本文關(guān)鍵詞：脂肪乳對(duì)離體血管及內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響

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【摘要】：目的:脂肪乳作為一種常見(jiàn)的腸外營(yíng)養(yǎng)制劑,越來(lái)越多非營(yíng)養(yǎng)方面的作用被人們所發(fā)現(xiàn),如作為部分局麻藥中毒的搶救用藥。有研究報(bào)道靜脈輸注脂肪乳可以升高健康人的血壓,但其機(jī)制尚不清楚,我研究所前期研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)脂肪乳能夠逆轉(zhuǎn)內(nèi)皮性舒張藥物乙酰膽堿誘導(dǎo)的血管舒張反應(yīng)。為進(jìn)一步研究脂肪乳的逆轉(zhuǎn)血管舒張的作用機(jī)制,我們?cè)陔x體血管組織和細(xì)胞水平研究了脂肪乳對(duì)其功能的影響。方法:1制備大鼠離體胸主動(dòng)脈血管環(huán),采用血管張力測(cè)定系統(tǒng),觀察記錄(1)脂肪乳(Lipid emulsion,LE)對(duì)苯丙腎上腺素(phenylephrine,Phe)誘發(fā)的血管收縮反應(yīng)的影響,(2)脂肪乳對(duì)乙酰膽堿(acetylcholine,Ach)誘發(fā)的血管舒張反應(yīng)的影響。2細(xì)胞培養(yǎng),購(gòu)買(mǎi)原代人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞株進(jìn)行傳代培養(yǎng),當(dāng)細(xì)胞達(dá)到90%融合時(shí)進(jìn)行傳代培養(yǎng),將細(xì)胞團(tuán)吹打成細(xì)胞懸液,然后種植在纖維連接蛋白包被的培養(yǎng)的圓玻片上,放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),培養(yǎng)箱需保持37°C恒溫和通以含5%CO2和95%氧氣的混合氣體。培養(yǎng)超過(guò)24小時(shí)后進(jìn)行鈣離子熒光標(biāo)記,用鈣成像檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)并記錄預(yù)孵育LE對(duì)ATP誘發(fā)的人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化的影響。結(jié)果:1在大鼠離體胸主動(dòng)脈血管環(huán)上,LE對(duì)血管收縮和舒張反應(yīng)的影響。0.4%脂肪乳預(yù)孵育5分鐘不影響Phe誘發(fā)的血管收縮濃度-反應(yīng)曲線(P0.05)。Phe(0.001-30μM)誘發(fā)離體血管環(huán)收縮反應(yīng)之后,給予Ach(0.0001-3μM),觀察并記錄Ach(0.0001-3μM)誘發(fā)的舒張反應(yīng)。0.4%LE預(yù)孵育5分鐘之后,明顯抑制Ach誘發(fā)的血管舒張反應(yīng)(P0.05)。2 LE對(duì)傳代培養(yǎng)的人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞鈣離子濃度的影響。(1)體外培養(yǎng)24h-48h的血管內(nèi)皮細(xì)胞,3μM Ach可以引起血管內(nèi)皮細(xì)胞[Ca~(2+)]i增加,0.4%LE浴槽灌流孵育5min后Ach誘發(fā)的[Ca~(2+)]i升高的幅度明顯降低(P0.05)。(2)10μM ATP也可以引起內(nèi)皮細(xì)胞[Ca~(2+)]i增加,0.4%LE浴槽灌流孵育5min后明顯抑制ATP(10μM)介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞[Ca~(2+)]i升高(P0.001)。(3)不同濃度的脂肪乳(0.2%,0.4%,0.8%和2.5%)浴槽灌流孵育5min后對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞[Ca~(2+)]i變化的影響不存在濃度-劑量的依賴(lài)性。以0.4%脂肪乳的影響最為明顯(P0.001)。0.4%脂肪乳孵育不同時(shí)間2min,5min,15min均可以抑制ATP介導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞[Ca~(2+)]i升高。(4)以0.1m M的EGTA螯合掉細(xì)胞外鈣離子,0.4%LE浴槽孵育5min后,依舊可以明顯抑制ATP(10μM)介導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞[Ca~(2+)]i升高(P0.001)。(5)0.4%LE預(yù)孵育5min明顯抑制5μM環(huán)匹克尼酸(CPA)誘導(dǎo)的[Ca~(2+)]i的升高(P0.001)。(6)布比卡因(300μM)可以使得血管內(nèi)皮細(xì)胞[Ca~(2+)]i明顯升高。(7)脂肪乳孵育一小時(shí)后可以顯著抑制10μM ATP刺激兩小時(shí)后引起的內(nèi)皮細(xì)胞NO釋放(P0.05)。結(jié)論:大鼠離體胸主動(dòng)脈血管環(huán),LE短時(shí)間孵育后對(duì)Ach誘導(dǎo)的血管舒張反應(yīng)EC50值明顯變大。傳代的人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞,脂肪乳可能通過(guò)抑制細(xì)胞內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣庫(kù)釋放的途徑抑制細(xì)胞內(nèi)鈣升高,減少內(nèi)皮細(xì)胞NO的生成,從而抑制血管舒張。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R96

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 于芳;李彤;;早期應(yīng)用脂肪乳對(duì)極低出生體重兒體質(zhì)量增長(zhǎng)的影響及安全性分析[J];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合兒科學(xué);2015年06期

2 丁e鹲，

本文編號(hào)：1265350