本文關(guān)鍵詞：重組眼鏡王蛇屬胰蛋白酶和糜蛋白酶雙重抑制劑對大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護作用　出處：《中國藥學(xué)雜志》2017年20期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的探究重組眼鏡王蛇屬胰蛋白酶和糜蛋白酶雙重抑制劑(OH-TCI)在大腸桿菌中的表達與純化及其對大鼠心肌缺血再灌注損傷(MIRI)的保護作用。方法將Pet32a-OH-TCI重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中,通過異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo),經(jīng)煙草蝕紋病毒(tobacco etch virus,TEV)酶切和鎳親和層析后獲得具有天然活性的OH-TCI。健康SD大鼠,隨機分為對照組和OH-TCI藥物組。藥物組于術(shù)前5 min腹腔注射OH-TCI,對照組給予等體積生理鹽水處理。結(jié)扎大鼠的左冠狀動脈前降支30 min后,復(fù)灌120 min構(gòu)建大鼠MIRI模型。檢測大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(creatine kinase,CK)活性和丙二醛(MDA)、腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細胞介素(IL)-6的含量等指標,評估具有天然活性的重組蛋白酶抑制肽OH-TCI對大鼠MIRI的保護作用。結(jié)果重組蛋白酶抑制肽OH-TCI在pET32a/Rosetta-gami(DE3)表達系統(tǒng)中以融合蛋白形式得到可溶性表達,通過TEV酶切、兩次親和層析純化后,得到具有天然活性的重組OH-TCI。與對照組相比,OH-TCI可使心肌MIRI大鼠血清中LDH活性、MDA含量和IL-6的釋放量顯著下降(P0.01);炎性因子TNF-α釋放量明顯降低(P0.05)。結(jié)論具有天然活性的重組蛋白酶抑制肽OH-TCI能夠在大腸桿菌成功表達,并對心肌缺血再灌注樣損傷具有一定的保護作用。
[Abstract]:Objective To investigate the expression and purification of recombinant protease inhibitor peptide ( OH ) in Escherichia coli and its protective effect on myocardial ischemia - reperfusion injury in rats . The recombinant protease inhibitor was induced by IPTG . The activity of SOD , LDH , creatine kinase and MDA , TNF - 偽 and IL - 6 in the serum of rats were determined .

【作者單位】： 濰坊醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院;濰坊醫(yī)學(xué)院生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;
【基金】：山東省自然科學(xué)基金資助項目(ZR2015HL056) 山東省高等學(xué)校科技計劃項目(J15LM10) 山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計劃項目(2015WS0058,2015WS0059)
【分類號】：R965
【正文快照】： 重組眼鏡王蛇屬胰蛋白酶和糜蛋白酶雙重抑制劑(OH-TCI)來源于眼鏡王蛇蛇毒,與抑肽酶(aprotinin)同屬于Kunitz-型蛋白酶抑制劑[1],具有58個氨基酸殘基,相對分子質(zhì)量為6 339。Kunitz-型蛋白酶抑制劑家族成員大部分對胰蛋白酶和糜蛋白酶的抑制活性有很大的差異,而OH-TCI是目前自

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本文編號：1430280