研究背景糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy,DR)視力損害的主要原因?yàn)樘悄虿⌒渣S斑水腫(diabetic macular edema,DME)和增生性糖尿病視網(wǎng)膜病變(proliferative diabetic retinopathy,PDR)。多種生長(zhǎng)因子及炎癥因子參與DR的發(fā)病機(jī)制,其中,血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在DR,尤其是在DME和PDR的發(fā)展過程中有重要作用。DR初期視網(wǎng)膜缺血缺氧可以誘導(dǎo)VEGF高表達(dá),同時(shí),VEGF可以增加視網(wǎng)膜血管通透性,引起視網(wǎng)膜微血管滲漏,促進(jìn)新生血管形成,加重DR病變,因而抗VEGF治療已成為治療DR的方法之一,對(duì)于需要行玻璃體切除術(shù)治療的PDR患者,尤其是伴有黃斑水腫者,進(jìn)行抗VEGF預(yù)處理亦是一項(xiàng)積極有效的治療方案。骨膜蛋白(periostin,PN)是一種細(xì)胞外基質(zhì)蛋白,可與細(xì)胞外其他基質(zhì)成分相互作用,促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)沉積,參與多種組織的纖維化過程。國(guó)外研究發(fā)現(xiàn),玻璃體中PN異常表達(dá)于多種玻璃體視網(wǎng)膜疾病,如PDR、增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變(proliferative vitreoretinopathy,PVR)等,有望成為眼部疾病的生物學(xué)標(biāo)志物或治療靶點(diǎn)。有關(guān)DR的相關(guān)研究顯示,PN主要與PDR患者玻璃體中纖維血管膜(fibrovascular membranes,FVMs)的形成密切相關(guān)。腫瘤相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),PN可以促進(jìn)VEGF的表達(dá),然而,PN和VEGF在DR早期視網(wǎng)膜中表達(dá)情況尚無(wú)相關(guān)研究。本次動(dòng)物實(shí)驗(yàn)利用Sprague-Dawley(SD)大鼠進(jìn)行鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射建立糖尿病模型,對(duì)其視網(wǎng)膜中PN、VEGF的動(dòng)態(tài)表達(dá)及表達(dá)位置進(jìn)行檢測(cè),探索PN、VEGF在早期糖尿病模型視網(wǎng)膜中的表達(dá)和意義。目的通過高脂高糖飲食聯(lián)合STZ腹腔注射建立糖尿病模型,分別在STZ注射前、后對(duì)大鼠視網(wǎng)膜進(jìn)行HE染色,免疫熒光染色和Western Blot檢測(cè),研究PN、VEGF在早期DR視網(wǎng)膜中的動(dòng)態(tài)表達(dá)及相互關(guān)系,進(jìn)一步探索DR的發(fā)病機(jī)制,為DR的早期干預(yù)及治療提供理論依據(jù)。方法成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為2組:CON組和DM組。CON組大鼠給予普通飼料喂養(yǎng),DM組大鼠給予高脂高糖飼料喂養(yǎng),4周后DM組大鼠行STZ溶液腹腔注射,CON組大鼠行等量檸檬酸緩沖液腹腔注射。每?jī)芍軝z測(cè)兩組大鼠的體重和血糖。分別在STZ注射前(CON1組、DM1組)、STZ注射后5周(CON2組、DM2組)和STZ注射后10周(CON3組、DM3組)對(duì)兩組大鼠眼球進(jìn)行HE染色、免疫熒光染色,并通過Western Blot方法檢測(cè)視網(wǎng)膜中PN、VEGF蛋白含量及變化規(guī)律。結(jié)果1、HE染色發(fā)現(xiàn)CON組大鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)緊密,細(xì)胞形態(tài)正常,DM1組大鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)與CON組相似;DM2組大鼠視網(wǎng)膜組織疏松、水腫,細(xì)胞排列紊亂,并且隨著病程的延長(zhǎng),視網(wǎng)膜病理改變?cè)矫黠@;DM3組可見視網(wǎng)膜血管樣結(jié)構(gòu)增多,偶見毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞突出內(nèi)界膜。2、免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)DM組大鼠視網(wǎng)膜中PN、VEGF染色較CON組增強(qiáng),DM組大鼠視網(wǎng)膜中VEGF主要表達(dá)于視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層及內(nèi)核層,PN主要表達(dá)于視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層。3、Western blot結(jié)果顯示CON1組、CON2組、CON3組、DM1組、DM2組、DM3組糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中PN相對(duì)含量分別0.222±0.018、0.206±0.026、0.197±0.028、0.257±0.030、0.348±0.031、0.596±0.021,VEGF相對(duì)含量分別0.724±0.027、0.668±0.029、0.670±0.064、0.781±0.062、1.053±0.063、1.479±0.080,DM組PN、VEGF相對(duì)含量高于CON組,并且DM2、DM3組與其余組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4、對(duì)CON組和DM組中PN、VEGF進(jìn)行相關(guān)性分析顯示,DM組PN和VEGF存在正相關(guān)(r=0.975,P0.05),提示PN和VEGF可能通過相互作用促進(jìn)早期DR的發(fā)展。結(jié)論1、PN主要分布于DM組的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層,VEGF主要分布于DM組的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)核層,PN、VEGF在糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中存在共表達(dá)。2、DR早期視網(wǎng)膜中PN、VEGF表達(dá)量即有增加,隨著病程加重,視網(wǎng)膜中PN和VEGF含量逐漸增多,提示PN、VEGF參與DR的發(fā)生、發(fā)展。3、DM組大鼠視網(wǎng)膜中PN和VEGF高度相關(guān),提示PN、VEGF可能通過相互作用促進(jìn)早期DR的發(fā)生。
【學(xué)位單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R587.2;R774.1
【部分圖文】：

結(jié) 果大鼠體重、血糖指標(biāo)變化組大鼠每日飲水量少，尿量少，毛色光滑，體質(zhì)量隨周齡增驗(yàn)過程中無(wú)死亡大鼠；36 只糖尿病大鼠腹腔注射 STZ 72h 后未達(dá)標(biāo)，因而再次腹腔注射 STZ，72h 后復(fù)測(cè)血糖均達(dá)成模標(biāo)模后第 2 周即出現(xiàn)多飲、多食、多尿等糖尿病癥狀，體質(zhì)量增，DM2 組和 DM3 組各有 1 只大鼠因消瘦、進(jìn)食困難死亡。兩變化情況見圖 1.1，兩組大鼠血糖隨時(shí)間變化情況見圖 1.2。

驗(yàn)過程中無(wú)死亡大鼠；36 只糖尿病大鼠腹腔注射 STZ 72h 后未達(dá)標(biāo)，因而再次腹腔注射 STZ，72h 后復(fù)測(cè)血糖均達(dá)成模標(biāo)模后第 2 周即出現(xiàn)多飲、多食、多尿等糖尿病癥狀，體質(zhì)量增，DM2 組和 DM3 組各有 1 只大鼠因消瘦、進(jìn)食困難死亡。兩變化情況見圖 1.1，兩組大鼠血糖隨時(shí)間變化情況見圖 1.2。圖 1.1 兩組大鼠體重隨時(shí)間變化情況

HE染色（×400）
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 龍婷;陳佳;杜磊;邢怡橋;;增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變的手術(shù)治療進(jìn)展[J];國(guó)際眼科雜志;2017年11期

2 尹妮;趙帥;朱紅娜;;康柏西普預(yù)處理聯(lián)合玻璃體切割術(shù)治療增生型糖尿病視網(wǎng)膜病變[J];眼科新進(jìn)展;2017年08期

3 賈明利;李慶雨;;VEGF、bFGF在糖尿病視網(wǎng)膜病變中的表達(dá)及意義[J];中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥;2017年21期

4 趙夢(mèng)雅;許迅;;伴脂代謝紊亂的糖尿病視網(wǎng)膜病變研究進(jìn)展[J];中華實(shí)驗(yàn)眼科雜志;2017年07期

5 朱華;李彥紅;徐艷峰;徐玉環(huán);許慶剛;尹紅霞;秦川;;小劑量多次注射鏈脲佐菌素建立糖尿病早期視網(wǎng)膜病變動(dòng)物模型[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào);2016年05期

6 張文博;聶紅平;;糖尿病視網(wǎng)膜病變與炎癥研究進(jìn)展[J];中國(guó)糖尿病雜志;2016年05期

7 殷成坤;劉燕;李曉霞;彭佳玉;黨旺;羅城;胡濤;傅澤宇;文曉紅;;高脂飲食聯(lián)合STZ建立2型糖尿病大鼠模型穩(wěn)定性觀察[J];川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2016年02期

8 蘇力擔(dān)卡扎·仇曼;何鐵英;林海;韓瑋;程坤;陳啟龍;;鏈脲佐菌素建立1型糖尿病大鼠模型的最優(yōu)劑量研究[J];中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志;2016年01期

9 侯清濤;李蕓;李舍予;田浩明;;全球糖尿病疾病負(fù)擔(dān)現(xiàn)狀[J];中國(guó)糖尿病雜志;2016年01期

10 陳小紅;王云鵬;陳梅珠;;VEGF在糖尿病性視網(wǎng)膜病變發(fā)病機(jī)制中的作用及抗VEGF治療新進(jìn)展[J];眼科新進(jìn)展;2015年07期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 李云霞;白藜蘆醇及雌二醇延緩STZ所致卵巢切除鼠糖尿病發(fā)生的分子機(jī)制研究[D];蘭州大學(xué);2017年

本文編號(hào)：2837479