本文關(guān)鍵詞：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)降解通路小分子抑制劑對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用以及腫瘤干細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激調(diào)控機(jī)制研究

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【摘要】：目的探究?jī)?nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)降解通路(Endoplasmic Reticulum-Associated Degradation, ERAD)小分子抑制劑Eeyarestatinl (Eerl)與傳統(tǒng)抗癌藥物聯(lián)合運(yùn)用對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用。方法不同劑量的Eerl處理結(jié)腸癌SW480和胰腺癌PANC-1細(xì)胞,MTS法檢測(cè)細(xì)胞增殖,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；Eerl單獨(dú)或與抗癌藥物順鉑(cisplatin, CDDP)和硼替佐米(Bortezomib, BTZ)聯(lián)用處理SW480和PANC-1細(xì)胞,Western blot法檢測(cè)細(xì)胞中Poly ADP-ribose polymerase (PARP)及其剪切體和糖調(diào)節(jié)蛋白(GRP78/BiP)的蛋白表達(dá)。結(jié)果Eerl抑制SW480和PANC-1細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡(P0.01),且呈劑量-效應(yīng)關(guān)系；聯(lián)合用藥的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Eerl提高了SW480和PANC-1細(xì)胞對(duì)CDDP和BTZ的敏感性(P0.01)；Western blot結(jié)果表明,聯(lián)合用藥促進(jìn)了PARP在SW480和PANC-1細(xì)胞中的剪切,同時(shí)BTZ處理可提高BiP蛋白的表達(dá),提示了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(Endoplasmic Reticulum stress, ERS)反應(yīng)的激活。結(jié)論ERAD通路抑制劑Eerl可明顯增強(qiáng)傳統(tǒng)抗癌藥物CDDP和BTZ的抗癌活性,這為抗癌新藥研發(fā)及腫瘤耐藥性逆轉(zhuǎn)劑的研究提供了新的線索。目的建立以成球培養(yǎng)法為主的體外富集人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231腫瘤干細(xì)胞(Breast cancer stem cell, BCSC)的方法,并運(yùn)用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)(endoplasmic reticulum stress, ERS)誘導(dǎo)劑處理腫瘤干細(xì)胞,探究其內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)的變化以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)對(duì)干性的影響并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步探索。方法采用無(wú)血清低吸附板培養(yǎng)MDA-MB-231細(xì)胞,獲得細(xì)胞球,裸鼠實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其體內(nèi)成瘤能力,RT-PCR, Western Blot檢測(cè)其干性標(biāo)志物及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)標(biāo)志物在mRNA和蛋白水平的表達(dá)；將內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)劑Tunicamycin和Thapsigargin加入成球培養(yǎng)基,檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)成球的影響以及干性標(biāo)志在RNA和蛋白水平的變化；結(jié)晶紫試驗(yàn)檢測(cè)Tunicamycin和thapsigargin對(duì)2D成克隆能力的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢鋇Tunicamycin對(duì)貼壁培養(yǎng)的MDA-MB-231細(xì)胞ALDH+細(xì)胞側(cè)群的影響；Western Blot檢測(cè)不同程度的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)與干性相關(guān)的蛋白質(zhì)如Skp2等的影響。結(jié)果體外無(wú)血清培養(yǎng),一周可獲得較大的乳腺癌細(xì)胞球,其高表達(dá)Sox2、Nanog、 Oct4等干性標(biāo)志物,具有高致瘤性；與貼壁細(xì)胞相比,細(xì)胞球有明顯的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng),呈現(xiàn)XBP-1剪切、GRP78、CHOP、ATF4顯著高表達(dá)；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)可明顯減弱成球能力和2D成克隆能力并下調(diào)ALDH+細(xì)胞側(cè)群和與干性相關(guān)蛋白質(zhì)如Sox2表達(dá)。結(jié)論成球培養(yǎng)法可成功富集到乳腺癌干細(xì)胞；乳腺癌干細(xì)胞有顯著的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激;誘導(dǎo)乳腺癌干細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可降低其干性。
【關(guān)鍵詞】：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白降解通路 ERS反應(yīng) p97化療治療 腫瘤干細(xì)胞 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 衣霉素
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)4-5
• 導(dǎo)語(yǔ)5-6
• 第一部分 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)降解通路小分子抑制劑與傳統(tǒng)抗癌藥物聯(lián)合運(yùn)用對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用6-33
• 中文摘要7-8
• 英文摘要8-9
• 第一章 前言9-12
• 第二章 材料與方法12-19
• 第三章 結(jié)果19-27
• 第四章 討論27-29
• 第五章 結(jié)論29-30
• 參考文獻(xiàn)30-33
• 第二部分 探索腫瘤干細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)33-67
• 中文摘要34-35
• 英文摘要35-36
• 第一章 前言36-40
• 第二章 材料與方法40-49
• 第三章 結(jié)果49-59
• 第四章 討論59-61
• 第五章 結(jié)論61-62
• 參考文獻(xiàn)62-67
• 綜述67-75
• 參考文獻(xiàn)72-75
• 致謝75-78
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷78

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