本文關(guān)鍵詞：重組抗HER2人源化單克隆抗體的瞬時(shí)表達(dá)及其抗腫瘤活性　出處：《中國醫(yī)藥工業(yè)雜志》2016年07期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：利用HEK293F細(xì)胞瞬時(shí)表達(dá)重組抗HER2人源化單克隆抗體(rh HER2-m Ab),優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件,并初步鑒定純化后的抗體抗腫瘤活性。分別構(gòu)建rh HER2-m Ab重、輕鏈表達(dá)載體(p CMV-HC和p CMV-LC),采用聚乙烯亞胺(PEI)為轉(zhuǎn)染試劑,共轉(zhuǎn)染重、輕鏈質(zhì)粒到HEK293F細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)。采用Protein A親和色譜純化抗體,以WST-8法檢測其體外抗腫瘤效果。經(jīng)優(yōu)化后,HEK293F細(xì)胞瞬時(shí)表達(dá)rh HER2-m Ab的最佳條件為:細(xì)胞接種密度4×106 cells/ml,DNA濃度2.0?g/106 cells,DNA∶PEI為1∶2,重鏈∶輕鏈為1∶1,抗體表達(dá)量可達(dá)73.0 mg/L,抗體純度大于98%。rh HER2-m Ab對(duì)高表達(dá)HER2的乳腺癌BT-474細(xì)胞抑制率為(72.3±2.0)%,對(duì)中表達(dá)HER2的乳腺癌SK-BR-3細(xì)胞抑制率約(32.1±1.2)%,但對(duì)低表達(dá)HER2的乳腺癌MCF-7細(xì)胞無顯著抑制作用。細(xì)胞凋亡試驗(yàn)結(jié)果表明,相對(duì)于對(duì)照組,rh HER2-m Ab對(duì)BT-474細(xì)胞的凋亡率約25%,對(duì)SK-BR-3細(xì)胞則近15%。
[Abstract]:Transient expression of recombinant human anti HEK293F HER2 monoclonal antibody (RH HER2-m Ab) was used to optimize transfection conditions, and initially identify the anti-tumor activity of the purified antibody. RH HER2-m Ab heavy and light chain expression vectors (P CMV-HC and P CMV-LC) were constructed respectively. Polyethylenimine (PEI) was used as a transfection reagent to co transfect heavy and light chain plasmids into HEK293F cells. The antibody was purified by Protein A affinity chromatography, and the antitumor effect in vitro was detected by WST-8 method. After optimization, the optimal conditions for transient expression of RH HER2-m Ab in HEK293F cells were: cell inoculation density 4 * 106 cells/ml, DNA concentration 2 g/106 cells, DNA PEI PEI 1: 2, heavy chain light chain 1: 1, antibody expression up to 73 mg/L, antibody purity greater than 98%. The inhibition rate of RH HER2-m Ab on breast cancer BT-474 cells with high expression of HER2 was (72.3 + 2)%, and the inhibition rate on SK-BR-3 cells expressing HER2 was about (32.1 + 1.2)%, but it had no significant inhibition on MCF-7 cells expressing low HER2. The apoptosis test showed that, compared with the control group, the apoptosis rate of RH HER2-m Ab to BT-474 cells was about 25%, and that of SK-BR-3 cells was nearly 15%.
【作者單位】： 暨南大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院廣東省生物工程藥物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室基因工程藥物國家工程研究中心;
【基金】：國家“十二五”“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)(2012ZX09202-301-001) 廣東省戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)核心技術(shù)攻關(guān)項(xiàng)目(2012A080800008) 廣東省重大科技專項(xiàng)(2012A080202014)
【分類號(hào)】：R96
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