本文關(guān)鍵詞： CB基因 HEK細胞 Ca Ski細胞 細胞凋亡　出處：《中國實驗動物學報》2015年02期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的構(gòu)建大鼠CB1(r CB1)基因真核表達載體,檢測r CB1基因在細胞中的表達,研究r CB1對人宮頸癌Ca Ski細胞凋亡的影響。方法從大鼠腦組織中提取總RNA,RT-PCR擴增r CB1基因,通過酶切、純化、連接PCR純化產(chǎn)物與p CDNA 3.1(+)質(zhì)粒,構(gòu)建pc DNA3.1(+)-r CB1。脂質(zhì)體法將其轉(zhuǎn)染到HEK293和Ca Ski細胞,Western blot及細胞免疫熒光聯(lián)合激光掃描共聚焦方法檢測r CB1的表達及定位,流式細胞儀檢測細胞凋亡率,Western blot與實時熒光定量PCR檢測r CB1、Bcl-2、Bax、Bad表達。結(jié)果酶切重組質(zhì)粒獲得5300 bp的載體片段和1500 bp的目的片段,測序結(jié)果和r CB1基因序列(NM_012784.4)一致。轉(zhuǎn)染HEK293細胞后,r CB1在HEK293細胞細胞膜和細胞質(zhì)表達。轉(zhuǎn)染Ca Ski細胞后,r CB1使細胞凋亡率增加(P0.05);r CB1基因上調(diào)Bax、Bad的表達,同時抑制Bcl-2的表達,與空白組比較,其差異具有顯著性(P0.05)。結(jié)論成功構(gòu)建了pc DNA3.1(+)-r CB1真核表達載體,r CB1表達于細胞膜和細胞質(zhì),r CB1可以明顯促進宮頸癌Ca Ski細胞凋亡,其機制是上調(diào)Bax、Bad和抑制Bcl-2表達。
[Abstract]:Objective to construct the eukaryotic expression vector of rat CB1(r CB1 gene and detect the expression of r CB1 gene in cells. To study the effect of r CB1 on apoptosis of human cervical cancer Ca Ski cells. Methods the r CB1 gene was amplified by RT-PCR from rat brain tissue and purified by enzyme digestion. The purified product of PCR was ligated with p CDNA 3.1 () plasmid. PcDNA3.1 was constructed and transfected into HEK293 and Ca Ski cells by liposome method. The expression and localization of r CB1 were detected by Western blot and immunofluorescence combined with laser scanning confocal method, and the apoptosis rate was detected by flow cytometry. Western blot and real-time fluorescence quantitative PCR were used to detect rCB1, Bcl-2 and Bax. Results 5300bp vector fragment and 1500bp target fragment were obtained by restriction endonuclease digestion. The results of sequencing were consistent with the sequence of r CB1 gene nmsp. 012784.4). After transfection of HEK293 cells. R CB1 was expressed in the cell membrane and cytoplasm of HEK293 cells. After transfection of Ca Ski cells, r CB1 increased the apoptosis rate of HEK293 cells. R CB1 gene upregulated the expression of Baxon Bad and inhibited the expression of Bcl-2, compared with the control group. Conclusion the eukaryotic expression vector of pc DNA3.1 (pc-r CB1) was successfully constructed and expressed in cell membrane and cytoplasm. R CB1 can obviously promote apoptosis of Ca Ski cells in cervical cancer by up-regulating Bad and inhibiting Bcl-2 expression.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學實驗動物中心;重慶三峽醫(yī)藥高等專科學校;重慶市嚙齒類實驗動物工程技術(shù)研究中心;
【基金】：重慶市教委自然科學基金項目(KJ111802) 重慶市衛(wèi)生局醫(yī)學科研項目(2012-1-096) 重慶市高等教育教學改革研究重點項目(132128、133309) 重慶萬州區(qū)科技計劃項目(201203055) 重慶市應用開發(fā)計劃項目(cstc2013yykf C10005)
【分類號】：R965
【正文快照】： 。3.重慶市嚙齒類實驗動物工程技術(shù)研究中心,重慶400016)ting the pc DNA3.1(+)-r CB1.The result of sequencing was in agreement with the sequence of r CB1 gene(NM_大麻素是從印度大麻(Cannabis sativa)里發(fā)現(xiàn)的一組萜酚類化合物,存在于動物神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)里[1,2]。

【參考文獻】

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1 王鵬飛;何奔;;內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)與心肌缺血再灌注損傷[J];中國動脈硬化雜志;2010年08期

2 李華;高國蘭;;HPV與宮頸癌的研究進展[J];實用癌癥雜志;2007年04期

3 梁東霞;張彥娜;;宮頸癌與hpv關(guān)系的研究進展[J];實用癌癥雜志;2010年02期

4 馮睿;范娟;劉一輝;錢召強;魏春玲;任維;;大鼠大麻素Ⅰ型受體綠色熒光融合蛋白真核表達載體的構(gòu)建與鑒定[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2014年26期

5 于海玲;張鳳;全哲山;;內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)與抑郁癥[J];生理科學進展;2012年04期

6 劉昱;曹來英;張蔚;殷金鳳;;槲皮素抗宮頸癌的機制研究[J];微循環(huán)學雜志;2010年03期

7 吳永濤;劉宏亮;陳興書;蔡其燕;姚忠祥;;大麻素受體在成年大鼠腦組織中的分布特點[J];中國康復醫(yī)學雜志;2009年03期

8 吳敏;任瑞寶;;大麻素類化合物抗腫瘤研究新進展[J];腫瘤;2013年05期

【共引文獻】

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1 盛磊;阿仙姑·哈斯木;劉開江;阿布力孜·阿布杜拉;;維吾爾族婦女宮頸病變病理進程與降鈣素相關(guān)肽α表達的關(guān)系[J];癌變·畸變·突變;2011年04期

2 阿比班·阿克拉;米克熱依·玉山江;瑪依努爾·尼牙孜;阿布力孜·阿布杜拉;阿比達·阿布都卡德爾;;維吾爾族婦女宮頸癌發(fā)生與EBV及HPV感染的關(guān)系[J];癌變·畸變·突變;2012年03期

3 張慶余;范曉娜;曹毅;;正常獼猴與樹，

本文編號：1452446