高凱;王軍志;;TNFR:Fc融合蛋白生物類似藥質(zhì)量可比性初步研究[A];2013年中國藥學大會暨第十三屆中國藥師周論文集[C];2013年

5 李響;饒春明;陶磊;裴德寧;郭瑩;王軍志;;LC-MS/MS法對融合蛋白FP3的氨基酸全序列測定[A];2011年中國藥學大會暨第11屆中國藥師周論文集[C];2011年

6 袁力勇;饒春明;李響;韓春梅;郭瑩;丁有學;王軍志;;GM-CSF／IL-3融合蛋白質(zhì)量標準的研究和建立[A];2006年全國藥物質(zhì)量分析學術研討會——《藥物分析雜志》第二屆普析通用杯優(yōu)秀論文評選頒獎會論文集[C];2006年

相關重要報紙文章 前1條

1 ;吉大抗腫瘤生物工程新藥進入臨床試驗[N];中國高新技術產(chǎn)業(yè)導報;2005年

相關博士學位論文 前7條

1 張海濤;重組人干擾素-α2b與內(nèi)皮抑素肽融合蛋白抗腫瘤研究[D];哈爾濱師范大學;2012年

2 鐘根深;以明膠酶為靶點的小型化抗體與力達霉素構建的基因工程強化融合蛋白及其抗腫瘤活性的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2010年

3 黃巖山;重組人血清白蛋白—干擾素α 2b融合蛋白的研究[D];浙江大學;2007年

4 沈其;人血清白蛋白融合的人白介素1受體拮抗劑的高效表達及其在動物水平的藥效學初步研究[D];浙江大學;2012年

5 竇文芳;長效融合蛋白GGH的構建、表達、純化及其初步藥效學和藥代動力學[D];江南大學;2008年

6 王勃;Ⅰ型咪唑啉受體候選蛋白生物學特性與功能初步研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院;2007年

7 智慶文;人表皮生長因子的偏愛性表達及生化藥理性質(zhì)[D];四川農(nóng)業(yè)大學;2005年

相關碩士學位論文 前10條

1 孫博;新型人血清白蛋白和干擾素α2b融合蛋白的成藥性研究[D];沈陽藥科大學;2009年

2 何椿鵬;不同TNFR-Fc融合蛋白N-糖基化結構分析及其對蛋白功能影響的初步研究[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

3 陳其亮;重組人胰高糖素樣肽-1突變體的串聯(lián)體與人血清白蛋白融合蛋白的純化及純度鑒定[D];江南大學;2008年

4 殷亮;低分子量尿激酶與ATF-Fc融合蛋白的研究[D];吉林大學;2006年

5 夏姍;可解離的人胰高血糖素樣肽-1與人血清白蛋白融合蛋白的初步研究[D];安徽大學;2015年

6 李芝芹;重組人白蛋白—干擾素β融合蛋白的制備及質(zhì)控方法的建立[D];江南大學;2012年

7 雷楗勇;表達β干擾素與人血清白蛋白融合蛋白工程菌的構建[D];江南大學;2006年

8 李靈玲;人甲狀旁腺激素（1-34）基因的克隆、表達及水蛭素12肽—瑞替普酶雙功能融合蛋白的構建[D];四川大學;2007年

9 陳靜;人甲狀旁腺素（1-34）及血清白蛋白與人甲狀旁腺素（1-34）融合蛋白的表達、純化與鑒定[D];浙江大學;2005年

10 王楠;生長激素釋放激素—白蛋白融合蛋白的克隆表達和活性鑒定[D];沈陽藥科大學;2005年

，

本文編號：1571681