本文關(guān)鍵詞：肝癌患者肝臟中乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶活性變化

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【摘要】：肝癌(Liver cancer)是嚴(yán)重危害全人類生命健康的重大疾病之一,每年全世界新患肝癌人數(shù)為62.6萬人,其中我國占55%。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計肝癌已成為我國僅次于胃癌及食道癌的消化系統(tǒng)的惡性腫瘤。肝炎-肝硬化-肝癌,這一肝癌的多階段發(fā)生發(fā)展模式己得到病理學(xué)及臨床多方面的支持。肝硬化病人經(jīng)過一定的時間可發(fā)展成肝癌。目前認(rèn)為肝癌的發(fā)病是個多因素、多步驟的復(fù)雜過程,受遺傳和環(huán)境的雙重因素影響,其中乙醇和乙肝病毒同為導(dǎo)致肝癌的重要因素。乙醛對動物有致癌性,它與人類腫瘤也有關(guān)聯(lián)。乙醛在體內(nèi)有效劑量和作用時間長短除與飲酒量和飲酒頻率相關(guān)外,主要與其代謝酶ADH和ALDH的代謝能力高低有關(guān)。乙醇脫氫酶(alcohol dehydrogenases,ADHs)和乙醛脫氫酶(aldehyde dehydrogenases,ALDHs)是體內(nèi)參與乙醇代謝的最重要的酶類。乙醇先經(jīng)ADH代謝為乙醛,乙醛進(jìn)一步經(jīng)ALDH代謝為乙酸。肝臟是乙醇代謝的最重要的器官,乙醇經(jīng)胃和腸道吸收的乙醇經(jīng)靜脈進(jìn)入剛臟,有80%~90%的乙醇在肝臟代謝。ADH和ALDH酶活性體內(nèi)外均顯示明顯的個體差異。且有文獻(xiàn)報道癌組織和正常組織兩種酶的活性差異,如胰腺癌、食道癌[4]。本研究擬以肝癌病人癌旁組織和正常的人肝標(biāo)本為研究對象,考察兩種肝組織總ADH、ADHI、ADHII及總ALDH、ALDH2酶活性差異及相關(guān)基因多態(tài)性對代謝酶活性的影響,以期找到肝癌的發(fā)病機制。方法1人肝標(biāo)本收集正常人肝標(biāo)本74例(主要為肝血管瘤患者),年齡20~75歲(中位數(shù)為49歲)。男性和女性分別為25例和49例,有吸煙史和飲酒史的分別為8例和7例。肝癌癌旁組織68例,年齡29~75歲(中位數(shù)為52歲)。男性和女性分別為10例和58例,有吸煙史和飲酒史的分別為30例和22例。本試驗方案經(jīng)鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn),受試者簽署知情同意書。2 ADH和ALDH的基因分型采用DNA提取試劑盒從肝組織中提取基因組DNA。其中ADH1B rs1229984(GA)及ADH1Crs698(AG)是通過PCR-RFLP方式確定其基因型。ADH1C rs2241894(AG)、ALDH2 rs671(AG)及ALDH2 rs13306164(CT)是Mass ARRAY分子量陣列技術(shù)(Sequenom Mass ARRAY)確定受試者的基因型。3人肝勻漿的制備采用離心法制備人肝勻漿,Bradford法測定肝微粒體蛋白含量。4總ADH、ADHI、ADHII及總ALDH、ALDH2酶活性的測定分別以亞硝基二甲基苯胺(p-nitrosodimethylaniline,NDMA),4-甲氧基-1-萘甲醛(4-methoxy-1-naphthaldehyde),6-甲氧基-2-萘甲醛(4-methoxy-2-naphthaldehyde),6-甲氧基-2-萘甲酸,乙醛為總ADH、ADHI、ADHII,總ALDH、ALDH2的底物,加入相應(yīng)的輔酶(NAD或NADH),肝勻漿上清,緩沖液,通過熒光或紫外的方法在一定波長下檢測相應(yīng)物質(zhì)的吸收。通過計算單位時間內(nèi)吸光值的變化值,并除以相應(yīng)的蛋白濃度即可得到轉(zhuǎn)化率的值。5統(tǒng)計方法采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對各項數(shù)據(jù)資料進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。酶活性數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗,對于非正態(tài)分布的,采取非參數(shù)檢驗進(jìn)行相關(guān)分析。檢驗水準(zhǔn)α為0.05。結(jié)果1肝勻漿上清總蛋白含量肝癌癌旁組織肝勻漿上清的總蛋白含量中位數(shù)和范圍分別為81.68(45.04-107.60)mg/g liver,而正常肝臟組為89.04(40.48-114.08)mg/g liver,肝癌癌旁組織肝勻漿上清的總蛋白含量顯著低于正常肝組織。2酶活性2.1正常肝標(biāo)本總ADH、ADHI、ADHII及總ALDH、ALDH2酶活性正態(tài)性檢驗結(jié)果表明,人肝勻漿總ADH、ADHI、ADHII及總ALDH、ALDH2酶活性參數(shù)呈非正態(tài)分布,因此本實驗采用非參數(shù)檢驗進(jìn)行統(tǒng)計分析。74例人肝人肝勻漿總ADH、ADHI、ADHII及總ALDH、ALDH2酶活性中位數(shù)和范圍分別為1.81(0.16~72.12)、0.44(0.09~1.26)、0.18(0.03~0.53)、0.12(0.01~0.31)、9.21(0.85~18.35)pmol·min-1·mg-1protein;差異倍數(shù)分別為447.9、14.4、16.0、21.0、21.6倍。結(jié)果顯示,總ADH、ADHI、ADHII及總ALDH、ALDH2酶活性呈現(xiàn)出較大的個體差異性。2.2肝癌癌旁標(biāo)本總ADH、ADHI、ADHII及總ALDH、ALDH2酶活性正態(tài)性檢驗結(jié)果表明,肝癌癌旁組織肝勻漿總ADH、ADHI、ADHII及總ALDH、ALDH2酶活性參數(shù)呈非正態(tài)分布,因此本實驗采用非參數(shù)檢驗進(jìn)行統(tǒng)計分析。74例人肝人肝勻漿總ADH、ADHI、ADHII及總ALDH、ALDH2酶活性中位數(shù)和范圍分別為8.14(1.23~43.07)、1.68(0.73~7.10)、0.53(0.14~1.66)、0.15(0.03~0.34)、9.40(1.45~50.18)pmol·min-1·mg-1protein;差異倍數(shù)分別為35.0、9.8、11.5、12.9、34.7倍。結(jié)果顯示,總ADH、ADHI、ADHII及總ALDH、ALDH2酶活性呈現(xiàn)出較大的個體差異性。2.3正常及肝癌癌旁標(biāo)本總ADH、ADHI、ADHII及總ALDH、ALDH2酶活性差異肝癌癌旁標(biāo)本總ADH、ADHI、ADHII酶活性較正常肝標(biāo)本活性明顯升高(p0.000);肝癌癌旁組織總ALDH酶活性較正常肝標(biāo)本以pmol/min/mg protein為單位時明顯升高,但以pmol/min/g liver為單位時不具有統(tǒng)計學(xué)意義,ALDH2酶活性在兩組標(biāo)本中沒有差異。3相關(guān)酶基因多態(tài)性及對活性的影響3.1正常肝標(biāo)本基因多態(tài)性結(jié)果及對基因多態(tài)性對酶活性的影響ADH1B rs1229984(GA)的突變頻率為29.7%,ADH1C rs698(AG)的突變頻率為10.5%,ADH1C rs2241894(GA)的突變頻率為26.9%。總ADH、ADHI、ADHII酶活性在AA、AG、GG三組中都無顯著的差異性。結(jié)果顯示,在正常肝組織中ADH突變對人肝ADH酶的代謝活性無明顯影響。ALDH2 rs671(AG)的突變頻率為87.3%,ALDH2 rs13306164(CT)的突變頻率為2.2%。對于ALDH2 rs671(AG)突變,突變體GA總ALDH酶活性較野生型低;對于ALDH2 rs13306164(CT)突變,突變體TC總ALDH活性及ALDH2酶活性較野生型高。結(jié)果顯示,在正常肝組織中ALDH突變對人肝ALDH酶的代謝活性有明顯影響。3.2肝癌癌旁標(biāo)本基因多態(tài)性結(jié)果及對基因多態(tài)性對酶活性的影響ADH1B rs1229984(GA)的突變頻率為38.1%,ADH1C rs698(AG)的突變頻率為9.7%,ADH1C rs2241894(GA)的突變頻率為28.4%。ADH1B rs1229984 GG突變純合子、ADH1C rs698 AG突變雜合子及ADH1C rs2241894AG,AA突變體總ADH酶活性較野生型純合子活性明顯降低。ALDH2 rs671(AG)的突變頻率為85.1%,ALDH2 rs13306164(CT)的突變頻率為5.2%。對于ALDH2 rs671(AG)突變,突變體GA總ALDH活性及ALDH2活性較野生型低,ALDH2 rs13306164 CT的突變對ALDH活性及ALDH2酶活性沒有影響。3.3正常及肝癌癌旁標(biāo)本基因多態(tài)性分布的差異ADH1B rs1229984(GA)、ADH1Crs698(AG)、ADH1C rs2241894(GA)、ALDH2 rs671(AG)、ALDH2 rs13306164(CT)基因多態(tài)性在正常及肝癌癌旁標(biāo)本中分布沒有差異。結(jié)論1.人肝總ADH、ADHI、ADHII及總ALDH、ALDH2酶活性呈現(xiàn)出了較大的個體差異。2.肝癌患者癌旁組織總ADH、ADHI、ADHII酶活性明顯比正常肝標(biāo)本相應(yīng)酶活性高,可能是導(dǎo)致肝癌的發(fā)生的因素。3.ADH及ALDH基因多態(tài)性在正常人和肝癌病人中分布沒有差異。4.ALDH2 rs671(AG)及ADH1B rs1229984(GA)、ADH1C rs698(AG)、ADH1C rs2241894(GA)影響乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶的活性。
【關(guān)鍵詞】：正常肝組織 肝癌癌旁組織 ADH ALDH 基因多態(tài)性 酶活性
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要4-9
• Abstract9-15
• 中英文對照縮略詞表15-16
• 前言16-18
• 材料與方法18-26
• 結(jié)果26-47
• 討論47-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-53
• 綜述部分53-72
• 參考文獻(xiàn)68-72
• 個人簡歷及在研期間發(fā)表論文72-73
• 致謝73

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本文編號：1069130