本文關(guān)鍵詞：CTRP9對巨噬細(xì)胞炎癥因子表達(dá)的影響及機(jī)制研究

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【摘要】：1研究背景動脈粥樣硬化性心血管疾病(ASCVD)是我國及世界范圍內(nèi)致死、致殘的首要原因,且其發(fā)病率、死亡率仍處于增長趨勢。ASCVD的病理基礎(chǔ)是動脈粥樣硬化(AS),迄今為止,其病理生理機(jī)制仍未被完全揭示。眾多證據(jù)表明AS是脂質(zhì)代謝紊亂和炎癥性血管疾病。斑塊內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂和炎癥反應(yīng)這兩個(gè)病理因素互相影響,促進(jìn)AS進(jìn)展。其中,巨噬細(xì)胞在AS中扮演著重要的角色。荷脂的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生并釋放大量的炎性細(xì)胞因子,參與AS發(fā)生發(fā)展的各個(gè)階段。因此,抑制斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)對延緩AS的發(fā)生發(fā)展具有重要意義。C1q/腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白9 (CTRP9)是近年發(fā)現(xiàn)的新型脂肪細(xì)胞因子,隸屬于C1q腫瘤壞死因子超家族(Clq/TNF-related proteins, CTRPs)。目前研究顯示,CTRP9在調(diào)節(jié)代謝、保護(hù)心肌、改善內(nèi)皮功能及抵抗糖尿病心血管損害等方面發(fā)揮重要作用。本課題組前期研究顯示,CTRP9可增加動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性并抑制斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)。然而,CTRP9抑制巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)的機(jī)制尚不明確。因此,本研究將對CTRP9對巨噬細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)和機(jī)制進(jìn)行深入探討。2研究目的(1)研究CTRP9對巨噬細(xì)胞炎癥因子表達(dá)的影響；(2)探討CTRP9在巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的作用機(jī)制。3材料和方法3.1細(xì)胞培養(yǎng)與處理(1)以小鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞為研究對象。將細(xì)胞以DMEM+10%胎牛血清+1%雙抗配制成的完全培養(yǎng)基于37℃、50%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。(2)實(shí)驗(yàn)采用濃度為100ug/ml的氧化低密度脂蛋白(oxLDL)刺激巨噬細(xì)胞建立炎癥模型。實(shí)驗(yàn)以CTRP9球狀結(jié)構(gòu)域重組蛋白(gCTRP9)預(yù)處理細(xì)胞,在完全培養(yǎng)基或oxLDL刺激下,檢測相關(guān)因子的表達(dá)差異。3.2 Real-time PCR提取各組細(xì)胞mRNA。檢測炎癥因子TNF-α、MCP-1的mRNA水平。3.3 Western blot提取各組細(xì)胞總蛋白和／或核蛋白。檢測TNF-α、MCP-1、NF-κB、AMPK、 AdipoR1的表達(dá)。3.4細(xì)胞免疫熒光制作各組細(xì)胞爬片。激光共聚焦顯微鏡下觀察TNF-α、MCP-1及AdipoRl的表達(dá)以及NF-κB的核轉(zhuǎn)位情況。3.5 AdipoRl siRNA轉(zhuǎn)染篩選出抑制效果最優(yōu)的AdipoRl siRNA序列。以Lipo2000轉(zhuǎn)染巨噬細(xì)胞后,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。3.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析以SPSS 13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,所有數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。以單因素方差分析(ANOVA)進(jìn)行多組間統(tǒng)計(jì)分析。P0.05被認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4結(jié)果4.1 CTRP9可抑制巨噬細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)Western blot結(jié)果顯示,與對照組比較,oxLDL可增加炎癥因子TNF-α和MCP-1的表達(dá)(p0.05)；與oxLDL組相比,gCTRP9可濃度依賴性地降低TNF-α和MCP-1的表達(dá)(p0.05)。同時(shí),RT-PCR和激光共聚焦成像結(jié)果顯示,gCTRP9可顯著抑制oxLDL誘導(dǎo)的TNF-α和MCP-1的mRNA和蛋白的表達(dá)(p0.05)。4.2 CTRP9可抑制巨噬細(xì)胞NF-κB的活化Western blot結(jié)果顯示,與對照組比較,oxLDL可提高NF-κB的磷酸化水平(p0.05)；與oxLDL組相比,gCTRP9可顯著降低NF-κB的磷酸化水平(p0.05)。Western blot及激光共聚焦成像顯示,跟對照組相比,oxLDL可促進(jìn)NF-κB的核轉(zhuǎn)位(p0.05),而gCTRP9可抑制oLDL誘導(dǎo)的細(xì)胞核NF-κB的表達(dá)(p0.05)。4.3 CTRP9在巨噬細(xì)胞中的抗炎作用依賴于AMPK磷酸化Western blot結(jié)果顯示,gCTRP9可明顯提高AMPK的磷酸化水平(p0.05)；而AMPK的抑制劑Compound C (Com C)顯著抑制gCTRP9引起的AMPK的磷酸化(p0.05)。 Western blot結(jié)果顯示,與gCTRP9+oxLDL組比較,Com C取消了gCTRP9對炎癥因子TNF-α和MCP-1的抑制效果(p0.05)；與gCTRP9+oxLDL組比較,Com C取消了gCTRP9對NF-κB的抑制效果(p0.05)。4.4 AdipoR1介導(dǎo)了CTRP9在巨噬細(xì)胞中的抗炎作用Western blot結(jié)果顯示,與對照組比較,oxLDL不影響AdipoR1的表達(dá)；與oxLDL組比較,gCTRP9可增加AdipoR1的表達(dá)(p0.05)；同時(shí),激光共聚焦成像結(jié)果顯示,與oxLDL組比較,gCTRP9可顯著增加細(xì)胞膜表面AdipoR1的表達(dá)(p0.05)。Western blot結(jié)果顯示,與對照組相比,AdipoR1 siRNA可抑制gCTRP9引起的AMPK磷酸化(p0.05)；與對照組比較,AdipoR1 siRNA取消了gCTRP9對炎癥因子TNF-α和MCP-1的抑制效果(p0.05)。5結(jié)論(1) CTRP9可以增加巨噬細(xì)胞AdipoR1的表達(dá)水平；(2) CTRP9可以通過AdipoR1/AMPK/NF-κB通路抑制巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)。
【關(guān)鍵詞】：C1q/腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白9 炎癥 巨噬細(xì)胞 腺苷酸活化蛋白激酶 脂聯(lián)素受體1
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R543.5
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 符號說明13-15
• 前言15-18
• 材料與方法18-37
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果37-40
• 討論40-43
• 創(chuàng)新點(diǎn)和限制性43-44
• 結(jié)論44-45
• 附圖45-50
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 致謝54-55
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文55-56
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表56

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1 ;豚鼠巨噬細(xì)胞經(jīng)P_(204)處理后的抗石英細(xì)胞毒作用[J];國外醫(yī)學(xué)參考資料(衛(wèi)生學(xué)分冊);1976年04期

2 鄧俠進(jìn);;巨噬細(xì)胞的抗癌作用[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1979年02期

3 陸天才;;疾病對肺巨噬細(xì)胞的影響[J];煤礦醫(yī)學(xué);1982年01期

4 郭瑞清;祝彼得;;一種分離巨噬細(xì)胞的簡單方法[J];濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1990年02期

5 謝志堅(jiān);巨噬細(xì)胞異質(zhì)性[J];醫(yī)學(xué)綜述;2001年06期

6 饒艷;運(yùn)動及神經(jīng)內(nèi)分泌對巨噬細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)[J];體育與科學(xué);2002年05期

7 朱金元;;吸煙對肺巨噬細(xì)胞的影響[J];浙江醫(yī)學(xué)教育;2003年01期

8 張俊峰;過氧化物酶體增殖物激活受體與單核/巨噬細(xì)胞系[J];醫(yī)學(xué)綜述;2004年03期

9 韋錦學(xué);顧軍;;巨噬細(xì)胞的激活誘導(dǎo)死亡[J];生命科學(xué);2006年02期

10 李曉曦;郭寧;曹雪濤;;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞促進(jìn)腫瘤生長與轉(zhuǎn)移的研究現(xiàn)狀[J];中國腫瘤生物治療雜志;2008年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 史玉玲;王又明;豐美福;;巨噬細(xì)胞激活作用的研究[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

2 吳國明;周輝;;巨噬細(xì)胞和創(chuàng)傷纖維化[A];2009年浙江省骨科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

3 李奇;王海杰;;透明質(zhì)酸對于淋巴結(jié)巨噬細(xì)胞運(yùn)動的影響[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

4 劉革修;歐大明;劉軍花;黃紅林;廖端芳;;丙丁酚在體外能抑制巨噬細(xì)胞脂質(zhì)氧化介導(dǎo)的低密度脂蛋白氧化并調(diào)節(jié)氧化巨噬細(xì)胞的分泌功能[A];面向21世紀(jì)的科技進(jìn)步與社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展（下冊）[C];1999年

5 葉金善;楊麗霞;郭瑞威;;環(huán)氧化酶-2/前列腺素E_2在血管緊張素Ⅱ刺激巨噬細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子中的作用[A];第十三次全國心血管病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

6 秦帥;陳希;孔德明;;構(gòu)建由綠色熒光標(biāo)記巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因斑馬魚系[A];貴州省中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)分泌代謝學(xué)術(shù)會論文匯編[C];2012年

7 武劍華;徐惠綿;;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在胃癌中的相關(guān)研究[A];第9屆全國胃癌學(xué)術(shù)會議暨第二屆陽光長城腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2014年

8 何軍;;血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體升高巨噬細(xì)胞內(nèi)膽固醇水平[A];中華醫(yī)學(xué)會第11次心血管病學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

9 宋盛;周非凡;邢達(dá);;PDT誘導(dǎo)的凋亡細(xì)胞對巨噬細(xì)胞NO合成的影響[A];第七屆全國光生物學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2010年

10 張磊;朱建華;黃元偉;姚航平;;血管緊張素Ⅱ?qū)奘杉?xì)胞(THP-1重細(xì)胞)凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體表達(dá)的影響[A];浙江省免疫學(xué)會第五次學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2004年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 通訊員 李靜 記者 胡德榮;惡性腫瘤巨噬細(xì)胞未必皆“惡人”[N];健康報(bào);2014年

2 蘭克;以嘗試用巨噬細(xì)胞治癱瘓[N];科技日報(bào);2000年

3 薛佳;免疫系統(tǒng)——人體的“衛(wèi)士”[N];保健時(shí)報(bào);2009年

4 記者 胡德榮;鐵泵蛋白“維穩(wěn)”鐵代謝作用首次闡明[N];健康報(bào);2011年

5 侯嘉 何新鄉(xiāng);硒的神奇功能[N];中國食品質(zhì)量報(bào);2003年

6 唐穎 倪兵 陳代杰;巨噬細(xì)胞泡沫化抑制劑研究快步進(jìn)行[N];中國醫(yī)藥報(bào);2006年

7 劉元江;新發(fā)現(xiàn)解釋腫瘤為何易成“漏網(wǎng)之魚”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

8 本報(bào)記者 侯嘉 通訊員 何新鄉(xiāng);今天你補(bǔ)硒了嗎[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

9 左志剛;升血小板藥使用注意[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2007年

10 記者 許琦敏;“鐵泵”蛋白幫助回收鐵元素[N];文匯報(bào);2011年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周赤燕;巨噬細(xì)胞MsrA對動脈粥樣硬化的干預(yù)研究[D];武漢大學(xué);2013年

2 章桂忠;TIPE2蛋白調(diào)控細(xì)胞增殖和炎癥的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

3 張瑜;DKK1抑制巨噬細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積及其相關(guān)分子機(jī)制[D];山東大學(xué);2015年

4 孟濤;異丙酚對心臟收縮功能的抑制作用及其對巨噬細(xì)胞分泌功能調(diào)節(jié)的機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

5 周興;基于酵母微囊構(gòu)建新型口服巨噬細(xì)胞靶向遞送系統(tǒng)的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 蔣興偉;Tim-3對巨噬細(xì)胞極化的調(diào)控機(jī)制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

7 劉伯玉;清道夫受體A介導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬鉤端螺旋體研究[D];上海交通大學(xué);2013年

8 楊紹俊;miRNA-155介導(dǎo)ESAT-6誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制及其在結(jié)核診斷中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 翟光耀;單核/巨噬細(xì)胞Ly6C~(low)亞群在心肌梗死后瘢痕形成期的抗炎特性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

10 韓露;TRB3介導(dǎo)的脂肪組織巨噬細(xì)胞極化與糖尿病冠狀動脈病變關(guān)系的研究[D];山東大學(xué);2015年

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1 馬春梅;AP0E~(-/-)小鼠TLR9介導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化效應(yīng)對動脈粥樣硬化作用的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

2 張譯丹;鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑調(diào)控巨噬細(xì)胞表型對實(shí)驗(yàn)性矽肺的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 盧文冉;HCV core蛋白作用的巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清對肝細(xì)胞生物學(xué)性狀的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 李文建;載脂蛋白E影響巨噬細(xì)胞因子表達(dá)及分型的機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 曹爽;高糖對巨噬細(xì)胞TLR4信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)節(jié)作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

6 寧程程;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞在子宮內(nèi)膜癌雌激素敏感性中的作用及機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

7 高龍;PLD4在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞抑制結(jié)腸癌增殖中的作用研究[D];成都醫(yī)學(xué)院;2015年

8 任虹;感染期子宮頸癌U14細(xì)胞荷瘤小鼠抑制巨噬細(xì)胞CCL5分泌的機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

9 李美玲;雙酚A對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞極化影響的體外研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2015年

10 劉瓊;黃芪多糖影響巨噬細(xì)胞向脂肪細(xì)胞趨化的作用及機(jī)制研究[D];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院;2015年

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本文編號：728447