本文關(guān)鍵詞：多巴胺對大鼠胰島素分泌的影響及可能作用機制　出處：《山西醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:多巴胺在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用,在外周也影響著機體的某些功能。本實驗通過離體胰島素分泌實驗,膜片鉗和鈣成像技術(shù)探討多巴胺對大鼠胰島素分泌的影響以及相關(guān)的作用機制。方法:(1)雄性wistar大鼠斷頭處死后,將1g·L-1膠原酶P溶液緩慢的注入到膽總管中,分離的胰腺經(jīng)37℃水浴消化、Histopaque 1077梯度離心得到單個胰島。使用5g·L-1的Dispase II消化胰島,將得到的胰島細(xì)胞放入孵箱內(nèi)備用。(2)分得的胰島經(jīng)過夜修復(fù)后,采用放射免疫分析法測得不同藥物干預(yù)后胰島素含量的變化。(3)應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄經(jīng)過多巴胺、D2-like受體激動劑Quinpirole以及阻斷劑Eticlopride分別干預(yù)后,對胰島β細(xì)胞電壓依賴性鉀通道(Kv)、電壓依賴性鈣通道和動作電位(AP)的影響。(4)應(yīng)用鈣成像技術(shù)檢測灌注多巴胺和Quinpirole后對胰島細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響。結(jié)果:(1)采用膠原酶P消化、1077梯度離心所得到的胰島,形態(tài)規(guī)整,多成圓形或橢圓形,表面光滑,質(zhì)地飽滿,直徑約在100~300μm之間,偶有少量胰島與腺泡相連。Dispase II消化所得到的胰島細(xì)胞,多成球體,表面圓滑,單個或多個細(xì)胞聚集分布。(2)胰島素分泌試驗中,多巴胺呈濃度依賴性抑制了胰島素的釋放,并隨外界環(huán)境中糖濃度的升高抑制作用表現(xiàn)得更為顯著。在16.7m M葡萄糖的基礎(chǔ)上,10μM D1-like受體激動劑SKF38393對分泌的影響沒有統(tǒng)計學(xué)差異;而在同樣濃度葡萄糖的環(huán)境中,10μM D2-like受體激動劑Quinpirole明顯地抑制了胰島素的釋放(對照組,150.02±19.49μmol·L-1,n=6;Quinpirole組,91.70±6.66μmol·L-1,n=6,p0.01)。10μM D2-like受體的阻斷劑Eticlopride對胰島素的分泌沒有影響(對照組,136.81±5.60μmol·L-1,n=6;Eticlopride組,123.32±11.59μmol·L-1,n=6,p0.05),但可以在很大程度上消除多巴胺對胰島素分泌的影響(多巴胺組,47.24±6.35μmol·L-1,n=6;多巴胺+Eticlopride組,117.16±7.58μmol·L-1,n=6,p0.001)。(3)膜片鉗實驗中,10μM多巴胺對胰島β細(xì)胞上Kv電流有明顯地促進作用,將電壓鉗制在80m V時,記錄到多巴胺組(109.92±6.68 p A/p F,n=6)的電流密度,與對照組(69.79±2.96p A/p F,n=6)相比p0.001;10μM D2-like受體的激動劑Quinpirole對β細(xì)胞上Kv電流也有促進作用,電壓鉗制在80m V時,記錄到Quinpirole組(123.85±8.27 p A/p F,n=6)的電流密度,與對照組(84.45±5.39 p A/p F,n=6)相比p0.01。10μM D2-like受體阻斷劑Eticlopride本身對Kv沒有影響,但可以消除多巴胺對Kv電流的作用(對照組,84.87±3.50 p A/p F,n=6;Eticlopride組,76.24±3.76 p A/p F,n=6;Eticlopride+多巴胺組,81.58±3.85 p A/p F,n=6)。10μM多巴胺抑制了電壓依賴性鈣通道(對照組,-3.68±0.35p A/p F,n=6;多巴胺組,-2.74±0.48 p A/p F,n=6,p0.05),而10μM D2-like受體的激動劑Quinpirole對鈣通道沒有影響。10μM多巴胺明顯縮短了動作電位的時程(對照組,59.58±4.69 ms,n=6;多巴胺組,32.97±3.17ms,n=6,p0.001),而10μM D2-like受體阻斷劑Eticlopride可以消除多巴胺對動作電位時程的影響。(4)鈣成像實驗中,以2.8m M葡萄糖為基線,16.7m M葡萄糖使細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高,而10μM多巴胺和10μM D2-like受體的激動劑Quinpirole在16.7m M葡萄糖的基礎(chǔ)上均使得細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度明顯下降。結(jié)論:(1)使用膠原酶P和Dispase II消化所得到的胰島和胰島細(xì)胞功能狀態(tài)良好。(2)多巴胺和D2-like受體激動劑Quinpirole抑制大鼠胰島素的釋放,并且多巴胺的作用可以被D2-like受體的阻斷劑Eticlopride很大程度上所消除。(3)多巴胺和Quinpirole都明顯地促進了Kv通道,而且多巴胺的作用可以被Eticlopride所消除。(4)多巴胺抑制了電壓依賴性鈣通道,減少細(xì)胞外鈣離子的內(nèi)流,而Quinpirole對鈣通道并沒有產(chǎn)生影響。(5)多巴胺縮短了動作電位的時程,Eticlopride可以消除這一作用。(6)多巴胺和Quinpirole均使得細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度減少。綜上所述,多巴胺抑制大鼠胰島素的釋放,而這一抑制作用主要由D2-like受體所介導(dǎo)。多巴胺激活D2-like受體后,促進了電壓依賴性鉀通道,細(xì)胞復(fù)極增快,動作電位時程縮短,減少細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流的時長,最終使細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度下降抑制胰島素的釋放。其次多巴胺也可以抑制電壓依賴性鈣離子通道,進一步發(fā)揮抑制作用。
[Abstract]:Objective : To study the effects of dopamine on insulin secretion in pancreatic islets and to investigate the effect of dopamine on insulin secretion in pancreatic islets . In the same concentration of glucose , 10 渭M D2 - like receptor agonist , Quinpirole , inhibited insulin secretion ( control group , 150.02 鹵 19.49 渭mol 路 L - 1 , n = 6 ; Quinpirole group , 91.70 鹵 6.66 渭mol 路 L - 1 , n = 6 , p0.01 ) , but the effect of dopamine on insulin secretion was significantly inhibited ( control group , 47.24 鹵 6.35 渭mol 路 L -1 , n = 6 ; dopamine + Eticlobule group , 117.16 鹵 7.58 渭mol 路 L -1 , n = 6 , p0.001 ) . ( 3 ) In the experiment of patch clamp , the current density of 10 渭M dopamine agonist on 尾 - cells was significantly enhanced compared with that of control group ( 109.92 鹵 6.68 p A / p F , n = 6 ) , but the current density of the dopamine - dependent calcium channel ( 123.85 鹵 8.27 p A / p F , n = 6 ) was recorded in the control group ( 84.87 鹵 3.50 p A / p F , n = 6 ; Eticlobule + dopamine group , 80.58 鹵 3.85 p A / p F , n = 6 ) . 10 渭M dopamine inhibited the voltage dependent calcium channel ( control group , - 3.68 鹵 0.35 p A / p F , n = 6 ; dopamine group , The results showed that : ( 1 ) The effect of dopamine and D2 - like receptor agonist , Quinpirole , inhibited the release of intracellular calcium ions . In conclusion , dopamine inhibits the release of insulin in the cells . In conclusion , dopamine inhibits the release of insulin in the rat , and the inhibition is mainly mediated by the D2 - like receptor . When the dopamine activates the D2 - like receptor , the time course of the intracellular calcium ion is shortened , the intracellular calcium ion concentration is decreased , and the release of insulin is reduced .

【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R96

【參考文獻】

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本文編號：1423238