本文關(guān)鍵詞：KIM-1、NGAL在氨基糖苷類藥物致腎毒性模型中的表達(dá)　出處：《四川農(nóng)業(yè)大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：氨基糖苷類抗生素的腎毒性是影響其臨床用藥的一個(gè)重要因素,傳統(tǒng)臨床監(jiān)測(cè)指標(biāo)缺乏敏感性和特異性,因此迫切需要找到新的腎損傷早期生物標(biāo)志物建立該類藥物安全性評(píng)價(jià)體系,為新藥研發(fā)過程中早期毒性預(yù)測(cè)提供技術(shù)指導(dǎo)。本文分別建立氨基糖苷類藥物誘導(dǎo)的體內(nèi)、體外腎毒性模型,通過研究腎損傷早期生物標(biāo)志物腎損傷分子-1(KIM-1)和中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(NGAL)的表達(dá),探討此模型在氨基糖苷類抗生素早期腎毒性評(píng)價(jià)篩選中的應(yīng)用價(jià)值,為新藥研發(fā)和該類藥物。腎毒性評(píng)估提供依據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)研究分為兩部分。第一部分研究KIM-1與NGAL在慶大霉素誘導(dǎo)的大鼠腎臟中的表達(dá)。將45只SPF級(jí)雄性SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、慶大霉素低劑量組(50mg/kg)和慶大霉素高劑量組(100mg/kg),每組15只,連續(xù)給藥7天,對(duì)照組給予等體積0.9%氯化鈉注射液。給藥第1、3、7天分別處死各組5只大鼠,腹主動(dòng)脈采血檢測(cè)血清肌酐(SCr)和血尿素氮(BUN)水平,腎組織切片HE染色觀察病理改變,熒光定量PCR法檢測(cè)基因mRNA表達(dá)水平,免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)蛋白表達(dá)部位及表達(dá)水平。第二部分研究KIM-1與NGAL在慶大霉素和奈替米星誘導(dǎo)的體外腎細(xì)胞系中的表達(dá)。將慶大霉素、奈替米星作用于人腎小管上皮細(xì)胞系(HK-2),分別于2h、6h、12h、24h、36h和48h提取細(xì)胞mRNA,通過熒光定量PCR法檢測(cè)KIM-1與NGAL的基因表達(dá)水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn),連續(xù)7天對(duì)SD大鼠注射慶大霉素后,與對(duì)照組相比,低劑量組和高劑量組大鼠的SCr水平僅在給藥第7天明顯升高,血尿素氮含量在低劑量組給藥第7天升高,高劑量組均高于對(duì)照組,且在給藥第7天達(dá)到最高值；病理組織學(xué)觀察顯示,低劑量組在給藥第7天可見腎小管上皮細(xì)胞空泡變性、顆粒變性,高劑量組在給藥第3天開始出現(xiàn)小管上皮細(xì)胞變性,給藥7天后近端小管刷狀緣消失,上皮細(xì)胞變性、壞死、脫落,間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤(rùn),髓質(zhì)部可見蛋白管型；實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示,KIM-1和NGAL的mRNA表達(dá)水平均在給藥第1天就顯著上調(diào),之后呈時(shí)間-劑量依賴性升高,與病理組織學(xué)改變過程相一致,且優(yōu)先于臨床生化檢測(cè)指標(biāo)；免疫組化檢測(cè)結(jié)果證明,KIM-1與NGAL蛋白均表達(dá)于腎近端小管上皮細(xì)胞中,KIM-1更集中在近端小管S3段豐富的外髓質(zhì)區(qū)域及皮質(zhì)區(qū)域,兩者蛋白表達(dá)水平與基因表達(dá)水平基本相一致。而在體外細(xì)胞模型中,KIM-1與NGAL在慶大霉素、奈替米星損傷HK-2細(xì)胞后,均持續(xù)低表達(dá),且表達(dá)量不隨時(shí)間依賴性增加。KIM-1與NGAL這兩個(gè)新穎的生物標(biāo)志物在氨基糖苷類藥物致腎毒性大鼠模型中的表達(dá)與病理改變程度相一致,且優(yōu)先于傳統(tǒng)的臨床監(jiān)測(cè)指標(biāo),均可作為體內(nèi)檢測(cè)氨基糖苷類藥物腎損傷的有效端點(diǎn),但它們?cè)诩?xì)胞模型中表現(xiàn)并不支持其作為體外毒性篩選的可靠指標(biāo),其表達(dá)機(jī)制還有待進(jìn)一步的研究。
[Abstract]:In this paper , we studied the expression level of serum creatinine ( SCr ) and serum urea nitrogen ( NGAL ) in rats with acute renal injury .

【學(xué)位授予單位】：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R96

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本文編號(hào)：1425217