發(fā)布時(shí)間：2017-11-19 14:27

  本文關(guān)鍵詞：納米銀抗菌機(jī)制的研究

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【摘要】：目的:納米銀作為一種強(qiáng)效的抗菌劑已引起人們廣泛的關(guān)注,與其他材料相比,納米銀對(duì)微生物表現(xiàn)出強(qiáng)大的毒性,然而對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的毒性較小。目前研究表明細(xì)菌等原核生物也可以表現(xiàn)出凋亡的特征,并指出細(xì)菌凋亡可能是新的抗菌機(jī)制的研究方向。雖然納米銀的抗菌機(jī)制已有學(xué)者涉足,但目前仍未十分明確,本研究旨在進(jìn)一步探討納米銀抗菌機(jī)制,探索納米銀是否能通過引起細(xì)菌發(fā)生凋亡這一途徑發(fā)揮抗菌機(jī)制,為納米銀的抗菌機(jī)制提供新的研究思路,為細(xì)菌凋亡的研究提供理論依據(jù)。方法:首先確定實(shí)驗(yàn)所用的納米銀溶液的性質(zhì),選擇大腸桿菌作為代表菌株,采用檢測(cè)CFU和OD值兩種方法,繪制大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線,確定大腸桿菌的生長(zhǎng)狀況以及加入納米銀(濃度為5ppm和10ppm)對(duì)大腸桿菌生長(zhǎng)的影響;采用瓊脂糖凝膠電泳的方法檢測(cè)經(jīng)納米銀作用后大腸桿菌基因組DNA含量的變化;采用PI染色,流式細(xì)胞儀檢測(cè)的方法,并用Flowjo和Graph Pad Prism軟件分析數(shù)據(jù),檢測(cè)納米銀是否導(dǎo)致細(xì)菌死亡以及死亡的比例;通過透射電子顯微鏡(TEM),觀察大腸桿菌經(jīng)納米銀作用后,其形態(tài)的變化;采用Annexinⅴ和PI雙染色,流式細(xì)胞儀檢測(cè)的方法,并用Flowjo和Graph Pad Prism軟件分析數(shù)據(jù),檢測(cè)納米銀是否可以引起細(xì)菌發(fā)生凋亡及凋亡的比例;采用Brdu-ELISA方法,檢測(cè)納米銀是否可以抑制細(xì)菌增殖,并用Graph Pad Prism軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果:1.本實(shí)驗(yàn)中所用的納米銀溶液中,納米顆粒直徑約為5~10nm,且形狀比較規(guī)則均勻。通過大腸桿菌的生長(zhǎng)曲線,我們確定納米銀可以引起細(xì)菌生長(zhǎng)速率的降低,使細(xì)菌生長(zhǎng)變得遲緩。2.大腸桿菌與納米銀共培養(yǎng)后,提取細(xì)菌基因組進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,分析發(fā)現(xiàn)細(xì)菌基因組含量下降,這與生長(zhǎng)曲線的變化情況相吻合。3.經(jīng)過PI染色,流式細(xì)胞儀檢測(cè)死亡細(xì)菌比例,結(jié)果發(fā)現(xiàn)濃度為5ppm的納米銀引起的細(xì)菌PI染色陽性比例大于10ppm的納米銀。4.通過透射電子顯微鏡(TEM)觀察經(jīng)納米銀處理后大腸桿菌形態(tài)的變化,發(fā)現(xiàn)經(jīng)納米銀處理后,細(xì)菌菌體中出現(xiàn)電子致密顆粒,但菌體仍保持完整。5.采用Annexin-ⅴ和PI雙染色,流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡細(xì)菌的比例,結(jié)果發(fā)現(xiàn)加入納米銀之后細(xì)菌凋亡的比例增加,并且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,濃度為5ppm的納米銀引起的細(xì)菌Annexin-ⅴ染色陽性比例小于10ppm的納米銀。6.使用Brd U ELISA檢測(cè)經(jīng)納米銀處理后的大腸桿菌,發(fā)現(xiàn)大腸桿菌的增殖降低,并且這種減低的趨勢(shì)與加入納米銀的濃度呈正比。結(jié)論:通過我們的實(shí)驗(yàn)證明,納米銀的抗菌作用機(jī)制,可以通過以下兩個(gè)方面來闡釋:1.納米銀可以誘導(dǎo)大腸桿菌細(xì)胞膜磷脂酰絲氨酸外翻,發(fā)生細(xì)菌凋亡,從而產(chǎn)生抗菌效果。2.納米銀可以抑制大腸桿菌新生核酸的生成,抑制大腸桿菌的增殖,從而發(fā)揮抗菌效果。本實(shí)驗(yàn)證明,一定濃度的納米銀可以誘導(dǎo)細(xì)菌發(fā)生凋亡,抑制細(xì)菌的增殖,從而發(fā)揮其抗菌作用,本實(shí)驗(yàn)首次全面從細(xì)菌凋亡的角度來闡釋納米銀抗菌的機(jī)制,為將細(xì)菌凋亡理論應(yīng)用于新型抗菌機(jī)制的研究以及一定濃度納米銀的臨床應(yīng)用提供了理論依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96;TB383.1

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 孫雪,奚廷斐;第三代生物醫(yī)學(xué)材料與再生醫(yī)學(xué) 國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)需求的變化與發(fā)展[J];中國(guó)臨床康復(fù);2005年26期

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本文編號(hào)：1203901