本文關(guān)鍵詞：重組人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子純化工藝的建立

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【摘要】：目的建立適于生產(chǎn)應(yīng)用的重組人睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(recombinant human ciliary neurotrophic factor,rh CNTF)純化工藝,并對(duì)純化產(chǎn)物進(jìn)行鑒定。方法將CNTFnew CC22突變體工程菌BL21(DE3)菌體破碎上清經(jīng)25%飽和度硫酸銨沉淀后,沉淀上清先后經(jīng)Butyl HP疏水層析和Q HP陰離子交換層析進(jìn)行純化。通過(guò)非還原SDS-PAGE和反相高效液相色譜分析(RP-HPLC)檢測(cè)樣品純度;質(zhì)譜法測(cè)定rh CNTF的相對(duì)分子質(zhì)量;Edman化學(xué)降解法測(cè)定rh CNTF的N-端氨基酸序列;TF-1細(xì)胞/CCK-8比色法和對(duì)飲食誘導(dǎo)性肥胖(diet-induced obesity,DDIO)大鼠的減肥作用分別測(cè)定rh CNTF的體外和體內(nèi)生物學(xué)活性。結(jié)果純化后rh CNTF的純度可達(dá)99.6%,純化回收率為34.5%;相對(duì)分子質(zhì)量為21 153;N-端15個(gè)氨基酸序列為Ala-Phe-Thr-Glu-His-Ser-Pro-Leu-Thr-Pro-His-Arg-Arg-Asp-Leu;生物學(xué)比活性高于2×106 IU/mg,并能有效降低DIO大鼠體重。結(jié)論經(jīng)3步純化成功獲得了高純度的rh CNTF,為進(jìn)一步對(duì)其性質(zhì)、功能和生產(chǎn)應(yīng)用研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 北京生物制品研究所有限責(zé)任公司;
【基金】：北京市科委“生物醫(yī)藥與生命科學(xué)創(chuàng)新培育研究一創(chuàng)新品種臨床前研究專(zhuān)項(xiàng)”(z151100003915068) 國(guó)藥集團(tuán)新產(chǎn)品開(kāi)發(fā)基金(2011SW02)
【分類(lèi)號(hào)】：R977
【正文快照】： 睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(ciliary neurotrophic factor,CNTF)是由位于外周神經(jīng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的一種神經(jīng)細(xì)胞因子,人類(lèi)CNTF(h CNTF)相對(duì)分子質(zhì)量為20 000~24 000,僅在第17位有1個(gè)Cys,為酸性蛋白質(zhì)。過(guò)去30年研究發(fā)現(xiàn),CNTF對(duì)神經(jīng)元、少突膠質(zhì)細(xì)胞、肌肉細(xì)胞、骨細(xì)胞、

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 宋艷;王智鼎;李岳飛;邱嵐;姜秀梅;孫德軍;;兔心肌中次黃嘌呤純化工藝的優(yōu)化[J];中國(guó)生化藥物雜志;2012年06期

2 ;[J];;年期

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本文編號(hào)：1184393