本文關(guān)鍵詞：Ecteinascidins簡易結(jié)構(gòu)類似物抗腫瘤作用研究　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：Ecteinascidins (ETs)是一類四氫異喹啉生物堿類海洋天然產(chǎn)物,能夠與DNA共價結(jié)合,具有顯著的抗腫瘤活性和獨特的腫瘤類型選擇性。其代表化合物ET-743,已在歐洲批準(zhǔn)上市,用于軟組織肉瘤和卵巢癌的治療。但其天然產(chǎn)量極低,合成路線繁瑣,因此,尋求簡易高效的合成類似物成為研究熱點。GJ7-1和GJ7-2是經(jīng)過結(jié)構(gòu)優(yōu)化合成的ETs簡易結(jié)構(gòu)類似物,具有一定的抗腫瘤活性,但與ETs相比,細(xì)胞毒性降低了約兩個數(shù)量級。本文對兩個化合物GJ7-1和GJ7-2進(jìn)行了藥理效應(yīng)特征及DNA靶點專一性的觀察,以期提供這類化合物抗腫瘤活性降低的可能藥理學(xué)基礎(chǔ)。 GJ7-1和GJ7-2對體外培養(yǎng)的15種腫瘤細(xì)胞都顯示一定的生長抑制作用,GJ7-1IC50約為01μmol/L-0.3μmol/L, GJ7-2IC50約為0.05μmol/L-0.16μmol/L, GJ7-2活性稍高于GJ7-1,二者都沒有明顯的腫瘤類型選擇性。 在小鼠體內(nèi)移植肉瘤模型中,GJ7-2(20mg/kg和40mg/kg)每隔一天腹腔給藥,10d后與溶劑對照組相比,對EHS肉瘤生長無明顯的抑制作用,瘤重和小鼠體重也無明顯變化。 瓊脂糖凝膠電泳及DNA結(jié)合熒光競爭實驗檢測化合物與DNA的結(jié)合。結(jié)果顯示GJ7-1和GJ7-2濃度增加到1mmol/L對DNA遷移阻滯仍無明顯影響；100μmol/L兩個化合物對嵌入結(jié)合DNA的熒光探針以及具有小溝結(jié)合作用的探針與DNA結(jié)合后的熒光強度都無明顯的影響。提示,GJ7-1和GJ7-2與DNA無明顯結(jié)合。1μmol/L兩個化合物作用24h和48h對A549細(xì)胞周期有一定影響,但不以對G2/M期阻滯為主；低中高劑量(0.01μmol/L、0.1μmol/L和1μmol/L)化合物作用24h、48h和72h都不能誘導(dǎo)該細(xì)胞明顯的凋亡。 GJ7-1和GJ7-2對A549細(xì)胞熱誘導(dǎo)的HSP70的表達(dá)具有抑制作用并具有劑量依賴性,這雖然與ET-743作用類似,但ET-743對HSP70誘導(dǎo)表達(dá)的抑制作用是通過結(jié)合DNA后影響基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控過程引起的,顯然誘導(dǎo)抑制機制并不同。 極高濃度(5μmol/L)兩個化合物作用8h才對A549細(xì)胞微管形態(tài)和分布產(chǎn)生影響,IC50劑量下無明顯影響。細(xì)胞毒作用的發(fā)揮應(yīng)與對微管的影響關(guān)系不大。 綜上,GJ7-1和GJ7-2與ETs相比,體內(nèi)外活性明顯降低,且無明顯的腫瘤類型選擇性。由于DNA靶點特異性作用地喪失,其特征性的細(xì)胞周期阻滯和凋亡誘導(dǎo)作用也基本喪失。這可能是由于化合物結(jié)構(gòu)上關(guān)鍵基團(tuán)的改變造成。
[Abstract]:Ecteinascidins is a kind of marine natural products of tetrahydroisoquinoline alkaloids, which can bind to DNA covalently. ET-743, a representative compound, has been approved for European use in the treatment of soft tissue sarcoma and ovarian cancer, but its natural production is extremely low. Therefore, the search for simple and efficient synthetic analogs has become a research hotspot. GJ7-1 and GJ7-2 are simple structural analogues of ETs synthesized by structural optimization. It has some antitumor activity, but compared with ETs. The cytotoxicity was reduced by about two orders of magnitude. The pharmacological effects of GJ7-1 and GJ7-2 and the specificity of DNA targets were observed. To provide a possible pharmacological basis for the decrease of anti-tumor activity of these compounds. Both GJ7-1 and GJ7-2 showed certain growth inhibitory effects on 15 kinds of tumor cells cultured in vitro. The IC50 of GJ7-1IC50 was about 01 渭 mol/L-0.3 渭 mol/L. GJ7-2IC50 was about 0. 05 渭 mol/L-0.16 渭 mol / L, GJ7-2 activity was slightly higher than that of GJ7-1, neither of them had obvious tumor type selectivity. In mice transplanted sarcoma model, 20 mg / kg and 40 mg / kg GJ7-2G / kg were given intraperitoneally every other day and compared with the solvent control group after 10 days of intraperitoneal administration. There was no obvious inhibition on the growth of EHS sarcoma and no significant changes in tumor weight and body weight of mice. Agarose gel electrophoresis and DNA combined with fluorescence competition assay were used to detect the binding of the compounds to DNA. The results showed that the concentration of GJ7-1 and GJ7-2 increased to 1 mmol / L and still had no effect on DNA migration. Obvious influence; There was no obvious effect of 100 渭 mol/L on the fluorescence intensity of the fluorescent probe embedded with DNA or the probe with small groove binding with DNA, indicating that the two compounds had no significant effect on the fluorescence intensity after binding to DNA. GJ7-1, GJ7-2 and DNA did not bind to 1 渭 mol/L for 24 h and 48 h to affect the cell cycle of A549 cells. But there was no G _ 2 / M phase block. 0. 1 渭 mol / L 0. 1 渭 mol/L and 1 渭 mol / L) compound at low, medium and high doses could not induce the apoptosis of the cells at 24 h for 48 h or 72 h. GJ7-1 and GJ7-2 inhibited the expression of HSP70 induced by heat in A549 cells in a dose-dependent manner, which was similar to that of ET-743. However, the inhibitory effect of ET-743 on the expression of HSP70 was induced by binding to the process of gene transcription regulation after DNA, and obviously the mechanism of the inhibition was not the same. The microtubule morphology and distribution of A549 cells were affected by two compounds at very high concentration (5 渭 mol / L) for 8 h. The effect of cytotoxicity on microtubules was not related to the effect of IC50 on microtubules. Compared with ETs, the activity of GJ7-1 and GJ7-2 decreased significantly in vivo and in vitro, and the tumor type selectivity was not obvious. The specific target of DNA was lost due to the specific effect of GJ7-1 and DNA. The characteristic cell cycle arrest and apoptosis-inducing effect were also basically lost, which may be due to the change of the key groups in the structure of the compound.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R96

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本文編號：1439751