本文關(guān)鍵詞：新型抗菌肽對口腔細(xì)菌及其生物膜的抑制作用和應(yīng)用研究

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【摘要】：當(dāng)今世界齲齒和牙周病已經(jīng)成為威脅人類口腔健康的一大殺手。而研究發(fā)現(xiàn)口腔微生態(tài)的失衡會導(dǎo)致變形鏈球菌等口腔致病菌的過度生長,進而引發(fā)各種口腔疾病的出現(xiàn)。另外這些條件致病菌,如變形鏈球菌、遠(yuǎn)緣鏈球菌、牙齦卟啉單胞菌等在自身的代謝過程中會分泌胞外多糖等物質(zhì),在牙齒表面形成一種薄膜,隨后其他細(xì)菌附著或進入其中,生物膜和細(xì)菌不斷加厚增多,形成牙菌斑。而牙菌斑被稱為口腔疾病的“始動因子”。所以我們想要預(yù)防和治療口腔疾病,不僅要殺滅口腔中的致病菌,而且還要可以抑制牙菌斑生物膜的形成及發(fā)展。我們通過測定最低抑菌濃度(MIC),檢測了來源于蝎子毒液的抗菌肽ZXR-2對口腔細(xì)菌的生物活性。實驗結(jié)果顯示ZXR-2具有廣譜的抗菌活性,既能作用于革蘭氏陽性細(xì)菌,又可以殺死革蘭氏陰性細(xì)菌,特別是對大腸桿菌的MIC值為4μM,比青霉素低約90倍。我們還通過時間-致死曲線觀察了ZXR-2對變形鏈球菌、遠(yuǎn)緣鏈球菌、牙齦卟啉單胞菌在各自最低抑制濃度四倍的狀態(tài)下的致死速度,發(fā)現(xiàn)ZXR-2可以快速有效的將這些細(xì)菌殺滅,四倍MIC值下5 min內(nèi)可以殺死大部分測試菌種。接著使用掃描電鏡觀察了ZXR-2作用下細(xì)菌細(xì)胞膜的凹陷破碎等情況。ZXR-2對哺乳動物紅細(xì)胞具有較低的溶血特性,8-16μM濃度下作用3 h,約有15%左右的紅細(xì)胞溶血。我們在變形鏈球菌初期形成生物膜的過程中加入一系列濃度的ZXR-2,研究ZXR-2對其形成過程產(chǎn)生的影響。同時也探索了ZXR-2對變形鏈球菌成熟生物膜發(fā)展過程的影響。結(jié)果顯示ZXR-2能夠有效的抑制變形鏈球菌初期生物膜的形成,同時對其后期的發(fā)展也有一定的抑制作用。綜合比較ZXR-2的抗菌活性、殺菌速度、溶血性及對變形鏈球菌初后期生物膜發(fā)展的抑制作用,我們覺得ZXR-2具有一定的市場應(yīng)用前景,有希望出現(xiàn)在預(yù)防及治療口腔疾病的各種產(chǎn)品中。
【關(guān)鍵詞】：抗菌多肽 變形鏈球菌 齲齒 牙周病 生物膜
【學(xué)位授予單位】：北京化工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-15
• 第一章 緒論15-27
• 1.1 口腔微生態(tài)15-16
• 1.2 口腔中常見的細(xì)菌感染疾病16
• 1.3 菌斑生物膜16-18
• 1.3.1 菌斑生物膜的形成過程16-17
• 1.3.2 菌斑生物膜結(jié)構(gòu)17-18
• 1.3.3 菌斑生物膜研究進展18
• 1.4 抗菌肽18-26
• 1.4.1 抗菌肽的分類19-20
• 1.4.2 抗菌肽的作用機制20-23
• 1.4.2.1 與細(xì)菌細(xì)胞壁的作用20
• 1.4.2.2 與細(xì)菌細(xì)胞膜的作用20-22
• 1.4.2.3 與細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)靶目標(biāo)的作用22-23
• 1.4.3 抗菌肽的合成方法23-24
• 1.4.3.1 生物合成法23
• 1.4.3.2 化學(xué)合成法23-24
• 1.4.4 抗菌肽的細(xì)菌活性分析24
• 1.4.5 抗菌肽的作用機理24-25
• 1.4.6 抗菌肽作用于牙菌斑生物膜25
• 1.4.7 抗菌肽的細(xì)胞溶血性作用研究25-26
• 1.5 論文選題意義及目的26-27
• 第二章 實驗部分27-41
• 2.1 實驗儀器及材料27-29
• 2.1.1 實驗儀器27-28
• 2.1.2 實驗藥品28-29
• 2.2 實驗方法29-41
• 2.2.1 菌種的培養(yǎng)29-30
• 2.2.2 多肽的合成和純化30-33
• 2.2.2.1 多肽合成步驟30-31
• 2.2.2.2 多肽從樹脂上切除31
• 2.2.2.3 鑒定純化抗菌肽31-33
• 2.2.3 最低抑菌濃度實驗33
• 2.2.4 時間-致死曲線33-34
• 2.2.5 殺菌機制分析34-35
• 2.2.6 抗菌肽對變形鏈球菌的粘附性分析35
• 2.2.7 結(jié)晶紫定量法檢測抗菌肽對變形鏈球菌生物膜的影響35-36
• 2.2.7.1 對變形鏈球菌生物膜形成過程的影響35-36
• 2.2.7.2 對變形鏈球菌成熟生物膜的影響36
• 2.2.8 變形鏈球菌成熟生物膜的圖像觀察36-37
• 2.2.9 溶血性分析37
• 2.2.10 漱口水中的應(yīng)用37-41
• 2.2.10.1 簡易漱口水配制37-39
• 2.2.10.2 漱口水效果檢測39-41
• 第三章 實驗結(jié)果與討論41-63
• 3.1 抗菌肽的合成與純化41-45
• 3.1.1 抗菌肽的合成41
• 3.1.2 抗菌肽的分析純化41-42
• 3.1.3 抗菌肽分子量的鑒定42-44
• 3.1.4 抗菌肽的大量制備44
• 3.1.5 抗菌肽制備產(chǎn)物的純度分析44-45
• 3.2 抗菌肽的抗菌活性分析45-49
• 3.2.1 最低抑菌濃度實驗45-48
• 3.2.2 時間-致死曲線48-49
• 3.3 抗菌肽的作用機制49-50
• 3.4 抗菌肽對變形鏈球菌生物膜的影響50-57
• 3.4.1 抗菌肽對變形鏈球菌粘附性影響50-51
• 3.4.2 抗菌肽對變形鏈球菌生物膜形成過程的影響51-53
• 3.4.3 抗菌肽對變形鏈球菌成熟生物膜的影響53-57
• 3.4.3.1 結(jié)晶紫定量法53-55
• 3.4.3.2 變形鏈球菌生物膜圖像觀察55-57
• 3.5 抗菌肽的溶血性分析57-58
• 3.6 簡易漱口水58-63
• 3.6.1 抑菌圈實驗結(jié)果58-60
• 3.6.2 企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)檢測60-63
• 第四章 結(jié)論與展望63-65
• 參考文獻(xiàn)65-69
• 附錄69-71
• 致謝71-73
• 研究成果及發(fā)表論文73-75
• 作者和導(dǎo)師介紹75-76
• 附件76-77

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2 霍麗s，

本文編號：1069875