本文關(guān)鍵詞：阿司匹林對小鼠前成骨細(xì)胞增殖、分化、礦化的影響及可能作用機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 骨質(zhì)疏松 阿司匹林 成骨細(xì)胞 細(xì)胞核因子受體活化因子配體 骨保護(hù)素

【摘要】：背景:骨質(zhì)疏松癥是以骨密度減少、骨顯微結(jié)構(gòu)改變、骨骼脆性增加、易發(fā)生骨折為特征的慢性疾病,以絕經(jīng)后女性及老年男性發(fā)病率較高,至今為止關(guān)于骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病機(jī)制仍不甚清楚。阿司匹林作為解熱鎮(zhèn)痛藥及抗血小板藥物廣泛用于臨床,近年來多項(xiàng)研究提示阿司匹林具有抗骨質(zhì)疏松作用,然而具體機(jī)制尚不明確。OPG/RANKL/RANK信號通路因其在成骨細(xì)胞-破骨細(xì)胞偶聯(lián)中處于重要地位,被認(rèn)為是骨質(zhì)疏松發(fā)病過程中的重要環(huán)節(jié)。目的:研究阿司匹林對小鼠前成骨細(xì)胞MC3T3的增殖、分化及礦化的影響,探討阿司匹林通過OPG/RANKL/RANK信號通路影響小鼠前成骨細(xì)胞的可能作用機(jī)制。方法:以小鼠前成骨細(xì)胞MC3T3為實(shí)驗(yàn)對象,分別以不同濃度(0、0.25、0.5、1、1.5、2、5、10mmol/L)的阿司匹林誘導(dǎo)液進(jìn)行培養(yǎng):1、通過MTT實(shí)驗(yàn)檢測不同濃度阿司匹林對MC3T3細(xì)胞增殖的影響;2、通過堿性磷酸酶染色及定量分析,檢測不同濃度阿司匹林的促成骨分化作用;3、通過茜素紅鈣結(jié)節(jié)染色,檢測不同濃度阿司匹林的促礦化作用;4、通過蛋白印跡及實(shí)時(shí)PCR技術(shù),探究阿司匹林作用于MC3T3細(xì)胞的可能機(jī)制。結(jié)果:1、MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示低濃度阿司匹林藥物組(0.25、0.5、1、1.5、2mmol/L)OD值較對照組無差異(P0.05),中高濃度阿司匹林組(5-10mmol/L)OD值較對照組明顯減低(P0.01);2、堿性磷酸酶染色結(jié)果示1.5mmol/L阿司匹林藥物組堿性磷酸酶陽性顆粒較其他實(shí)驗(yàn)組最為顯著;3、堿性磷酸酶定量分析結(jié)果示在第7、10、14天各濃度阿司匹林藥物組(0.5、1、1.5、2、3mmol/L)堿性磷酸酶含量均較對照組均明顯升高(P0.01),其中以1.5mmol/L阿司匹林組最顯著(P0.01);4、茜素紅染色結(jié)果示各濃度阿司匹林藥物組(0.5、1、1.5、2、3mmol/L)鈣結(jié)節(jié)數(shù)量及面積均較對照組增多,其中以1.5mmol/L阿司匹林組增多最為顯著;5、蛋白印跡結(jié)果示1.5mmol/L阿司匹林組OPG蛋白及Col1a蛋白表達(dá)較對照組顯著增加(P0.01),RANKL蛋白表達(dá)較對照組顯著減少(P0.01)。6、實(shí)時(shí)PCR檢測結(jié)果提示1.5mmol/L阿司匹林組OPGmRNA表達(dá)升高、RANKLmRNA表達(dá)減低最為顯著(P0.01)。結(jié)論:1、提示低濃度阿司匹林對MC3T3細(xì)胞增殖無影響,中高濃度阿司匹林對MC3T3細(xì)胞增殖起抑制作用;2、1.5mmol/L阿司匹林組促成骨、促礦化作用較其他濃度藥物組及對照組最顯著;3、阿司匹林作用OPG/RANKL/RANK信號通路,通過刺激OPG表達(dá)并抑制RANKL表達(dá)起到促成骨作用。
【關(guān)鍵詞】：骨質(zhì)疏松 阿司匹林 成骨細(xì)胞 細(xì)胞核因子受體活化因子配體 骨保護(hù)素
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R965
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文縮略詞表10-11
• 第1章 引言11-20
• 1.1 骨質(zhì)疏松癥概況11-13
• 1.1.1 骨質(zhì)疏松癥的定義11
• 1.1.2 骨質(zhì)疏松癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)及臨床表現(xiàn)11
• 1.1.3 世界范圍內(nèi)骨質(zhì)疏松癥的流行病學(xué)及骨松骨折11-12
• 1.1.4 我國骨質(zhì)疏松癥的流行病學(xué)及骨松骨折12-13
• 1.2 骨質(zhì)疏松癥的治療13-16
• 1.2.1 促進(jìn)骨形成的藥物13-14
• 1.2.2 抑制骨吸收的藥物14-16
• 1.3 骨質(zhì)疏松癥涉及的信號通道16-17
• 1.3.1 OPG/RANKL/RANK信號通路16
• 1.3.2 Wnt/β-catenin信號通路16-17
• 1.3.3 組織蛋白酶K信號通路17
• 1.3.4 骨形態(tài)蛋白信號通路17
• 1.4 阿司匹林概況17-19
• 1.4.1 阿司匹林的起源17-18
• 1.4.2 阿司匹林在臨床中的運(yùn)用18-19
• 1.5 阿司匹林與骨質(zhì)疏松之間的關(guān)系19-20
• 第2章 阿司匹林對小鼠前成骨細(xì)胞增殖及成骨分化的影響20-35
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料20-21
• 2.1.1 主要材料20
• 2.1.2 主要試劑20
• 2.1.3 主要儀器20-21
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法21-25
• 2.2.1 小鼠前成骨細(xì)胞的培養(yǎng)21-22
• 2.2.2 誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配制22
• 2.2.3 小鼠前成骨細(xì)胞的成骨誘導(dǎo)22
• 2.2.4 阿司匹林+誘導(dǎo)培養(yǎng)基配制22
• 2.2.5 小鼠前成骨細(xì)胞的誘導(dǎo)后加藥處理22-23
• 2.2.6 MTT增殖實(shí)驗(yàn)23-24
• 2.2.7 堿性磷酸酶染色24
• 2.2.8 堿性磷酸酶活性測定24-25
• 2.2.9 鈣結(jié)節(jié)染色25
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析25-26
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-31
• 2.4.1 MTT細(xì)胞增殖曲線26-27
• 2.4.2 堿性磷酸酶染色27-28
• 2.4.3 堿性磷酸酶活性測定28-30
• 2.4.4 鈣結(jié)節(jié)染色30-31
• 2.5 討論31-35
• 第3章 阿司匹林對小鼠成骨細(xì)胞OPG/RANKL/RANK基因蛋白及mRNA的表達(dá)影響35-47
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料35-37
• 3.1.1 主要材料35
• 3.1.2 主要試劑35-36
• 3.1.3 主要儀器36-37
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法37-41
• 3.2.1 分組方法37
• 3.2.2Western Blot檢測蛋白的表達(dá)37-39
• 3.2.3 RT-PCR(Real Time PCR)檢測RNA的表達(dá)39-41
• 3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析41
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-45
• 3.4.1 Western Blot檢測蛋白的表達(dá)41-44
• 3.4.2 RT-PCR測定成骨細(xì)胞基因表達(dá)44-45
• 3.5 討論45-47
• 第4章 結(jié)論與展望47-48
• 4.1 結(jié)論47
• 4.2 展望47-48
• 致謝48-49
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果52-53
• 綜述53-67
• 參考文獻(xiàn)63-67

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1087449