本文關(guān)鍵詞：心衰模型中冠狀動脈平滑肌細(xì)胞鈣異常的研究

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【摘要】：目的:研究心衰個體中冠狀動脈平滑肌細(xì)胞鈣清除異常及ROS水平。方法:1.30只成年雄性SD大鼠,體重250g左右,隨機(jī)分為:假手術(shù)組(n=10),心衰組(n=20),心衰組行左冠狀動脈前降支結(jié)扎來建立心衰模型,假手術(shù)組為同期開胸但不結(jié)扎。建模12周后,隨機(jī)選10只心衰組大鼠,分別取其缺血區(qū)及非缺血區(qū)的冠狀動脈血管。2.采用木瓜蛋白酶和Ⅱ型膠原酶兩步酶消化法獲取單個冠狀動脈平滑肌細(xì)胞。3.用免疫熒光法對冠狀動脈平滑肌細(xì)胞進(jìn)行鑒定。4.采用流式細(xì)胞術(shù)測各組冠狀動脈平滑肌細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度和ROS水平。5.利用Western blot法測細(xì)胞內(nèi)p47phox、p-p47phox、SERCA及NCX蛋白的表達(dá)水平。6.采用Real-time qRT-PCR檢測p47phox、SERCA及NCX在mRNA水平上的改變。結(jié)果:1.免疫熒光染色法鑒定分離所得細(xì)胞為平滑肌細(xì)胞。2.心衰組(缺血區(qū))及心衰組(非缺血區(qū))的鈣離子水平、ROS水平均較假手術(shù)組明顯增高(P0.01),兩心衰組相比,鈣離子水平及ROS水平均無明顯差異(P0.05)。3.與假手術(shù)組相比,心衰組(缺血區(qū))及心衰組(非缺血區(qū))p47phox、p-p47phox表達(dá)明顯增加(P0.05);心衰組(缺血區(qū))及心衰組(非缺血區(qū))NCX表達(dá)較假手術(shù)組顯著增加(P0.01);心衰組(缺血區(qū))及心衰組(非缺血區(qū))SERCA表達(dá)較假手術(shù)組顯著減少(P0.01)。兩心衰組相比,p47phox、p-p47phox、NCX及SERCA表達(dá)無明顯差異(P0.05)。4.與假手術(shù)組相比,心衰組(缺血區(qū))及心衰組(非缺血區(qū))的p47phox、NCX的mRNA表達(dá)明顯上調(diào)(P0.01);心衰組(缺血區(qū))及心衰組(非缺血區(qū))SERCA的mRNA表達(dá)明顯下調(diào)(P0.01)。兩心衰組相比,p47phox、NCX及SERCA的mRNA表達(dá)無明顯差異(P0.05)。結(jié)論:1.心衰時冠狀動脈血管(缺血區(qū)及非缺血區(qū))的平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度均升高,血管舒張功能障礙,血管發(fā)生痙攣,導(dǎo)致心衰。2.心衰時冠狀動脈血管(缺血區(qū)及非缺血區(qū))的平滑肌細(xì)胞內(nèi)ROS水平上調(diào),血管硬度增加,導(dǎo)致心衰。3.心衰時NCX表達(dá)增多,SERCA表達(dá)減少,導(dǎo)致平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣清除異常。4.心衰時p47phox發(fā)生磷酸化,p47表達(dá)增加,使平滑肌細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生增多,影響鈣穩(wěn)態(tài)。
【學(xué)位授予單位】：河北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R965

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本文編號：1184727