本文關(guān)鍵詞：慢性糖皮質(zhì)激素對小鼠神經(jīng)元NLRP-1炎癥小體激活和損傷的影響及人參皂苷Rg1的調(diào)節(jié)作用

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【摘要】：神經(jīng)炎癥在許多神經(jīng)退行性疾病如阿爾茨海默病和帕金森病等疾病中起著重要的作用,慢性應(yīng)激水平糖皮質(zhì)激素對神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)和功能都具有損傷作用,與阿爾茨海默病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。而慢性糖皮質(zhì)激素是否促進大腦神經(jīng)元發(fā)生神經(jīng)炎癥病變研究較少,本課題的研究可以為治療神經(jīng)退行性疾病提供新的思路和靶點。目的：觀察慢性糖皮質(zhì)激素對雄性小鼠皮層和海馬神經(jīng)元NLRP-1炎癥小體激活及對神經(jīng)元損傷的影響,同時研究人參皂苷Rg1的調(diào)節(jié)作用及其機制。探討慢性糖皮質(zhì)激素對海馬神經(jīng)元損傷的可能機制,以便為神經(jīng)元退行性疾病的防治提供新的思路和靶點,為人參皂苷Rg1對其的保護應(yīng)用提供實驗依據(jù)。方法：1.雄性小鼠分為對照組,地塞米松(DEX) 5mg/kg組,各組再分為7d、14d、21d、28d四個時點。DEX組小鼠頸背部皮下分別注射DEX (5mg/kg) 7d、14d21d和28d,對照組注射等容量生理鹽水。每周稱重觀察小鼠體重的變化情況；曠場實驗記錄小鼠的自發(fā)活動情況;HE染色觀察小鼠皮層和海馬區(qū)神經(jīng)元病理形態(tài)學(xué)變化;Hoechst 33258染色檢測神經(jīng)元凋亡情況;免疫組化檢測MAP-2蛋白表達的變化;Western blot檢測GR、NLRP-1、NLRP3、ASC、Caspase-1、Caspase-5、IL-1β和IL-18蛋白的表達變化;Real-time PCR檢測GR、ASC、NLRP-1、Caspase-1和IL-1β的mRNA的表達變化；ELISA檢測DEX作用于28天小鼠腦組織海馬區(qū)IL-1β, IL-6和TNF-α的含量變化。2.雄性小鼠分為對照組、DEX模型組、RU486組、人參皂苷Rg1(1、2、4mg/kg)組,作用28天。曠場實驗記錄小鼠自發(fā)活動情況；新體識別實驗檢測小鼠的識別記憶功能；HE染色觀察小鼠腦組織神經(jīng)元病理形態(tài)學(xué)變化；免疫組化檢測MAP-2蛋白表達的變化；Western blot檢測GR、NLRP-1、ASC、Caspase-1、Caspase-5、 IL-1β、IL-18蛋白表達的變化。結(jié)果：1.與對照組比較DEX處理7、14、21、28d小鼠體重明顯下降。HE染色結(jié)果顯示正常對照組小鼠皮層和海馬CA1及CA3區(qū)神經(jīng)元染色均勻,排列整齊,未見明顯異常改變,DEX處理7、14d神經(jīng)元出現(xiàn)輕微的異常,而DEX處理21、28d組在皮層和海馬CA1及CA3區(qū)神經(jīng)元可見排列紊亂、嗜酸性變、核濃縮、核深染等異常改變。Hoechst33258核染色實驗結(jié)果顯示,對照組神經(jīng)元細(xì)胞核型完整、圓潤、均勻熒光,DEX處理21、28d組神經(jīng)元凋亡明顯增加,細(xì)胞核呈致密濃染或呈碎塊狀。小鼠曠場實驗顯示,DEX處理21、28d組小鼠運動距離、運動速度、穿線次數(shù)和站立次數(shù)等明顯減少。免疫組化結(jié)果顯示,DEX處理21、28d組小鼠皮層、海馬CA1及CA3區(qū)神經(jīng)元MAP2的蛋白表達明顯下降。Western blot結(jié)果顯示,與對照組比較,DEX處理7、14、21和28d組小鼠腦組織GR受體表達均明顯下降。DEX處理21和28d組小鼠NLRP1、Caspase-1、Caspase-5、ASC、IL-1β、IL-18等表達明顯增加,NLRP3表達無明顯改變。Q-PCR結(jié)果顯示,與對照組比較,DEX處理21和28d組小鼠腦組織GR的mRNA表達水平明顯下降,NLRP1、 Caspase-1、ASC、IL-1β表達水平明顯增加。ELISA結(jié)果顯示,與對照組比較,DEX作用于28d的小鼠腦組織IL-1β、IL-6和TNF-α的表達明顯增加。2.HE染色結(jié)果顯示,對照組小鼠皮層和海馬神經(jīng)元未見明顯異常改變,DEX處理模型組小鼠皮層和海馬神經(jīng)元可見排列紊亂、嗜酸性變、核濃縮等病理變化,RU486及人參皂苷Rgl(2、4mg/kg)組可以改善皮層和海馬神經(jīng)元嗜酸性變和核濃縮、核深染等病理改變。曠場實驗結(jié)果顯示,與對照組比較,模型組小鼠運動距離、運動速度、穿線次數(shù)和站立次數(shù)均有所降低；與模型組比較,RU486組和人參皂苷Rgl(2、4mg)組小鼠運動距離、運動速度、穿越格子數(shù)和站立次數(shù)均明顯增加。新體識別實驗的結(jié)果顯示,與對照組比較,DEX組小鼠進入新事物區(qū)域的次數(shù),在新事物區(qū)域活動時間明顯減少；與DEX組比較,RU486組和Rg1(2、4mg/kg)組小鼠進入新事物區(qū)域的次數(shù)、在新事物區(qū)域活動時間明顯延長。免疫組化結(jié)果顯示,Rgl (2、4mg/mg)組和RU486均可以提高皮層和海馬區(qū)神經(jīng)元MAP2蛋白表達。Western blot結(jié)果顯示,人參皂苷(2、4mg/kg)組和RU486可以上調(diào)腦組織GR蛋白表達以及下調(diào)NLRP1、Caspase-1、Caspase-5、ASC、IL-1β、IL-18等蛋白的表達。結(jié)論：實驗結(jié)果顯示,慢性糖皮質(zhì)激素作用可明顯損害小鼠的自發(fā)活動和探索行為,明顯降低小鼠皮層和海馬神經(jīng)元GR的表達,增加NLRP-1炎癥小體表達和炎癥因子的生成,促進神經(jīng)元的損傷。糖皮質(zhì)激素受體阻斷劑RU486和具有抗氧化作用的人參皂苷Rg1能夠改善小鼠的自發(fā)活動和探索行為,改善小鼠對新事物的探索行為,可以增加小鼠海馬區(qū)腦組織GR的表達,減少NLRP-1炎癥小體的表達和炎癥因子的生成。表明應(yīng)激水平糖皮質(zhì)激素的長期應(yīng)用可以促進皮層和海馬神經(jīng)元NLRP-1炎癥小體激活誘導(dǎo)神經(jīng)元損傷,人參皂苷Rg1可以通過抑制NLRP-1炎癥小體的激活改善糖皮質(zhì)激素長期作用引起的神經(jīng)元炎癥損傷。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R965

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本文編號：1148045