本文關(guān)鍵詞： α-硫辛酸 氧化應(yīng)激 細(xì)胞凋亡 卵巢顆粒細(xì)胞 小鼠　出處：《西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)》2016年01期 　論文類(lèi)型：期刊論文

【摘要】：目的探討α-硫辛酸對(duì)小鼠顆粒細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中抗氧化水平和抗凋亡水平的影響。方法收集經(jīng)PMSG處理的小鼠卵巢顆粒細(xì)胞,經(jīng)原代培養(yǎng)24h后,添加終濃度為100μmol/L的α-硫辛酸繼續(xù)培養(yǎng)24h,測(cè)定氧化水平SOD、MDA和GSH-Px參數(shù),評(píng)價(jià)抗氧化能力,采用Trizol法提取各組細(xì)胞的RNA,進(jìn)行RT-PCR法檢測(cè)α-硫辛酸對(duì)caspase-3和caspase-9基因的表達(dá)情況的影響,同時(shí)利用細(xì)胞免疫熒光和ELISA法檢測(cè)caspase-3和caspase-9蛋白表達(dá),并分析α-硫辛酸降低細(xì)胞凋亡的作用。結(jié)果分離培養(yǎng)的小鼠卵巢顆粒細(xì)胞α-硫辛酸添加后,SOD和GSH-Px活性升高,MDA含量降低(P0.05);經(jīng)過(guò)RT-PCR擴(kuò)增技術(shù)獲得長(zhǎng)度為180bp的特異性caspase-3產(chǎn)物,獲得長(zhǎng)度為152bp的特異性caspase-9產(chǎn)物,α-硫辛酸添加可顯著性降低caspase-3和caspase-9mRNA的表達(dá)(P0.05);免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色顯示顆粒細(xì)胞caspase-3和caspase-9蛋白陽(yáng)性染色定位于細(xì)胞胞質(zhì),分別呈現(xiàn)綠色熒光和紅色熒光,細(xì)胞核呈藍(lán)色熒光;ELISA結(jié)果顯示α-硫辛酸添加后caspase-3和caspase-9酶活性顯著下調(diào)(P0.05)。結(jié)論小鼠顆粒細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中添加α-硫辛酸可明顯改變細(xì)胞抗氧化能力,對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡起到一定的保護(hù)作用。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of 偽 -lipoic acid on the levels of antioxidation and anti-apoptosis in mouse granulosa cells cultured in vitro. Methods the granulosa cells of mouse ovary treated with PMSG were collected and cultured for 24 hours. 偽 -lipoic acid with final concentration of 100 渭 mol/L was added to culture for 24 h, the oxidation level of SDD and GSH-Px parameters were measured, the antioxidant ability was evaluated, the Trizol method was used to extract the RNAs of each group, and the effect of 偽 -lipoic acid on the expression of caspase-3 and caspase-9 genes was detected by RT-PCR assay. At the same time, the expression of caspase-3 and caspase-9 protein was detected by cellular immunofluorescence and ELISA assay. The effect of 偽 -lipoic acid on cell apoptosis was analyzed. Results the activity of GSH-Px and activity of GSH-Px were increased after addition of 偽 -lipoic acid, and the specific caspase-3 product of 180 BP was obtained by RT-PCR amplification. A 152bp specific caspase-9 product was obtained. The addition of 偽 -lipoic acid significantly decreased the expression of caspase-3 and caspase-9mRNA, and immunofluorescence cytochemical staining showed that the positive staining of caspase-3 and caspase-9 protein was localized in the cytoplasm of granulosa cells. The results showed that the activity of caspase-3 and caspase-9 decreased significantly after addition of 偽 -lipoic acid. Conclusion the addition of 偽 -lipoic acid in granulosa cells can significantly change the antioxidant ability of mouse granulosa cells. It can protect ovarian granulosa cells from apoptosis induced by oxidative stress.
【作者單位】： 寧夏醫(yī)科大學(xué)/生育力保持教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/寧夏回族自治區(qū)生殖與遺傳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心/人體解剖與組織胚胎學(xué)系;
【基金】：寧夏自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.NZ11128)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R965

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本文編號(hào)：1511977