本文關(guān)鍵詞：融合肽hEGF-AWRK6的毒性研究

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【摘要】：融合肽hEGF-AWRK6是利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng),通過IPTG誘導(dǎo),表達(dá)純化得到的人表皮生長(zhǎng)因子(hEGF)和抗菌肽AWRK6的重組融合肽。實(shí)驗(yàn)室前期研究結(jié)果證明融合肽hEGF-AWRK6是具有抗菌活性和促傷口愈合活性的雙功能多肽,有望開發(fā)成為治療燒傷和創(chuàng)傷等病癥的臨床藥物。一種藥物的開發(fā)研究,前期必須要進(jìn)行急性毒性研究,一般的方法是采用小鼠經(jīng)口或者注射藥物進(jìn)行急毒測(cè)試。現(xiàn)如今利用動(dòng)物進(jìn)行急性毒性試驗(yàn),因涉及到倫理問題而備受爭(zhēng)議,再加上動(dòng)物使用3R原則的提出,發(fā)展細(xì)胞毒性和模式生物毒性預(yù)篩模型來預(yù)測(cè)動(dòng)物急性毒性,成為毒性研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)研究方向。為了進(jìn)一步臨床應(yīng)用,本實(shí)驗(yàn)研究了融合肽hEGF-AWRK6對(duì)正常細(xì)胞、模式生物和嚙齒類動(dòng)物的毒性作用。本文首先進(jìn)行細(xì)胞體外毒性測(cè)試和秀麗隱桿線蟲毒性測(cè)試,然后根據(jù)測(cè)試結(jié)果,估算小鼠體內(nèi)急性毒性測(cè)試的用藥劑量,以此達(dá)到減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用量、精確毒性測(cè)試結(jié)果和探究體外替代毒理研究方法目的。實(shí)驗(yàn)方法：本實(shí)驗(yàn)首先進(jìn)行細(xì)胞毒性檢測(cè),所選用的細(xì)胞有小鼠成纖維細(xì)胞(3T3)和人角質(zhì)形成細(xì)胞(HACAT)。利用CCK8方法測(cè)定5mg/mL、10mg/mL、20mg/mL、30mg/mL、50mg/mL融合肽hEGF-AWRK6對(duì)細(xì)胞活性的影響。在細(xì)胞毒性測(cè)試的基礎(chǔ)上,以相同濃度梯度的融合肽hEGF-AWRK6作用于秀麗隱桿線蟲進(jìn)行毒性測(cè)試,測(cè)量指標(biāo)包括秀麗隱桿線蟲的半致死率、生殖能力、運(yùn)動(dòng)能力和最長(zhǎng)壽命等。根據(jù)細(xì)胞和秀麗隱桿線蟲毒性測(cè)試結(jié)果,設(shè)定小鼠腹腔注射毒性試驗(yàn)的抗菌肽用量,分別以40mg/kg、200mg/kg、1000mg/kg、2500mg/kg、5000mg/kg的hEGF-AWRK6對(duì)小鼠進(jìn)行腹腔注射,測(cè)量指標(biāo)包括小鼠半死率、臟器指數(shù)、精子畸形率和血生化指標(biāo)等。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：細(xì)胞毒性檢測(cè)的結(jié)果顯示，,融合肽hEGF-AWRK6對(duì)正常細(xì)胞毒性較低,IC5050mg/mL。在秀麗隱桿線蟲毒性實(shí)驗(yàn)中,融合肽hEGF-AWRK6的MTC=50mg/mL,LC50=22.01mg/mL,其95%置信區(qū)間為19.18-25.76,對(duì)秀麗隱桿線蟲的生殖能力、運(yùn)動(dòng)能力和最長(zhǎng)壽命無顯著影響。小鼠急性毒性試驗(yàn)中,融合肽hEGF-AWRK6的MTD5000mg/kg BW,LD505000mg/kg BW,根據(jù)急毒分級(jí)標(biāo)準(zhǔn),hEGF-AWRK6屬無毒級(jí),且對(duì)小鼠的臟器指數(shù)、精子畸形率、血生化指標(biāo)等無顯著影響。結(jié)論：融合肽hEGF-AWRK6無實(shí)際毒性,通過對(duì)細(xì)胞毒性、秀麗隱桿線蟲毒性試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)秀麗隱桿線蟲毒性研究模型是替代傳統(tǒng)嚙齒類毒性研究的可行性方法。
【學(xué)位授予單位】：遼寧大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R965

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊珠英,房紅瑩,顧冠彬,萬海燕;醫(yī)療產(chǎn)品體外細(xì)胞毒性的試驗(yàn)研究[J];中國血液流變學(xué)雜志;2004年03期

2 ;細(xì)胞毒性T細(xì)胞的作用原理[J];中華內(nèi)科雜志;1995年03期

3 楊寧，繆繼式，尹蘭珍，查寶興，，劉漢義;人LAK細(xì)胞的細(xì)胞化學(xué)活性與其細(xì)胞毒性關(guān)系的探討[J];南京鐵道醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1995年03期

4 孫皎,薛淼,今井弘一,中村正明;牙科金屬材料的組成對(duì)細(xì)胞毒性影響的研究[J];中國生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)報(bào);1997年02期

5 鄧建軍,董發(fā)勤,吳逢春,蒲小允,John Huang,趙世泉;纖粒礦物粉塵體外細(xì)胞毒性研究[J];巖石礦物學(xué)雜志;2000年03期

6 廖雍玲,董吉良,肖友立,何永華,鄒倫伶,張貽瑞,周旭;公路粉塵體外細(xì)胞毒性的實(shí)驗(yàn)研究[J];職業(yè)與健康;2002年04期

7 王琳,賈琴,范能全;評(píng)價(jià)細(xì)胞毒性方法的探討[J];瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2005年02期

8 劉莎;孫桂菊;;伏馬菌素細(xì)胞毒性的研究進(jìn)展[J];環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué);2007年02期

9 吳維佳;劉姜瑾;楊陟華;潘秀頡;胡旺順;齊紹武;鐘科軍;朱茂祥;;煙用香精香料的細(xì)胞毒性研究[J];湖南農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年09期

10 黃清泉;吳公平;王蓉蓉;;國產(chǎn)雷帕霉素藥物洗脫支架體外細(xì)胞毒性研究[J];藥物分析雜志;2010年07期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 羅潔;林育純;陳慧峰;李文;李曉杰;張樹江;林麗娜;胡耀明;郝元濤;陳雯;凌文華;林忠寧;;鎘對(duì)PP2A-B56γ高表達(dá)的人肝L02細(xì)胞中基因轉(zhuǎn)錄和細(xì)胞毒性的影響[A];全國生化/工業(yè)與衛(wèi)生毒理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2010年

2 奚晶;欒洋;任進(jìn);;兩種體外檢測(cè)細(xì)胞毒性方法的結(jié)果比較[A];中國毒理學(xué)會(huì)第三屆中青年學(xué)者科技論壇暨2011年全國前列腺藥理毒理學(xué)研討會(huì)論文集[C];2011年

3 鹿曉晶;王惠芳;高川;李麗琴;;二苯氯胂的細(xì)胞毒性及其對(duì)細(xì)胞DNA的損傷作用[A];中國毒理學(xué)會(huì)第四屆全國學(xué)術(shù)會(huì)議論文（摘要）集[C];2005年

4 蔡蓓;楊雅婷;黃芒莉;;天然膠乳橡膠避孕套細(xì)胞毒性研究[A];中國科學(xué)技術(shù)協(xié)會(huì)第十屆年會(huì)21分會(huì)場(chǎng)論文匯編[C];2008年

5 羅潔;林育純;陳慧峰;李文;李曉杰;張樹江;林麗娜;胡耀明;陳雯;林忠寧;;鎘對(duì)PP2A-B56γ高表達(dá)的人肝L02細(xì)胞中基因轉(zhuǎn)錄和細(xì)胞毒性的影響[A];廣東省環(huán)境誘變劑學(xué)會(huì)、廣東省預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)衛(wèi)生毒理專業(yè)委員會(huì)2010年學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2010年

6 高萍;程琳;賈文英;史弘道;;丙烯酰胺單體的細(xì)胞毒性研究[A];醫(yī)用聚丙烯酰胺水凝膠（奧美定）論文匯編（第二輯）[C];2002年

7 賈文英;程琳;史弘道;;丙烯酰胺與醫(yī)用聚丙烯酰胺水凝膠細(xì)胞毒性研究(摘要)[A];醫(yī)用聚丙烯酰胺水凝膠（奧美定）論文匯編（第二輯）[C];2002年

8 李楠;李培勇;;碳量子點(diǎn)的細(xì)胞內(nèi)分布以及細(xì)胞毒性研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國核醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2011年

9 張藝;顏天;周名江;;離子通道類毒素的細(xì)胞毒性和檢測(cè)方法的研究[A];中國毒理學(xué)會(huì)第二屆全國中青年學(xué)者科技論壇會(huì)議論文集[C];2007年

10 王薇;熊微;萬江陵;徐輝碧;楊祥良;;聚乙二醇修飾降低聚酰胺-胺樹狀大分子細(xì)胞毒性的機(jī)理研究(英文)[A];第十屆中國科協(xié)年會(huì)論文集（三）[C];2008年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 關(guān)歆;對(duì)注射器用活塞細(xì)胞毒性項(xiàng)目檢測(cè)有關(guān)問題的建議[N];中國醫(yī)藥報(bào);2011年

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1 王曉慧;Cirbp在鉛誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性中的作用及其分子機(jī)制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

2 薛強(qiáng);阿霉素載藥小分子水凝膠的制備及體外抗腫瘤活性研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

3 華來慶;病毒免疫逃逸和抗病毒應(yīng)答新機(jī)制[D];上海交通大學(xué);2014年

4 馬賽;兩種常用季銨鹽型抗菌單體抗菌性能、細(xì)胞毒性的比較研究及其細(xì)胞毒性機(jī)理初探[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2012年

5 王雯;納米顆粒的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2009年

6 劉志偉;銅的腸道上皮細(xì)胞毒性和對(duì)大鼠的亞急性毒性研究[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

7 趙銳;轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子在砷誘導(dǎo)的人類HaCaT細(xì)胞抗氧化反應(yīng)和細(xì)胞毒性中作用的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2010年

8 姜海濤;鈷納米顆粒對(duì)外周血T淋巴細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)及其機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2012年

9 于光艷;甲醛聯(lián)合苯對(duì)幼鼠骨髓細(xì)胞毒性及其相關(guān)機(jī)制的研究[D];吉林大學(xué);2008年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 胡曉鳳;致病桿菌中SrfABC類毒素生物活性研究[D];湖南師范大學(xué);2015年

2 楊桂蘭;羥丙基透明質(zhì)酸的制備及性質(zhì)研究[D];山東大學(xué);2015年

3 劉騰飛;黃連和小檗堿對(duì)三種體外培養(yǎng)細(xì)胞毒性的初步研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

4 余靜;長(zhǎng)度及功能化對(duì)多壁碳納米管細(xì)胞毒性的影響研究[D];南京大學(xué);2016年

5 雷明珠;TWEAK介導(dǎo)LPS對(duì)小鼠uNK細(xì)胞毒性的調(diào)節(jié)作用及分子機(jī)制[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

6 周秋花;大氣細(xì)顆粒物在模擬肺液中的行為、對(duì)細(xì)胞膜的作用及其細(xì)胞毒性[D];山東大學(xué);2016年

7 姚晨婕;納米二氧化鈦細(xì)胞毒性及免疫毒性機(jī)理研究[D];上海大學(xué);2016年

8 石思;來源于海洋生物的候選Ⅰ類新藥POA的早期肝腎細(xì)胞毒性研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

9 李函頻;融合肽hEGF-AWRK6的毒性研究[D];遼寧大學(xué);2016年

10 鄧建軍;工業(yè)常用礦物粉塵表面理化特性對(duì)肺泡巨噬細(xì)胞細(xì)胞毒性的實(shí)驗(yàn)研究[D];四川大學(xué);2003年

本文編號(hào)：1185441