發(fā)布時(shí)間：2017-11-19 08:17

  本文關(guān)鍵詞：葉酸介導(dǎo)白蛋白包載長(zhǎng)春堿納米粒體內(nèi)外抗腫瘤活性評(píng)估

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【摘要】：近年來(lái),隨著經(jīng)濟(jì)、社會(huì)的飛速發(fā)展和人口老齡化進(jìn)程的加劇,中國(guó)惡性腫瘤的發(fā)病率和死亡率呈上升趨勢(shì)。癌癥給人們的身體健康和社會(huì)發(fā)展造成了嚴(yán)重危害,因此攻克癌癥難關(guān)已成為醫(yī)藥及化學(xué)工作者當(dāng)務(wù)之急的任務(wù)。長(zhǎng)春堿(vinblastine,VLB)是由夾竹桃科(Apocynaceae)植物長(zhǎng)春花(Catharanthus roseus)中分離、提取出的一種生物堿,是細(xì)胞周期特異性抗腫瘤藥,已廣泛用于多數(shù)癌癥的治療。但由于長(zhǎng)春堿對(duì)機(jī)體具有毒副作用、會(huì)產(chǎn)生局部刺激,且半衰期短、無(wú)靶向性等缺點(diǎn),使長(zhǎng)春堿在臨床上廣泛長(zhǎng)期的應(yīng)用受到限制。本實(shí)驗(yàn)從體內(nèi)(in vivo)和體外(in vitro)抗腫瘤活性、抗腫瘤作用機(jī)制等藥理學(xué)評(píng)價(jià)指標(biāo)對(duì)葉酸介導(dǎo)的白蛋白包載長(zhǎng)春堿納米粒(FA-VLB-BSANP)進(jìn)行抗腫瘤活性評(píng)估,從而為長(zhǎng)春堿新劑型的研究和開(kāi)發(fā)提供新的研究思路。1.本文采用MTT法檢測(cè)FA-VLB-BSANP體外抗腫瘤活性。結(jié)果顯示,VLB及FA-VLB-BSANP對(duì)人胃癌細(xì)胞SGC-7901的抑制作用最強(qiáng),且呈時(shí)間和濃度雙向依賴性,作用細(xì)胞48h后IC5o值分別為69.19±7.32pg/mL和60.63±8.38μg/mL。通過(guò)FA-VLB-BSANP對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的影響結(jié)果可以看出,FA-VLB-BSANP對(duì)細(xì)胞增殖能力的抑制作用顯著強(qiáng)于VLB組,且抑制作用隨時(shí)間的延長(zhǎng)越發(fā)明顯。此外,采用倒置顯微鏡從形態(tài)學(xué)角度觀察VLB及FA-VLB-BSANP作用于SGC-7901細(xì)胞后的變化,可以看出FA-VLB-BSANP對(duì)細(xì)胞增殖抑制作用更加顯著。2.采用AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測(cè)VLB、FA-VLB-BSANP對(duì)SGC-7901細(xì)胞凋亡率的影響。結(jié)果表明,VLB、FA-VLB-BSANP處理SGC-7901細(xì)胞后會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡百分率的提高,并在一定的劑量范圍內(nèi),隨藥物濃度的增加,引起細(xì)胞凋亡百分率的提高。相同濃度的VLB及FA-VLB-BSANP處理SGC-7901細(xì)胞后,FA-VLB-BSANP組細(xì)胞的平均凋亡百分率較VLB原粉組高。采用吖啶橙染色法檢測(cè)VLB、FA-VLB-BSANP誘導(dǎo)SGC-7901細(xì)胞凋亡導(dǎo)致的細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。結(jié)果顯示,FA-VLB-BSANP組細(xì)胞凋亡信號(hào)較VLB組明顯,可見(jiàn)數(shù)量較多的明顯膨脹的細(xì)胞及明顯的凋亡小體。3.采用Rh123染色,利用流式細(xì)胞儀及倒置熒光顯微鏡檢測(cè)VLB、FA-VLB-BSANP對(duì)SGC-7901細(xì)胞線粒體膜電位(△Ψm)變化的影響。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示,SGC-7901細(xì)胞經(jīng)過(guò)不同濃度的VLB及FA-VLB-BSANP作用后,可引起線粒體膜電位降低,隨著藥物濃度增加,低熒光強(qiáng)度部分細(xì)胞所占百分比也逐漸增加。且FA-VLB-BSANP誘導(dǎo)癌細(xì)胞出現(xiàn)膜電位下降的效果顯著好于VLB原粉。倒置熒光顯微鏡觀察結(jié)果顯示,VLB及FA-VLB-BSANP均能引起細(xì)胞線粒體膜電位的降低,且同一濃度時(shí)FA-VLB-BSANP比VLB作用細(xì)胞后熒光強(qiáng)度減弱的更加明顯。4.采用ELISA法檢測(cè)VLB及FA-VLB-BSANP作用SGC-7901細(xì)胞后相關(guān)蛋白水平的變化。結(jié)果顯示,與VLB相比,FA-VLB-BSANP對(duì)Bcl-2蛋白下調(diào)及Bax蛋白上調(diào)的作用更顯著。FA-VLB-BSANP組cyclinBi蛋白表達(dá)量略高于VLB組,FA-VLB-BSANP對(duì)細(xì)胞微管的破壞作用略強(qiáng)于VLB,可使更多的腫瘤細(xì)胞阻滯于M期。FA-VLB-BSANP對(duì)IKB-α蛋白下調(diào)及MEKK1蛋白上調(diào)作用略顯著于VLB。5.采用ELISA法檢測(cè)VLB及FA-VLB-BSANP對(duì)SGC-7901細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力的影響。結(jié)果顯示,與VLB相比,FA-VLB-BSANP對(duì)MMP-2. MMP-9. VEGF三種因子表達(dá)的抑制作用更加顯著。6.選擇S180荷瘤小鼠來(lái)研究VLB及FA-VLB-BSANP體內(nèi)抗腫瘤活性。實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明,VLB及FA-VLB-BSANP組的LDso值分別為24.69mg/kg和28.61mg/kg, FA-VLB-BSANP體內(nèi)毒性明顯低于VLB原粉。當(dāng)給藥劑量為4mg/kg時(shí),VLB和FA-VLB-BSANP的體內(nèi)抑瘤率分別為79.43%和86.86%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與VLB原粉相比,FA-VLB-BSANP在小鼠體內(nèi)具有更好的抗腫瘤活性。綜上所述,FA-VLB-BSANP在體內(nèi)及體外抗腫瘤活性研究中均表現(xiàn)出了更好的抗腫瘤活性。與VLB相比,]EA-VLB-BSANP提高了對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用,增強(qiáng)了對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響,降低了體內(nèi)毒性。因此,FA-VLB-BSANP是一種高效低毒的VLB納米制劑,此實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)于FA-VLB-BSANP的進(jìn)一步研究及開(kāi)發(fā)為新藥提高了良好的理論基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R943

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

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本文編號(hào)：1202900