本文關(guān)鍵詞：鴨腎間充質(zhì)干細胞建系及普伐他汀對其增殖的影響

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【摘要】：目的建立北京鴨腎間充質(zhì)干細胞(Nephric Mesenchymal Stem Cells,NMSCs)的體外培養(yǎng)體系,研究其生物學特性,探究普伐他汀對鴨腎間充質(zhì)干細胞增殖作用的影響。方法(1)NMSCs的分離培養(yǎng):以15日齡北京鴨胚胎腎為研究材料,采用混合酶消化法獲得NMSCs,并進行傳代、凍存和復蘇。(2)NMSCs生物學特性研究:形態(tài)學觀察;繪制細胞生長曲線,計算群體倍增時間;特異性表面標志物RT-PCR和免疫熒光檢測;多向分化潛能鑒定:將NMSCs定向誘導成脂肪細胞、胰島細胞、肝樣細胞和上皮細胞,并對誘導后的細胞進行特異性染色、RT-PCR和免疫熒光鑒定。(3)普伐他汀對NMSCs增殖作用研究:將細胞隨機分為對照組和實驗組,實驗組向培養(yǎng)基中分別加入0.001、0.01、0.1、1、10μmol?L-1五種濃度的普伐他汀,觀察藥物作用后細胞的形態(tài)學變化;MTS比色法檢測細胞增殖情況;增殖基因熒光定量PCR檢測;流式細胞術(shù)檢測細胞特異性標記抗原和增殖核抗原的陽性率。結(jié)果(1)北京鴨胚胎NMSCs傳至23代,呈長梭形,具有較強的增殖能力。(2)細胞生長曲線呈典型的“S”型,經(jīng)歷潛伏期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰退期,符合細胞體外生長的一般規(guī)律,細胞的群體倍增時間分別為31.85、35.07、40.98h。(3)RT-PCR檢測NMSCs陽性表達Vimentin、Fibronectin、CD29、CD71、CD44和CD73,陰性表達CD34和CD45,免疫熒光檢測NMSCs陽性表達Vimentin、CD29、CD71和CD44。(4)成功地將NMSCs誘導為脂肪細胞、胰島細胞、肝樣細胞和上皮細胞。(5)普伐他汀作用76 h后細胞呈長梭形,形態(tài)無明顯變化。(6)經(jīng)MTS檢測,與對照組比較,普伐他汀組濃度為0.01、0.1、1μmol?L-1均可促進NMSCs增殖,濃度為0.001μmol?L-1對NMSCs增殖影響較小,10μmol?L-1對NMSCs無促增殖作用。(7)與對照組比較,普伐他汀組濃度為0.001、0.01、0.1μmol?L-1時增殖基因Ki67的相對表達量升高,0.01、0.1、1μmol?L-1時增殖基因PCNA的相對表達量升高,其他濃度組與對照組相比差異不顯著。(8)NMSCs經(jīng)0.1μmol?L-1普伐他汀作用1 w后,細胞表面標記抗原的表達量無明顯差異。Vimentin陽性率對照組為98.51%,實驗組為97.43%;CD44陽性率對照組為97.21%,實驗組為97.78%;細胞增殖核抗原的表達量增加,Ki67陽性率對照組為2.39%,實驗組為12.3%;PCNA陽性率對照組為11.07%,實驗組為26.14%。結(jié)論本研究成功建立了北京鴨胚胎腎間充質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)體系,并對NMSCs自我增殖和多向分化潛能進行鑒定,證實體外培養(yǎng)NMSCs為鴨胚胎腎來源的間充質(zhì)干細胞,與已知的間充質(zhì)干細胞具有相似的生物學特性。普伐他汀對NMSCs作用后不影響其細胞形態(tài)和生物學特性,普伐他汀濃度為0.001~1μmol?L-1時可促進NMSCs增殖,濃度為10μmol?L-1對NMSCs沒有促增殖作用,普伐他汀作用于細胞的研究為臨床用藥提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。
【學位授予單位】：佳木斯大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R96

【參考文獻】

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1 楊寧強;岳中瑾;;腎臟干細胞研究進展[J];國際泌尿系統(tǒng)雜志;2006年04期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉喜紅;胚胎后腎間充質(zhì)細胞移植對急性腎小管壞死再生修復的實驗研究[D];中南大學;2007年

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本文編號：1171836