本文關(guān)鍵詞：新藤黃酸mPEG化脂質(zhì)體的制備、大鼠體內(nèi)藥動學(xué)參數(shù)及體外抑制HepG2細胞活性研究

  更多相關(guān)文章： 新藤黃酸 聚乙二醇單甲醚2000-大豆磷脂酰乙醇胺 脂質(zhì)體 HepG2細胞

【摘要】：目的:在建立一種可靠的新藤黃酸體內(nèi)體外分析方法的基礎(chǔ)上,以生物相容性好的氫化大豆卵磷脂、膽固醇為基本骨架材料,以實驗室自制的聚乙二醇單甲醚2000-大豆磷脂酰乙醇胺(mPEG2000-PE)為磷脂膜修飾劑,制備并評價mPEG2000化的新藤黃酸長循環(huán)脂質(zhì)體,以期改善新藤黃酸水溶性、刺激性和延長在體循環(huán)時間。并對脂質(zhì)體作為抗腫瘤藥物載體的可靠性進行了初步評價。方法:(1)將聚乙二醇單甲醚2000端羥基進行酰氯化處理后,再利用其酰氯基團與磷脂酰乙醇胺氨基的取代反應(yīng),制備mPEG-PE,而后采用紅外光譜和核磁共振氫譜對產(chǎn)物進行表征測試;(2)以溶劑揮發(fā)法制備mPEG-GNA-L,并通過形態(tài)、平均粒徑、包封率、穩(wěn)定性、體外釋放和溶血性等進行載體質(zhì)量的基本評價;(3)以SD大鼠作為動物模型,采取尾靜脈單次注射給藥的方式,比較GNA原料藥和mPEG-GNA-L的基本藥動學(xué)參數(shù);(4)以HepG2細胞作為模型,研究mPEG-GNA-L的初步抑瘤效果。結(jié)果:(1)紅外光譜的特征吸收和核磁共振氫譜中氫原子的化學(xué)位移值共同表明本研究合成了mPEG-PE,其中,酰氯化的聚乙二醇單甲醚2000(mPEG-COCl)的產(chǎn)率為71%;終產(chǎn)物mPEG-PE的產(chǎn)率為73%。(2)mPEG-GNA-L最優(yōu)工藝處方的包封率為(83.74±1.136)%;在透射電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)所得的脂質(zhì)體為規(guī)則的球形,表明光滑無粘連,mPEG-GNA-L的平均粒徑為(121.1±1.07)nm,PDI值為(0.192±0.01),說明此方法制備的脂質(zhì)體粒徑較小且分布均勻,Zeta電位為(-43.3±0.42)mV;物理穩(wěn)定性考察的結(jié)果表明:本研究制備的脂質(zhì)體在室溫和4℃下放置2個月,粒徑、包封率和外觀狀態(tài)保持基本穩(wěn)定;體外釋放研究顯示:mPEG-GNA-L具有緩慢、持續(xù)釋放藥物的特質(zhì),符合一級動力學(xué)方程;溶血性實驗表明:本研究制備的mPEG化脂質(zhì)體在總脂質(zhì)濃度為6.20 mg/mL時,在藥典的指導(dǎo)下設(shè)計的各組實驗均未發(fā)生溶血現(xiàn)象。(3)在動物實驗中,單次尾靜脈給予mPEG-GNA-L組,藥物的在體循環(huán)時間明顯延長,GNA和mPEG-GNA-L的t1/2α分別為1.583min和4.239 min,t1/2β分別為16.37 min和67.897min;Cmax分別為3.872mg/L和10.176 mg/L;MRT0-τ分別為12.67 min和31.567 min,MRT0-∞分別為14.16 min和41.475 min;AUC0-τ分別為49.965 mg/L·min和176.349mg/L·min,AUC0-∞分別為67.442 mg/L·min和232.523 mg/L·min。(4)MTT結(jié)果表明:空白的mPEG化脂質(zhì)體無顯著毒性,與GNA原料藥相比,mPEG-GNA-L抑制腫瘤細胞HepG2細胞增殖效果稍強,IC50值分別為13.142μg/mL和10.758μg/mL,兩組無顯著性差別。結(jié)論:綜上所述,本研究制備了一種各項指標基本符合2015版藥典要求,具有一定緩釋功能,在體內(nèi)的半衰期有所延長且具有較強的體外抗腫瘤活性的mPEG化新藤黃酸脂質(zhì)體,表明該納米載體具有一定的開發(fā)價值。
【關(guān)鍵詞】：新藤黃酸 聚乙二醇單甲醚2000-大豆磷脂酰乙醇胺 脂質(zhì)體 HepG2細胞
【學(xué)位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R943;R96
【目錄】：

• 中文摘要9-11
• Abstract11-13
• 英文縮略詞表13-15
• 前言15-20
• 1 新藤黃酸的研究現(xiàn)狀15
• 2 PEG化新藤黃酸脂質(zhì)體15-19
• 2.1 PEG化脂質(zhì)體簡介15-17
• 2.2 PEG化新藤黃酸脂質(zhì)體制備方法17
• 2.3 PEG化新藤黃酸脂質(zhì)體17-18
• 2.4 體外釋放研究18-19
• 2.5 作為抗腫瘤藥物載體的研究19
• 3 課題基本設(shè)計思路19-20
• 第一章 聚乙二醇單甲醚 2000-大豆磷脂酰乙醇胺的制備與表征20-25
• 1 儀器與材料20-21
• 1.1 主要儀器20-21
• 1.2 試藥21
• 2 實驗方法與結(jié)果21-24
• 2.1 聚乙二醇單甲醚 2000-大豆磷脂酰乙醇胺的制備21-22
• 2.1.1 大豆卵磷脂中游離脂肪酸的去除21
• 2.1.2 大豆磷脂中卵磷脂的去除21-22
• 2.1.3 酰氯化的聚乙二醇單甲醚2000的制備22
• 2.1.4 聚乙二醇單甲醚 2000-大豆磷脂酰乙醇胺的制備22
• 2.2 聚乙二醇單甲醚 2000-大豆磷脂酰乙醇胺的的表征22-24
• 2.2.1 紅外光譜測試及結(jié)果分析22-23
• 2.2.2 核磁氫譜測試與結(jié)果分析23-24
• 3.討論24
• 4.本章小結(jié)24-25
• 第二章 mPEG化新藤黃酸脂質(zhì)體的處方前研究25-33
• 1 儀器和材料25-26
• 1.1 主要儀器25-26
• 1.2 試藥26
• 2 方法與結(jié)果26-32
• 2.1 新藤黃酸理化性質(zhì)26
• 2.2 新藤黃酸體外分析方法的建立26-30
• 2.2.1 標準儲備溶液的制備26
• 2.2.2 色譜條件26-27
• 2.2.3 專屬性考察27
• 2.2.4 標準曲線的建立27-28
• 2.2.5 精密度試驗28-29
• 2.2.6 重復(fù)性試驗29
• 2.2.7 回收率試驗29-30
• 2.3 mPEG化新藤黃酸脂質(zhì)體包封率方法學(xué)建立30-32
• 2.3.1 微柱對空白mPEG化脂質(zhì)體吸附率考察30-31
• 2.3.2 微柱洗脫曲線繪制31
• 2.3.3 包封率及載藥量的測定31-32
• 3 討論32
• 4 本章小結(jié)32-33
• 第三章 mPEG-GNA-L的制備工藝及處方研究33-45
• 1 儀器與材料33-34
• 1.1 主要儀器33-34
• 1.2 試藥34
• 2 方法與結(jié)果34-44
• 2.1 mPEG-GNA-L制備方法的選擇34
• 2.2 有機溶劑的種類選擇34-35
• 2.3 單因素考察mPEG-GNA-L的處方與工藝35-41
• 2.3.1 制備溫度的選擇35-36
• 2.3.2 制備時間的選擇36
• 2.3.3 攪拌速度的選擇36-37
• 2.3.4 磷脂種類的選擇37
• 2.3.5 磷脂用量的選擇37-38
• 2.3.6 卵磷脂和膽固醇的比例選擇38-39
• 2.3.7 有機相/水相的比例39
• 2.3.8 投藥量的選擇39-40
• 2.3.9 卵磷脂和mPEG-PE的比例40
• 2.3.10水相的類型40-41
• 2.4 正交設(shè)計優(yōu)化mPEG-GNA-L的處方41-44
• 2.4.1 實驗因素與水平的確定及正交表的排列41-43
• 2.4.2 最佳處方工藝的驗證43-44
• 3 討論44
• 4 本章小結(jié)44-45
• 第四章 mPEG-GNA-L的質(zhì)量評價45-57
• 1 儀器與材料45-46
• 1.1 主要儀器45
• 1.2 試藥45-46
• 2 方法與結(jié)果46-55
• 2.1 外觀考察46
• 2.2 形態(tài)學(xué)考察46
• 2.3 粒徑分布與Zeta電位46-47
• 2.4 放置穩(wěn)定性考察47-48
• 2.5 體外釋放研究48-53
• 2.5.1 色譜條件48
• 2.5.2 釋放介質(zhì)的選擇48-49
• 2.5.3 標準曲線的建立49
• 2.5.4 精密度試驗49-50
• 2.5.5 加樣回收率試驗50
• 2.5.6 體外釋放性研究50-52
• 2.5.7 體外釋放模型擬合52-53
• 2.6 溶血性研究53-55
• 2.6.1 紅細胞混懸液的制備53
• 2.6.2 試驗安排53-55
• 3 討論55
• 4 本章小結(jié)55-57
• 第五章 mPEG-GNA-L在大鼠體內(nèi)單次給藥血藥濃度研究57-71
• 第一節(jié) GNA生物樣品分析方法的確立57-66
• 1 儀器與材料57-58
• 1.1 儀器57
• 1.2 材料57-58
• 1.3 生物樣品來源58
• 2 方法與結(jié)果58-65
• 2.1 血漿樣品中GNA含量測定方法58-65
• 2.1.1 血漿樣品處理58
• 2.1.2 色譜條件58
• 2.1.3 方法專屬性考察58-59
• 2.1.4 標準曲線的建立59-60
• 2.1.5 定量下限（LLOQ）60
• 2.1.6 精密度試驗60-61
• 2.1.7 提取回收率61-62
• 2.1.8 GNA血漿樣品穩(wěn)定性試驗62-65
• 3.討論65-66
• 第二節(jié) mPEG-GNA-L在大鼠體內(nèi)血藥濃度研究66-71
• 1 儀器與材料66-67
• 1.1 儀器66
• 1.2 材料66-67
• 1.3 生物樣品來源67
• 2.方法與結(jié)果67-70
• 2.1 SD大鼠血漿樣品的隨行標曲制備及評價67-68
• 2.1.1 GNA和MA標準溶液的配制67
• 2.1.2 血漿中GNA隨行標曲的制備67-68
• 2.2 血漿中藥動學(xué)參數(shù)研究68-70
• 2.2.1 給藥劑量68
• 2.2.2 溶液的配制68
• 2.2.3 分組及給藥方案68
• 2.2.4 樣品處理與分析68
• 2.2.5 單次給藥GNA及mPEG-GNA-L在大鼠體內(nèi)的血藥濃度結(jié)果68-70
• 3 討論70
• 4 本章小結(jié)70-71
• 第六章 GNA及mPEG-GNA-L體外抑制Hep G2細胞作用研究71-77
• 1 儀器與材料71-72
• 1.1 主要儀器71-72
• 1.2 試藥72
• 1.3 細胞72
• 2 方法與結(jié)果72-75
• 2.1 細胞培養(yǎng)常用試劑配制72-73
• 2.2 受試藥物的配制73
• 2.3 細胞培養(yǎng)73
• 2.4 MTT試驗73-75
• 3 討論75-76
• 4 本章小結(jié)76-77
• 全文總結(jié)77-79
• 參考文獻79-84
• 綜述84-93
• 參考文獻90-93
• 作者簡介93-94
• 攻讀碩士期間發(fā)表論文及參與基金94-95
• 致謝95

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