本文關(guān)鍵詞：細(xì)胞外酸中毒對(duì)原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元NLRP1炎癥小體激活的影響及其機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 皮層神經(jīng)元 細(xì)胞外酸化 NLRP-1炎癥小體 ASICs BK

【摘要】：炎癥小體(inflammasome)是由胞漿內(nèi)模式識(shí)別受體(pattern recognition receptors,PRRs)參與組裝的多蛋白復(fù)合物,是宿主固有免疫系統(tǒng)的重要組成部分。NLRP1炎癥小體(NAcht leucinerich-repeat protein-1,NLRP-1)是最早被鑒定的炎癥小體,包括NLRP1、caspase-1以及炎癥小體相關(guān)的接頭蛋白ASC(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC),它在神經(jīng)元有表達(dá),參與了多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理生理過(guò)程。酸中毒(acidosis)是由于酸堿平衡失調(diào)導(dǎo)致過(guò)度的酸在體液積聚的一種病理狀態(tài),是多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病共有的特征。但是目前酸中毒與NLRP1炎癥小體之間的關(guān)系尚不明確。目的:研究細(xì)胞外酸中毒對(duì)原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元NLRP-1炎癥小體激活的影響及機(jī)制,探討NLRP-1炎癥小體在酸中毒誘導(dǎo)神經(jīng)元損傷中的作用。方法:采用western blot方法檢測(cè)細(xì)胞外酸化處理組及藥物處理組原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元NLRP-1、caspase-1、ASC、IL-18、IL-1β、Bax、Bcl2、Caspase-3的表達(dá)情況;全細(xì)胞膜片鉗方法觀察細(xì)胞外酸化對(duì)皮層神經(jīng)元大電導(dǎo)鈣激活鉀通道(large conductance calcium activated potassium channel,BK)電流的影響;免疫熒光雙標(biāo)法觀察皮層神經(jīng)元酸敏感離子通道(acid-sensing ion channels,ASICs)和BK通道的共表達(dá)情況;采用離子電極選擇法檢測(cè)細(xì)胞外酸化處理組及藥物處理組原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鉀離子濃度;皮層神經(jīng)元細(xì)胞存活率和乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)釋放通過(guò)MTT法和LDH試劑盒來(lái)檢測(cè)。結(jié)果:1.細(xì)胞外酸化處理各組(p H 7.0,p H 6.5,p H 6.0)caspase-1、NLRP-1、IL-18、IL-1β、ASC表達(dá)均高于正常組(p H7.4),表明細(xì)胞外酸中毒可以激活NLRP-1炎癥小體。2.細(xì)胞外酸化p H 6.5)可以增加皮層神經(jīng)元BK通道電流,降低細(xì)胞內(nèi)鉀離子濃度,BK通道阻斷劑Ib TX可抑制這一效應(yīng)。3.ASICs和BK通道在皮層神經(jīng)元共表達(dá),ASICs抑制劑amiloride和ASIC1a特異性抑制劑Pc TX1可阻斷細(xì)胞外酸化誘導(dǎo)的BK電流增加及細(xì)胞內(nèi)鉀離子濃度降低。4.BK通道抑制劑Ib TX抑制細(xì)胞外酸化(p H 6.5)誘導(dǎo)的caspase-1、NLRP-1、IL-18、IL-1β、ASC表達(dá)水平的增高,提示BK通道參與了細(xì)胞外酸中毒誘導(dǎo)的NLRP1炎癥小體的激活。5.ASIC1a特異性抑制劑Pc TX1抑制細(xì)胞外酸化(p H 6.5)誘導(dǎo)的caspase-1、NLRP-1、IL-18、IL-1β、ASC表達(dá)水平的增高,提示ASICs參與了細(xì)胞外酸中毒誘導(dǎo)的NLRP1炎癥小體的激活。6.細(xì)胞外酸化(p H 6.5)處理明顯降低皮層神經(jīng)元存活率,促進(jìn)LDH釋放,增加caspase-3和Bax的表達(dá),而減少Bcl2的表達(dá),細(xì)胞凋亡明顯增多;給予NLRP1Ab(1:100)處理抑制NLRP1炎癥小體激活后,細(xì)胞外酸化誘導(dǎo)的這些效應(yīng)明顯被抑制,表明NLRP1炎癥小體參與了酸中毒誘導(dǎo)的皮層神經(jīng)元損傷。結(jié)論ASICs-BK通道介導(dǎo)了細(xì)胞外酸中毒誘導(dǎo)的NLRP1炎癥小體的激活,參與了酸中毒誘導(dǎo)的皮層神經(jīng)元損傷。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96
，

本文編號(hào)：1250276