本文關(guān)鍵詞：鴨腎間充質(zhì)干細(xì)胞建系及普伐他汀對(duì)其增殖的影響

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【摘要】：目的建立北京鴨腎間充質(zhì)干細(xì)胞(Nephric Mesenchymal Stem Cells,NMSCs)的體外培養(yǎng)體系,研究其生物學(xué)特性,探究普伐他汀對(duì)鴨腎間充質(zhì)干細(xì)胞增殖作用的影響。方法(1)NMSCs的分離培養(yǎng):以15日齡北京鴨胚胎腎為研究材料,采用混合酶消化法獲得NMSCs,并進(jìn)行傳代、凍存和復(fù)蘇。(2)NMSCs生物學(xué)特性研究:形態(tài)學(xué)觀察;繪制細(xì)胞生長曲線,計(jì)算群體倍增時(shí)間;特異性表面標(biāo)志物RT-PCR和免疫熒光檢測(cè);多向分化潛能鑒定:將NMSCs定向誘導(dǎo)成脂肪細(xì)胞、胰島細(xì)胞、肝樣細(xì)胞和上皮細(xì)胞,并對(duì)誘導(dǎo)后的細(xì)胞進(jìn)行特異性染色、RT-PCR和免疫熒光鑒定。(3)普伐他汀對(duì)NMSCs增殖作用研究:將細(xì)胞隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,實(shí)驗(yàn)組向培養(yǎng)基中分別加入0.001、0.01、0.1、1、10μmol?L-1五種濃度的普伐他汀,觀察藥物作用后細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化;MTS比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況;增殖基因熒光定量PCR檢測(cè);流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞特異性標(biāo)記抗原和增殖核抗原的陽性率。結(jié)果(1)北京鴨胚胎NMSCs傳至23代,呈長梭形,具有較強(qiáng)的增殖能力。(2)細(xì)胞生長曲線呈典型的“S”型,經(jīng)歷潛伏期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期和衰退期,符合細(xì)胞體外生長的一般規(guī)律,細(xì)胞的群體倍增時(shí)間分別為31.85、35.07、40.98h。(3)RT-PCR檢測(cè)NMSCs陽性表達(dá)Vimentin、Fibronectin、CD29、CD71、CD44和CD73,陰性表達(dá)CD34和CD45,免疫熒光檢測(cè)NMSCs陽性表達(dá)Vimentin、CD29、CD71和CD44。(4)成功地將NMSCs誘導(dǎo)為脂肪細(xì)胞、胰島細(xì)胞、肝樣細(xì)胞和上皮細(xì)胞。(5)普伐他汀作用76 h后細(xì)胞呈長梭形,形態(tài)無明顯變化。(6)經(jīng)MTS檢測(cè),與對(duì)照組比較,普伐他汀組濃度為0.01、0.1、1μmol?L-1均可促進(jìn)NMSCs增殖,濃度為0.001μmol?L-1對(duì)NMSCs增殖影響較小,10μmol?L-1對(duì)NMSCs無促增殖作用。(7)與對(duì)照組比較,普伐他汀組濃度為0.001、0.01、0.1μmol?L-1時(shí)增殖基因Ki67的相對(duì)表達(dá)量升高,0.01、0.1、1μmol?L-1時(shí)增殖基因PCNA的相對(duì)表達(dá)量升高,其他濃度組與對(duì)照組相比差異不顯著。(8)NMSCs經(jīng)0.1μmol?L-1普伐他汀作用1 w后,細(xì)胞表面標(biāo)記抗原的表達(dá)量無明顯差異。Vimentin陽性率對(duì)照組為98.51%,實(shí)驗(yàn)組為97.43%;CD44陽性率對(duì)照組為97.21%,實(shí)驗(yàn)組為97.78%;細(xì)胞增殖核抗原的表達(dá)量增加,Ki67陽性率對(duì)照組為2.39%,實(shí)驗(yàn)組為12.3%;PCNA陽性率對(duì)照組為11.07%,實(shí)驗(yàn)組為26.14%。結(jié)論本研究成功建立了北京鴨胚胎腎間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)體系,并對(duì)NMSCs自我增殖和多向分化潛能進(jìn)行鑒定,證實(shí)體外培養(yǎng)NMSCs為鴨胚胎腎來源的間充質(zhì)干細(xì)胞,與已知的間充質(zhì)干細(xì)胞具有相似的生物學(xué)特性。普伐他汀對(duì)NMSCs作用后不影響其細(xì)胞形態(tài)和生物學(xué)特性,普伐他汀濃度為0.001~1μmol?L-1時(shí)可促進(jìn)NMSCs增殖,濃度為10μmol?L-1對(duì)NMSCs沒有促增殖作用,普伐他汀作用于細(xì)胞的研究為臨床用藥提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：佳木斯大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 楊寧強(qiáng);岳中瑾;;腎臟干細(xì)胞研究進(jìn)展[J];國際泌尿系統(tǒng)雜志;2006年04期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉喜紅;胚胎后腎間充質(zhì)細(xì)胞移植對(duì)急性腎小管壞死再生修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2007年

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本文編號(hào)：1171836