本文關(guān)鍵詞：3,4-二羥基苯甲酸甲酯抗SH-SY5Y細(xì)胞氧化損傷作用及其機(jī)制　出處：《暨南大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：實(shí)驗(yàn)?zāi)康?研究3,4-二羥基苯甲酸甲酯(methyl 3,4-dihydroxybenzoate,MDHB)抗過(guò)氧化氫叔丁醇(t-butylhydroperoxide,TBHP)所致SH-SY5Y細(xì)胞氧化損傷的作用,并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。實(shí)驗(yàn)方法:培養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞,用不同濃度的TBHP作用24h,確定建立細(xì)胞氧化損傷模型所需的TBHP濃度。分別用不同濃度的MDHB及陽(yáng)性對(duì)照藥N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)預(yù)處理細(xì)胞4 h,繼續(xù)使用TBHP處理24 h。MTT法、LDH法檢測(cè)細(xì)胞活性,初步確定對(duì)該模型有效的藥物濃度(2μM、4μM、8μM)。后續(xù)實(shí)驗(yàn)分組為:空白對(duì)照組、溶劑+TBHP組、2μM MDHB+TBHP處理組、4μM MDHB+TBHP處理組、8μM MDHB+TBHP處理組、100μM NAC+TBHP處理組。顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化,采用Annexin V/PI雙染后用流式細(xì)胞儀計(jì)算凋亡細(xì)胞比率,利用熒光探針2',7'-二氯熒光素雙醋酸酯(2',7'-dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,用試劑盒檢測(cè)谷胱甘肽過(guò)氧化氫酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,酶聯(lián)免疫法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)檢測(cè)DNA氧化損傷標(biāo)志物8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷(8-hydroxy-2 deoxyguanosine,8-OHdG)含量,采用Western blot法檢測(cè)MDHB對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞Bcl-2、Bax、caspase 3、Nrf2、p-Akt和Akt蛋白表達(dá)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:2μM、4μM、8μM的MDHB預(yù)處理均能夠顯著提高氧化損傷狀態(tài)下SH-SY5Y細(xì)胞的存活率(P0.01)。同時(shí)MDHB能夠降低細(xì)胞凋亡率(P0.01)、清除自由基(P0.01)、提高細(xì)胞GSH-Px活性(P0.01)、SOD活性(P0.05)和降低細(xì)胞培養(yǎng)上清中8-OHdG含量(P0.01)。Western blot結(jié)果表明,MDHB可能是通過(guò)提高抗凋亡蛋白Bcl-2與促凋亡蛋白Bax的比例(P0.01),抑制caspase 3蛋白的激活(P0.01),提高抗氧化蛋白Nrf2的表達(dá)(P0.01),并上調(diào)Akt蛋白磷酸化水平(P0.05)來(lái)發(fā)揮抗氧化損傷和抗凋亡作用的。結(jié)論:MDHB能夠拮抗TBHP引起的SH-SY5Y細(xì)胞氧化損傷,其機(jī)制可能與減少ROS產(chǎn)生、減少DNA氧化損傷、激活PI3K/Akt-Nrf2信號(hào)通路,提高Bcl2/Bax比例,抑制cleaved caspsae-3凋亡通路有關(guān)。
[Abstract]:Objective : To study the effect of methyl 3,4 - dihydroxybenzoate ( MDHB ) on oxidative damage of SH - SYY cells induced by tert - butyl hydroperoxide ( TBHP ) . Methods : To study the effect of TBHP on the oxidative damage of SH - SYY cells induced by tert - butyl hydroperoxide ( TBHP ) . The effects of MDHB on the expression of Bcl - 2 , Bax , caspase 3 , Nrf2 , p - activity in the cells were measured by Western blot . The results showed that MDHB could decrease the apoptosis rate ( P0.01 ) , eliminate free radicals ( P0.01 ) , improve the activity of GSH - Px ( P0.01 ) , and inhibit the activation of caspase 3 protein ( P0.01 ) . Conclusion : MDHB can inhibit the oxidative damage induced by TBHP . The mechanism may be related to reducing the production of ROS , reducing DNA oxidative damage , activating the signal pathway of PI3 - 3 - Nrf2 , increasing the ratio of Bcl - 2 / Bax , and inhibiting the apoptosis pathway of caspase - 3 .

【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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2 ;Methyl 3,4-dihydroxybenzoate promotes neurite outgrowth of cortical neurons cultured in vitro[J];Neural Regeneration Research;2012年13期

3 許文清;龔小見(jiàn);周欣;趙超;陳華國(guó);;馬蘭化學(xué)成分及生物活性研究[J];中國(guó)中藥雜志;2010年23期

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本文編號(hào)：1416896