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羰基氰氯苯腙調(diào)節(jié)非經(jīng)典自噬的機(jī)制研究

發(fā)布時(shí)間:2017-12-30 04:02

  本文關(guān)鍵詞:羰基氰氯苯腙調(diào)節(jié)非經(jīng)典自噬的機(jī)制研究 出處:《中國(guó)生化藥物雜志》2016年04期  論文類(lèi)型:期刊論文


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【摘要】:目的探討可以調(diào)控羰基氰氯苯腙(carbonyl cyanide m-chlorophenylhydrazone,CCCP)誘導(dǎo)的不依賴(lài)自噬關(guān)鍵基因的非經(jīng)典自噬的影響因素。方法分別將野生型細(xì)胞和自噬關(guān)鍵基因敲除/敲低的細(xì)胞(Atg5-KO MEF,FIP-200 KO MEF,ULK1-KO MEF,Beclin 1-KO U251)用CCCP處理,觀察GFP-LC3的分布聚集情況和LC3蛋白水平的表達(dá)。熒光定量PCR檢測(cè)CCCP處理后LC3B mRNA水平變化。Western blot檢測(cè)FIP200-KO MEF中CCCP處理時(shí),水通道蛋白抑制劑對(duì)LC3蛋白水平的影響。結(jié)果在Atg5-KO MEF細(xì)胞中,和對(duì)照組相比,CCCP處理組免疫熒光實(shí)驗(yàn)不能產(chǎn)生GFP-LC3自噬斑點(diǎn),Western blot結(jié)果顯示LC3-I型不能轉(zhuǎn)變?yōu)長(zhǎng)C3-II。而在ULK1-KO MEF,FIP200-KO MEF,及Beclin1-KD U251細(xì)胞中,CCCP處理組免疫熒光實(shí)驗(yàn)?zāi)墚a(chǎn)生GFP-LC3自噬斑點(diǎn),同時(shí)LC3-I型也能轉(zhuǎn)變?yōu)長(zhǎng)C3-II型。但CCCP處理不影響LC3B的mRNA水平。CCCP誘導(dǎo)的非經(jīng)典自噬能被水通道蛋白抑制劑所抑制。結(jié)論 CCCP誘導(dǎo)的非經(jīng)典自噬需要自噬關(guān)鍵基因Atg5參與,但不需要Beclin 1,ULK1,FIP200的參與,不影響LC3B的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。滲透壓不平衡可以調(diào)節(jié)CCCP誘導(dǎo)的自噬。
[Abstract]:......
【作者單位】: 中山大學(xué)藥學(xué)院/新藥成藥性評(píng)估與評(píng)價(jià)國(guó)家與地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室;
【基金】:廣東省自然科學(xué)基金(S2013010015876) 博士點(diǎn)基金(20130171120049)
【分類(lèi)號(hào)】:R96
【正文快照】: 自噬(巨自噬)是對(duì)細(xì)胞內(nèi)衰老細(xì)胞器、長(zhǎng)壽命蛋白以及外源病原微生物進(jìn)行吞噬然后與溶酶體融合并降解內(nèi)含物的過(guò)程,其在進(jìn)化過(guò)程中具有高度保守性[1]。已有大量研究報(bào)道自噬與腫瘤、神經(jīng)退行性疾病、感染免疫等多種疾病密切相關(guān)[1-3]。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)自噬體的形成可以不經(jīng)過(guò)某些經(jīng)

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本文編號(hào):1353216

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