【摘要】：一、LncRNA-MEG3在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中的表達(dá)目的:檢測IncRNA-MEG3在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織及細(xì)胞中的表達(dá)。方法:qRT-PCR檢測21例視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織與瘤旁正常組織、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞(Weri-Rb1、Y79)與正常視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(hTERT RPE-1)中l(wèi)ncRNA-MEG3 的表達(dá)。結(jié)果:視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織中IncRNA-MEG3的表達(dá)顯著低于瘤旁正常組織,Weri-Rb1、Y79細(xì)胞中IncRNA-MEG3的表達(dá)顯著低于hTERT RPE-1細(xì)胞。結(jié)論:LncRNA-MEG3在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織及細(xì)胞中均為低表達(dá)。二、LncRNA-MEG3對視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞功能的影響目的:檢測Weri-Rb1、Y79細(xì)胞中IncRNA-MEG3表達(dá)量對細(xì)胞功能的影響。方法:用 pcDNA-MEG3 或 si-MEG3 轉(zhuǎn)染 Weri-Rb1 或 Y79 細(xì)胞后,CCK-8實驗及流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞增殖、凋亡能力。結(jié)果:轉(zhuǎn)染pcDNA-MEG3的Weri-Rb1細(xì)胞增殖顯著減弱,凋亡顯著增加;轉(zhuǎn)染si-MEG3的Y79細(xì)胞增殖顯著增強(qiáng),凋亡顯著降低。結(jié)論:LncRNA-MEG3在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中發(fā)揮抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用。三、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞MEG3基因啟動子DNA甲基化狀態(tài)對lncRNA-MEG3表達(dá)及細(xì)胞功能的影響目的:檢測視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織及細(xì)胞MEG3基因啟動子DNA甲基化狀態(tài),探討其與IncRNA-MEG3表達(dá)量及細(xì)胞功能之間的關(guān)系。方法:MS-PCR檢測21例視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織、瘤旁正常組織、Weri-Rb1、Y79細(xì)胞MEG3基因啟動子DNA甲基化狀態(tài)及IncRNA-MEG3表達(dá)量。5-Aza-CdR處理細(xì)胞后,檢測IncRNA-MEG3表達(dá)量、細(xì)胞增殖及凋亡能力。5-Aza-CdR和siRNA-MEG3共同干預(yù)后,檢測細(xì)胞增殖、凋亡能力。結(jié)果:視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織中MEG3基因啟動子DNA處于甲基化狀態(tài)的比例顯著高于瘤旁正常組織,甲基化組lncRNA-MEG3表達(dá)量顯著低于部分甲基化組及非甲基化組;Weri-Rb1、Y79細(xì)胞MEG3基因啟動子DNA處于甲基化狀態(tài);用5-Aza-CdR處理后,lncRNA-MEG3表達(dá)量顯著增高,細(xì)胞增殖顯著減弱,凋亡顯著增加;經(jīng)5-Aza-CdR和si-MEG3共同干預(yù)后,5-Aza-CdR抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡的能力均被逆轉(zhuǎn)。結(jié)論:LncRNA-MEG3在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中低表達(dá)與MEG3基因啟動子DNA過甲基化有關(guān)。四、LncRNA-MEG3在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中對Wnt/β-catenin信號通路活性的調(diào)控目的:探討在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中IncRNA-MEG3是否可通過調(diào)節(jié)Wnt/β-catenin信號通路活性而發(fā)揮作用。方法:用pcDNA-MEG3或si-MEG3轉(zhuǎn)染W(wǎng)eri-Rb1、Y79細(xì)胞后,用TOP-Flash reporter 實驗檢測 Wnt/β-catenin 信號通路活性,Western blot 實驗檢測β-catenin蛋白表達(dá)量;Wnt/β-catenin信號通路激活劑或拮抗劑與pcDNA-MEG3 或 si-MEG3 共同轉(zhuǎn)染 Weri-Rb1、Y79 細(xì)胞后,檢測 β-catenin 蛋白表達(dá)量、細(xì)胞增殖及凋亡能力。結(jié)果:轉(zhuǎn)染pcDNA-MEG3的Weri-Rb1細(xì)胞,熒光素酶活性、β-catenin蛋白表達(dá)量均顯著降低;轉(zhuǎn)染si-MEG3的Y79細(xì)胞,熒光素酶活性、β-catenin蛋白表達(dá)量均顯著增強(qiáng);激活Wnt/β-catenin信號通路活性后,pcDNA-MEG3對Weri-Rb1細(xì)胞的抑癌作用被逆轉(zhuǎn);抑制Wnt/β-catenin信號通路活性后,si-MEG3對Y79細(xì)胞的促癌作用被逆轉(zhuǎn)。結(jié)論:LncRNA-MEG3在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中可通過抑制Wnt/β-catenin信號通路活性而發(fā)揮作用。
【圖文】：

胞瘤組織及其相應(yīng)的瘤旁正常視網(wǎng)膜組織中ｌｎＣＲＮＡ－ＭＥＧ３的表達(dá)水平，以逡逑Ｐ－ａｃｔｉｎ作為內(nèi)參對照。實驗結(jié)果顯示ｌｎｃＲＮＡ－ＭＥＧ３在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織中逡逑的表達(dá)水平顯著低于瘤旁正常視網(wǎng)膜組織（Ｐ＜0．0５，圖１－１），表明在視網(wǎng)膜母逡逑細(xì)胞瘤組織中，，ｌｎｃＲＮＡ－ＭＥＧ３的表達(dá)水平較其相應(yīng)瘤旁正常視網(wǎng)膜組織顯著逡逑降低，ｌｎｃＲＮＡ－ＭＥＧ３處于低表達(dá)狀態(tài)。逡逑ｃ邋１．５￣ｉ逡逑0逡逑0逡逑｜邋１．０－邐逡逑0逡逑Ｓ邐女逡逑ＬＵ邐Ｉ逡逑２邋０．５－逡逑＞逡逑0＞邐？蕾詹~枺歟眨闉靛義希危錚潁恚幔戾危裕酰恚錚蟈義賢跡保卞澹瘢遙裕校茫壹觳饈油つ趕赴鱟櫓捌湎嚶Φ牧讎哉Ｊ油ぷ櫓繡義希歟睿悖遙危粒停牛牽車謀澩鎪健＝峁允臼油つ趕赴鱟櫓校歟睿悖遙危粒停牛牽車謀澩鎪藉義舷災(zāi)陀諏讎哉Ｊ油ぷ櫓�，＊Ｐ＜邋０．０５。辶x希疲椋紓澹保卞澹裕瑁邋澹澹穡潁澹螅螅椋錚鑠澹錚駑澹歟睿悖遙危粒停牛牽沖澹椋鑠澹潁澹簦椋睿錚猓歟幔螅簦錚恚徨澹簦椋螅螅酰澹澹簀澹幔睿溴澹簦瑁澹椋蟈義希悖錚潁潁澹螅穡錚睿洌椋睿玨澹幔洌輳幔悖澹睿翦澹睿錚睿簦酰恚錚蟈澹潁澹簦椋睿徨澹簦椋螅螅酰澹簀澹鰨澹潁邋澹洌澹簦澹悖簦澹溴澹猓澹瘢遙裕校茫遙澹裕瑁邋澹澹穡潁澹螅螅椋錚鑠義希常峰義

本文編號：2673323