發(fā)布時間：2017-10-18 19:07

  本文關(guān)鍵詞：多肽—脂質(zhì)納米粒子的構(gòu)建及功能研究

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【摘要】：脂質(zhì)體模擬天然的生物膜結(jié)構(gòu),具有優(yōu)越的生物相容性,成為藥物運輸?shù)牧己幂d體。隨著脂質(zhì)體的發(fā)展,各種模擬體內(nèi)天然囊泡結(jié)構(gòu)的脂質(zhì)納米粒子受到人們的關(guān)注。本文首先介紹了傳統(tǒng)脂質(zhì)體的修飾和存在的缺陷,進一步對天然存在的脂質(zhì)囊泡結(jié)構(gòu)脂蛋白進行了詳細描述,并且介紹了模擬脂蛋白的多肽-脂質(zhì)納米粒子的構(gòu)建及應(yīng)用。然后本文詳細介紹了在多肽-脂質(zhì)納米粒子構(gòu)建和功能研究方面的主要工作:(1)通過對多肽進行二價化改造,構(gòu)建以整合方式實現(xiàn)納米粒子形成、表面功能化和疏水化合物包裹的多肽-脂質(zhì)納米粒子組裝平臺;(2)選取陽離子雙親性多肽,研究脂質(zhì)納米粒子的形成以及對多肽性質(zhì)的優(yōu)化。最后,對工作內(nèi)容進行了整體總結(jié)和展望。以下是本論文的兩部分主要研究工作的簡要介紹:1.多功能多肽-脂質(zhì)納米粒子的組裝及細胞靶向輸送本研究構(gòu)建了一種多肽-脂質(zhì)納米粒子平臺,以整合的方式實現(xiàn)納米粒子的組裝、表面功能化和疏水性藥物的裝載。用于組裝脂質(zhì)納米粒子的新型多肽由兩條α螺旋多肽組成,并且通過環(huán)狀結(jié)構(gòu)進行連接,形成ALA結(jié)構(gòu)。這種二價化的結(jié)構(gòu)多肽具有更好的雙螺旋結(jié)構(gòu)和更強的脂質(zhì)包裝能力,并且對疏水性分子(Ir(ppy)2-DIP)具有更穩(wěn)定的裝載能力。在環(huán)狀結(jié)構(gòu)中引入五個組氨酸,構(gòu)建的納米粒子可以與Ni柱相互作用,說明環(huán)狀結(jié)構(gòu)展示于脂質(zhì)納米粒子的表面,可以行使功能。接下來,引入具有整合素靶向功能的RGD序列,構(gòu)建的脂質(zhì)納米粒子將Ir(ppy)2-DIP化合物選擇性的輸送進整合素高表達的腫瘤細胞,大大降低對非腫瘤細胞的毒性作用。進一步研究證明,完整的環(huán)狀結(jié)構(gòu)保證RGD序列的充分暴露和靶向功能的行使。2.陽離子雙親性多肽-脂質(zhì)納米粒子的構(gòu)建及細胞毒性和體外穩(wěn)定性的研究我們選取陽離子雙親性多肽R多肽(RLARLLRRLARWLR)進行多肽-脂質(zhì)納米粒子的構(gòu)建。R多肽可以快速與脂質(zhì)乳濁液相互作用促進納米粒子的形成,并且疏水性部分嵌入到脂質(zhì)納米粒子的疏水核心,引起色氨酸熒光光譜發(fā)生藍移。構(gòu)建的R-LNP(R多肽-脂質(zhì)納米粒子)的粒徑為14.7±0.1 nm、zeta電位為17.8 mV,單分散性好,粒徑均一。進一步通過MTT實驗研究R-LNP對腫瘤細胞的殺傷作用,實驗證明R-LNP對A549和MCF-7細胞的半抑制濃度為5.93±0.75μM、4.36±0.40μM,保留R多肽細胞毒性作用。最后,通過UPLC分析得知,R-LNP大大增強了R多肽對糜蛋白酶和胰蛋白酶的抗性,提高了多肽的穩(wěn)定性。
【關(guān)鍵詞】：脂質(zhì)體 脂蛋白 多肽-脂質(zhì)納米粒子 靶向 陽離子雙親性多肽
【學(xué)位授予單位】：上海大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R94
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 第一章 緒論12-36
• 1.1 傳統(tǒng)脂質(zhì)體表面功能化簡介12-18
• 1.1.1 多聚物的修飾12-16
• 1.1.2 靶向分子的修飾16-18
• 1.2 天然脂蛋白的結(jié)構(gòu)及應(yīng)用18-25
• 1.2.1 低密度脂蛋白的結(jié)構(gòu)和應(yīng)用19-21
• 1.2.2 高密度脂蛋白的結(jié)構(gòu)及應(yīng)用21-25
• 1.3 載脂蛋白的結(jié)構(gòu)及其模擬肽25-29
• 1.3.1 Apo B-100的結(jié)構(gòu)及其模擬肽25-27
• 1.3.2 Apo A-I的結(jié)構(gòu)及其模擬肽27-29
• 1.4 多肽-脂質(zhì)納米粒子（PLNP）的構(gòu)建及應(yīng)用29-34
• 1.4.1 LDL型多肽-脂質(zhì)納米粒子的構(gòu)建及應(yīng)用30
• 1.4.2 HDL型多肽-脂質(zhì)納米粒子的構(gòu)建及應(yīng)用30-34
• 1.5 課題研究的目的及研究內(nèi)容34-36
• 第二章 多功能多肽-脂質(zhì)納米粒子的組裝及細胞靶向輸送36-65
• 2.1 前言36-38
• 2.2 實驗部分38-43
• 2.2.1 實驗試劑和藥品38-39
• 2.2.2 多肽-脂質(zhì)納米粒子的制備39
• 2.2.3 快速蛋白液相色譜（FPLC）分析39
• 2.2.4 TEM觀察和DLS測量39
• 2.2.5 圓二色譜實驗39-40
• 2.2.6 多肽和DMPC利用率的測量40
• 2.2.7 Ir(ppy)_2-DIP包封效果的評價和包封率的計算40-41
• 2.2.8 Ir(ppy)_2-DIP的體外釋放41
• 2.2.9 鎳螯合親和層析柱實驗41
• 2.2.10 溶血實驗41
• 2.2.11 細胞株和細胞培養(yǎng)41-42
• 2.2.12 HLF細胞的轉(zhuǎn)染42
• 2.2.13 細胞毒性分析42
• 2.2.14 入胞實驗42-43
• 2.3 實驗結(jié)果和討論43-64
• 2.3.1 多肽的合成與表征43-52
• 2.3.2 ALA-LNPs的制備和表征52-56
• 2.3.3 Ir(ppy)_2-DIP在LNP中的包裹及穩(wěn)定性的判定56-57
• 2.3.4 ALA-LNPs環(huán)狀結(jié)構(gòu)暴露于脂質(zhì)納米顆粒表面的驗證57-59
• 2.3.5 A(RGD)A LNP(Ir)的選擇性細胞殺傷功能59-61
• 2.3.6 A(RGD)A-LNP(Nile red)的選擇性入胞61-62
• 2.3.7 A(RGD)A LNP(Ir)多肽環(huán)狀結(jié)構(gòu)的研究62-64
• 2.4 本章小結(jié)64-65
• 第三章 陽離子雙親性多肽-脂質(zhì)納米粒子的構(gòu)建及細胞毒性和體外穩(wěn)定性的研究65-75
• 3.1 引言65-66
• 3.2 實驗部分66-67
• 3.2.1 實驗材料66
• 3.2.2 多肽定量66
• 3.2.3 脂質(zhì)納米粒子的制備66
• 3.2.4 脂質(zhì)乳濁液清除實驗66
• 3.2.5 色氨酸熒光光譜藍移實驗66-67
• 3.2.6 TEM檢測67
• 3.2.7 DLS和zeta電位的檢測67
• 3.2.8 細胞培養(yǎng)67
• 3.2.9 細胞毒性檢測67
• 3.2.10 穩(wěn)定性檢測67
• 3.3 實驗結(jié)果與討論67-74
• 3.3.1 R多肽的合成和表征68-70
• 3.3.2 R多肽與脂質(zhì)相互作用分析70
• 3.3.3 R-LNP的形貌和表面性質(zhì)70-71
• 3.3.4 R-LNP的細胞毒性檢測71-72
• 3.3.5 R-LNP穩(wěn)定性檢測72-74
• 3.4 本章小結(jié)74-75
• 第四章 論文的主要結(jié)論及展望75-78
• 4.1 論文主要結(jié)論75
• 4.2 展望75-78
• 參考文獻78-91
• 作者在攻讀碩士學(xué)位期間公開發(fā)表的論文91-92
• 致謝92

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 潘廣瑞;趙暉;;抗菌肽在腫瘤方面的研究進展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2015年18期

2 王若寧;劉聰燕;周建平;陳鍵;王偉;;脂蛋白納米藥物傳輸系統(tǒng)研究進展[J];中國藥科大學(xué)學(xué)報;2014年01期

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本文編號：1056621