本文關鍵詞： 增生性瘢痕 成纖維細胞 青蒿琥酯 細胞增殖 膠原 果蠅抗皮膚生長因子原體3 結締組織生長因子 基質金屬蛋白酶1　出處：《廣西醫(yī)科大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的和意義：將青蒿琥酯作用于體外培養(yǎng)的人皮膚增生性瘢痕成纖維細胞（HSFBs），檢測細胞的增殖變化及其膠原沉積狀況，同時檢測膠原合成及降解相關因子的表達，為青蒿琥酯抑制皮膚瘢痕增生提供依據(jù)。 方法：1、采集手術切除的患者皮膚增生性瘢痕組織標本，組織塊法原代培養(yǎng)分離獲得HSFBs。形態(tài)學觀察結合免疫組化抗波形蛋白及角蛋白染色對所獲得的細胞進行鑒定。 2、實驗共分為5組，分別為空白對照組，青蒿琥酯（75μM）組，青蒿琥酯（150μM）組，青蒿琥酯（300μM）組及青蒿琥酯（600μM）組。 3、青蒿琥酯作用于HSFBs24小時后，通過倒置顯微鏡觀察HSFBs的形態(tài)變化，四甲基偶氮唑藍（MTT）法檢測青蒿琥酯作用后對HSFBs增殖的影響。 4、用熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應（FQ-RT-PCR）法檢測青蒿琥酯對HSFBs產(chǎn)生Ⅰ型前膠原α2鏈（proCOL1A2），Ⅲ型前膠原α1鏈（proCOL3A1），果蠅抗皮膚生長因子原體3（Smad3）、結締組織生長因子（CTGF）及基質金屬蛋白酶1（MMP-1）基因轉錄的影響。 5、運用免疫印跡法（WB）檢測青蒿琥酯作用后HSFBs的Ⅰ、Ⅲ型膠原及Smad3及CTGF蛋白的表達情況。雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測細胞上清液中的MMP-1的蛋白含量。 結果：1、所培養(yǎng)細胞呈長梭形，免疫組化抗波形蛋白染色陽性，抗角蛋白染色陰性。 2、MTT檢測顯示，和對照組相比，各干預組HSFBs的OD值明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P0.01）。倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)青蒿琥酯作用后，，HSFBs的細胞形態(tài)亦發(fā)生較明顯改變。 3、檢測發(fā)現(xiàn)各濃度青蒿琥酯作用24小時后，proCOL1A2及proCOL3A1mRNA表達均明顯下調，與空白對照組比較有統(tǒng)計學差異（P0.01），并伴有Smad3及CTGF mRNA表達下調，與空白對照組比較有統(tǒng)計學差異（P0.01）；而MMP-1的mRNA表達則不同程度的上調。 4、青蒿琥酯作用24小時后，免疫印跡法檢測發(fā)現(xiàn)HSFBs的Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原蛋白的表達明顯降低，與空白對照組比較有統(tǒng)計學差異（P0.01）；伴有Smad3及CTGF蛋白表達不同程度的下調。 5、ELISA法檢測發(fā)現(xiàn)青蒿琥酯作用后細胞培養(yǎng)上清液中的MMP-1的含量不同程度的上升。 結論：1、青蒿琥酯能抑制體外培養(yǎng)的HSFBs的細胞增殖，并在一定范圍內具有濃度依賴性。 2、青蒿琥酯作用于HSFBs后，可通過下調其Smad3和CTGF的表達，減少膠原的轉錄及合成；同時上調其MMP-1的分泌，加速膠原的降解，從而減少膠原沉積，這可能是青蒿琥酯抑制皮膚瘢痕纖維增生的機制之一。
[Abstract]:Aim and significance: artesunate was applied to human skin hypertrophic scar fibroblasts in vitro to detect the proliferation and deposition of collagen and the expression of factors related to collagen synthesis and degradation. It provides evidence for artesunate to inhibit scar proliferation of skin. Methods HSFBswere collected from the skin hypertrophic scar tissues of patients with surgical excision. HSFBswere isolated by tissue mass method. The cells were identified by morphological observation combined with immunohistochemical staining of vimentin and keratin. 2. The experiment was divided into 5 groups: blank control group, artesunate 75 渭 M group, artesunate 150 渭 M) group, artesunate 300 渭 M) group and artesunate 600 渭 M) group. 3. The morphological changes of HSFBs were observed by inverted microscope, and the effects of artesunate on the proliferation of HSFBs were detected by tetramethyl azolium blue (MTT) method after treated with artesunate for an hour. 4. Fluorescence quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction (FQ-RT-PCR) was used to detect artesunate producing procollagen 偽 2 chain proCOL1A2, procollagen type 鈪

本文編號：1529073