本文關(guān)鍵詞：一種改良的5-羥色胺轉(zhuǎn)運體活性化合物高內(nèi)涵篩選方法　出處：《天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報》2016年03期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：[目的]建立一種改良的5-羥色胺轉(zhuǎn)運體(SERT)活性化合物高內(nèi)涵篩選(HCS)方法,包括構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染h SERT細胞株和優(yōu)化SERT活性化合物HCS條件。[方法]應(yīng)用聚乙烯亞胺(PEI)將質(zhì)粒h SERT-pc DNA3轉(zhuǎn)染入HEK293細胞,采用遺傳霉素(G418)篩選獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系,以實時熒光定量聚合酶鏈式反應(yīng)(Real-time PCR)和蛋白免疫印跡(Western blotting)方法分別從轉(zhuǎn)錄和翻譯水平驗證h SERT表達,采用SERT熒光底物4-(4-二甲氨基)苯基-1-甲基吡啶(APP+)在高內(nèi)涵系統(tǒng)上驗證SERT攝取功能并優(yōu)化其檢測條件,應(yīng)用選擇性SERT抑制劑Fluoxetine和SERT增強劑Tianeptine驗證SERT HCS方法可靠性。[結(jié)果]經(jīng)PEI轉(zhuǎn)染和G418篩選獲得了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染h SERT-HEK293細胞株。與HEK293細胞相比,h SERT-HEK293細胞中h SERT m RNA和蛋白表達量均顯著性增加,APP+攝取實驗表明h SERT-HEK293細胞攝取APP+顯著性增加,并可被Fluoxetine特異性抑制。實驗優(yōu)化了高內(nèi)涵檢測APP+攝取實驗中APP+濃度、孵育時間、數(shù)據(jù)分析方法等條件。Fluoxetine顯著地抑制h SERT-HEK293對APP+的攝取,Tianeptine顯著地增強h SERT-HEK293對APP+的攝取,證實此HCS方法的可靠性。[結(jié)論]本研究首次優(yōu)化了應(yīng)用APP+檢測SERT活性的HCS條件,顯著提高了SERT熒光檢測方法靈敏度,并首次證實此HCS方法適用于SERT促進劑篩選,因此,建立了一種改良的SERT活性化合物HCS方法。
【作者單位】： 天津中醫(yī)藥大學(xué)天津市現(xiàn)代中藥重點實驗室;天津國際生物醫(yī)藥聯(lián)合研究院中藥新藥研發(fā)中心;
【基金】：國家“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(2012ZX09304007) 國家自然科學(xué)基金青年基金(81403132) 天津市高等學(xué)�？萍及l(fā)展基金計劃項目(20140203) 天津市應(yīng)用基礎(chǔ)及前沿技術(shù)研究計劃項目(12JCYBJC32400)
【分類號】：R94
【正文快照】： 中藥新藥研發(fā)中心,天津300457)5-羥色胺(5-HT)是一種高度保守的信號傳導(dǎo)分子,化學(xué)性質(zhì)屬于吲哚胺,主要存在于大腦和消化道中,在運動、睡眠、攝食、生殖、認知以及情感等生理功能調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用[1]。在生理條件下,5-HT發(fā)揮作用后需要及時清除或滅活,以免產(chǎn)生中毒反應(yīng)及5-HT

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1 李雅婷;鄭宜;潘德林;徐波;武蕓;楊振軍;張禮和;;高內(nèi)涵篩選用于評價新型siRNA運載試劑的細胞群體生物學(xué)活性(英文)[J];Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences;2013年06期

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本文編號：1310189