本文關(guān)鍵詞： 人有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體1 MDCK細(xì)胞 6-CFL 芹菜素 阿昔洛韋 阿德福韋　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：背景OAT1是有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)家族中的一員,主要表達(dá)在腎臟,負(fù)責(zé)將底物從血液攝取到腎小管上皮細(xì)胞內(nèi),從而促進(jìn)底物的腎小管分泌。OAT1與多種陰離子異源物產(chǎn)生的腎毒性有關(guān)。作為腎臟中主要的陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體,OAT1在藥物的代謝動力學(xué)、藥物-藥物相互作用以及藥物的毒理學(xué)中發(fā)揮著重要作用。但由于目前臨床上使用的OAT1抑制劑常出現(xiàn)安全性問題,因此篩選有效且低毒的OAT1抑制劑在降低OAT1介導(dǎo)的腎毒性或者避免OAT1介導(dǎo)的藥物-藥物相互作用方面具有很大的價值。黃酮類化合物由于安全性較高,且具備多種活性,因此一直是研究人員的關(guān)注點(diǎn)。臨床上,已有將黃酮類藥物作為輔助藥物與其他西藥聯(lián)合應(yīng)用以增加療效的例子,但其中的中藥-西藥相互作用(drug-druginteraction-DDI)常被人們忽略。藥物代謝酶與藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體介導(dǎo)的DDI是藥物-藥物相互作用發(fā)生的主要機(jī)制。藥物代謝酶介導(dǎo)的DDI在過去的幾十年里一直是研究人員的研究熱點(diǎn),而由藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體介導(dǎo)的DDI報道則相對較少。由于臨床上逐漸增多的DDI事件,且這些事件常由藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體介導(dǎo),因此藥物與轉(zhuǎn)運(yùn)體之間的相互作用的研究十分急迫且頗具臨床指導(dǎo)意義。芹菜素作為黃酮類化合物,已被報道對多種轉(zhuǎn)運(yùn)體有抑制作用,如有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽1B1(OATP1B1)和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(GLUT1)等,本文旨在進(jìn)一步探索芹菜素與OAT1底物之間發(fā)生的相互作用。目的:采用慢病毒感染的方式建立能穩(wěn)定表達(dá)人有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體1(human organic anion transporter1,hO AT1)的馬丁達(dá)比狗腎上皮(Madin-Darby canine kidney,MDCK)細(xì)胞模型,并利用此模型篩選有效的hOAT1抑制劑,繼而研究基于hOAT1的藥物-藥物相互作用,為臨床安全合理用藥提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:構(gòu)建含hOAT1基因的慢病毒質(zhì)粒,并用其感染細(xì)胞,經(jīng)過篩選獲得能穩(wěn)定表達(dá)hOAT1的細(xì)胞株。通過RT-qPCR及Western-blot檢測細(xì)胞株hOAT1mRNA與蛋白的表達(dá)情況,并評價兩株細(xì)胞對底物6-羧基熒光素(6-CFL)的攝取能力。利用細(xì)胞模型從體外篩選有效的hOAT1抑制劑,并利用UPLC-MS/MS從體內(nèi)外探究抑制劑對hOAT1攝取阿昔洛韋的影響。此外,通過MTT實(shí)驗(yàn)探究抑制劑是否能降低阿德福韋對MDCK-hOAT1的細(xì)胞毒性。結(jié)果:穩(wěn)轉(zhuǎn)株hOAT1 mRNA的表達(dá)量是對照株的7204.20倍,蛋白表達(dá)量明顯高于對照株。穩(wěn)轉(zhuǎn)株細(xì)胞攝取6-CFL的能力是對照株的18.12倍。初篩實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,芹菜素為hOAT1的有效抑制劑(IC50=0.737μM),且預(yù)孵育能增強(qiáng)芹菜素對hOAT1的抑制活性,使其IC50值由0.737μM降低至0.295μM。芹菜素(1μM)能使得MDCK-hOAT1轉(zhuǎn)運(yùn)阿昔洛韋的能力降低55%(p0.001)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明,芹菜素與阿昔洛韋合用能增加SD大鼠血漿中阿昔洛韋的濃度,能使大鼠體內(nèi)阿昔洛韋的AUC(o-t)從10230.36±212.38 mg/L*min增加至21109.58±2867.39mg/L*min(p0.0001),平均駐留時間(MRT)從65.38±10.73min增加至109.06±14.64min(p0.001),半衰期從98.63±29.00min延長至125.86±45.05min。MTT實(shí)驗(yàn)中,芹菜素與阿德福韋合用后,能以劑量依賴性的方式降低阿德福韋導(dǎo)致的細(xì)胞毒性,50pM芹菜素能夠使200μM阿德福韋作用下的細(xì)胞活力從50.6%增加至112.62%。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了能用于篩選hOAT1的有效抑制劑的穩(wěn)定表達(dá)hOAT1的細(xì)胞模型。該細(xì)胞模型能用于基于OAT1的藥物-藥物相互研究。篩選的中藥單體中,芹菜素對OAT1的抑制作用最強(qiáng),且能與抗病毒藥阿昔洛韋或阿德福韋發(fā)生相互作用,提示芹菜素能改變阿昔洛韋的藥代動力學(xué)特征,在臨床上需調(diào)整后者的劑量以避免毒副作用。此外,芹菜素可與由OAT1介導(dǎo)產(chǎn)生毒性的藥物合用,發(fā)揮降低毒性的作用,即作為一種腎臟保護(hù)劑,擴(kuò)展了芹菜素的應(yīng)用范圍。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R96

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1484567