本文關(guān)鍵詞：1、18B抗腫瘤藥效學(xué)及相關(guān)機制研究2、硝羥喹啉抗腫瘤臨床前藥效學(xué)評價

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【摘要】：腫瘤細(xì)胞的快速增長。微管是細(xì)胞骨架的成分,控制細(xì)胞的增殖。由于腫瘤細(xì)胞的增殖速率遠(yuǎn)高于正常組織細(xì)胞,因此通過抑制微管的功能有可能有效抑制腫瘤細(xì)胞的增殖而對正常細(xì)胞無較大影響。XLWX-132-18B(后文稱18B),由本實驗室與中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院六所協(xié)作研發(fā)。在前期研究工作中,我們發(fā)現(xiàn),18B競爭結(jié)合于微管蛋白的秋水仙堿位點,能夠促進微管解聚,是一種新的微管靶向藥物。我們將利用體外試驗,小鼠體內(nèi)移植瘤模型等對18B體內(nèi)外抗腫瘤作用及相關(guān)機制進行研究探討。MTT結(jié)果顯示,18B能夠有效抑制多種腫瘤細(xì)胞的生長,并表現(xiàn)出一定的劑量效應(yīng)關(guān)系,兩次重復(fù)實驗結(jié)果基本接近。18B對于多種腫瘤細(xì)胞的IC50范圍在0.091～1.049nM之間,Imax在53.41%～95.05%之間。與陽性對照藥紫杉醇相比,18B對不同腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用基本相當(dāng)甚至更強。經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測我們發(fā)現(xiàn),18B能夠誘導(dǎo)BGC-823細(xì)胞發(fā)生早期及中晚期凋亡,8nM作用24h后BGC-823細(xì)胞早期及中晚期凋亡百分比達到66.45%；同時還能誘導(dǎo)BGC-823細(xì)胞的線粒體膜電位(MMP)呈現(xiàn)下降；能夠促進BGC-823細(xì)胞和HT-29細(xì)胞產(chǎn)生G2/M期阻滯。Hoechst 33342染色顯示,藥物作用后,細(xì)胞核碎裂明顯,細(xì)胞數(shù)目減少,部分細(xì)胞中染色體分布于細(xì)胞相反方向末端。定量PCR結(jié)果提示18B誘導(dǎo)細(xì)胞G2/M期阻滯和凋亡的機制可能是通過抑制CDK1表達,同時下調(diào)BCL-2, Survivin, TGF-β的表達量,并上調(diào)BAD和TNF-α的表達。體內(nèi)動物模型結(jié)果說明,18B能夠抑制S180肉瘤,人胃癌BGC-823以及人肺癌H460皮下移植瘤的生長。S180肉瘤KM小鼠皮下移植瘤模型試驗中,受試藥為1周2次,0.25mg/kg、0.5mg/kg和1.0mg/kg組的瘤重抑制率范圍在28.39%-72.62%。各組均無小鼠死亡。BGC-823皮下移植瘤的生長抑制試驗中,0.25mg/kg、0.5mg/kg和1.0mg/kg組的瘤重抑制率范圍在24.77%-77.32%。同時我們對部分實驗組腫瘤組織進行了HE染色和免疫組化試驗,主要檢測了Ki67, Caspase 3, CD31,結(jié)果同樣顯示了18B具有腫瘤抑制作用。人肺癌細(xì)胞H460裸鼠皮下移植瘤實驗中,0.25mg/kg、0.5mg/kg和1.0mg/kg組的瘤重抑制率范圍在17.76%-61.90%,各組存活率為100%,并且顯示出了一定的劑量效應(yīng)關(guān)系,總之,18B可以抑制體外培養(yǎng)的12種不同的腫瘤細(xì)胞的生長,可產(chǎn)生誘導(dǎo)BGC-823細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯,能夠下調(diào)CDK1、BCL-2、Survivin、TGF-β的表達,上調(diào)BAD和TNF-α的表達,體內(nèi)能夠抑制S180細(xì)胞,BGC-823細(xì)胞以及H460細(xì)胞皮下移植瘤的生長。經(jīng)典泌尿系統(tǒng)抗菌藥物硝羥喹啉(Nitroxoline)由于近期研究發(fā)現(xiàn)其具有抑制血管新生,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,抑制細(xì)胞侵襲的能力而重新獲得了研究者們的關(guān)注。而這些研究成果使得硝羥喹啉成為了具有重新利用成為抗腫瘤藥物的潛力。老藥新用是一種從已上市銷售的藥物中篩選新用途的方法。對于研發(fā)抗腫瘤藥物來說是一種全新的策略。由于“老藥”具有較穩(wěn)定的安全性和藥代動力學(xué)參數(shù),使其能夠快速推進至臨床研究階段。而在我們的研究中,主要通過建立腎癌和膀胱癌原位腫瘤模型對硝羥喹啉進行了臨床前抗腫瘤藥效學(xué)評價工作。原位腫瘤模型由于能夠模擬臨床患者的病理生理過程,較其他模型具有更大的實用意義。我們將人腎癌腫瘤組織塊穿刺接種到腎實質(zhì)組織中,建立腎癌原位腫瘤模型；用留置針機械摩擦損傷膀胱粘膜,及隨后用人膀胱癌細(xì)胞懸液暴露法,建立膀胱癌原位腫瘤模型。體外實驗結(jié)果顯示,硝羥喹啉能夠有效抑制多種腫瘤細(xì)胞的生長,且具有一定的劑量依賴關(guān)系。藥物在80μM時能夠達到最大抑制作用,抑制率在75%-99%,對于人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞同樣能達到97%的抑制率。然而該濃度的硝羥喹啉對正常細(xì)胞的抑制作用不到40%,提示了硝羥喹啉的安全性。由于硝羥喹啉在體內(nèi)主要以硫酸鹽的形式存在,因此我們探究了硝羥喹啉硫酸鹽是否具有同樣的抗腫瘤效果。結(jié)果顯示,硝羥喹啉硫酸鹽對T24及HUVEC細(xì)胞顯示了一定的抑制效果。但是,其最大生長抑制率相比硝羥喹啉要低30%,其IC50則要高2-3倍。在體內(nèi)研究結(jié)果中,硝羥喹啉對腎癌和膀胱癌原位腫瘤模型的瘤重抑制率在46%-85%,顯示了較強的抗腫瘤作用。而免疫組化結(jié)果顯示硝羥喹啉主要通過抑制腫瘤血管新生和腫瘤細(xì)胞增殖來減緩腎癌膀胱癌的腫瘤病程。綜上所述,硝羥喹啉具有較好的抗腫瘤活性,并且得益于該藥物為人所熟知的安全性和藥代動力學(xué)參數(shù),硝羥喹啉已經(jīng)被我國批準(zhǔn)進入二期臨床研究。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R965

【共引文獻】

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本文編號：1258051